中藥毒性的研究方法解析

趙國平 錢三旗 暨南大學醫(yī)學院　 何清湖 湖南中醫(yī)藥大學

中藥毒性的內涵應包括單味藥毒性和配伍后的毒性兩方面。在本草文獻中，毒有四個意義：一指藥物的總稱，如《景岳全書》云“凡可辟邪安正者，皆可稱為毒藥”；二指藥物的偏性，如《類經》：“藥以治病，因毒為能，所謂毒藥，以氣味之有偏也”；三指藥物作用的強弱不同，《素問·五常政大論》根據藥物偏性的大小和作用的強弱，提出了“大毒治病，十去其六，常毒治病，十去其七，小毒治病，十去其八，無毒治病，十去其九”；四指藥物的毒副作用。我們所說的中藥毒性是指藥物對機體的損害性，包括急性、亞急性、慢性和特殊毒性（致癌、突變、致畸胎等）；同時還包括了中藥的副作用即在常用劑量時藥物出現與治療需要無關的不適反應。傳統(tǒng)的中藥文獻對中藥毒性的分級有三級和四級之分，三級分類的如新世紀《中藥學》教材、《中國藥典》2005版、《中藥大辭典》第一、二版，將中藥毒性大毒、有毒、小毒；而《有毒中藥大辭典》則分為劇毒、大毒、有毒、小毒四類。中藥毒性研究一般有以下方法。

有毒成分及毒理研究方法 是中藥毒性研究最常用的方法。主要是在中藥成分中提取、分離毒性成分，進行相關毒性實驗，如在含生物堿的中藥中已知的有毒成分有：川烏、草烏、附子、天雄、雪上一枝蒿等品種中的烏頭堿；雷公藤和昆明山海棠中的雷公藤堿；馬錢子中的番木鱉堿；曼陀羅、洋金花的莨菪堿；苦楝子中的苦楝堿；麻黃中的麻黃堿；光慈菇、山慈菇中的秋水仙堿等。其毒理作用主要是損害神經系統(tǒng)。外周迷走神經和感覺神經中毒，常先呈異常興奮后抑制，能直接影響心臟功能，并發(fā)其他臟器的變性壞死；中樞神經中毒，可引起視丘、中腦、延腦、脊髓的病理改變；呼吸中樞中毒可引起呼吸麻痹窒息。再如在含有苷類的中藥中，已知的毒性成分有：洋地黃、萬年青、八角楓、蟾酥、夾竹桃等品種中的強心苷，可直接作用于心臟，引起心肌收縮的增強，心率減慢；木通、黃藥子、商陸等皂苷成分，對局部有刺激作用，并能抑制呼吸，損害心臟、腎臟，尚有溶血作用；白果中的銀杏酸和銀杏酚，苦杏仁、桃仁、郁李仁、木薯、瓜蒂等品種中的苦杏仁甙，水解后可析出氫氰酸，能迅速與細胞線粒體中氧化型細胞色素酶的三價鐵結合，阻止細胞的氧化反應；芫花、廣豆根等品種中的黃酮苷，可刺激胃腸道和對肝臟的損害，引起惡心嘔吐、黃疸等癥狀。

中藥毒代動力學研究方法　毒代動力學是運用藥代動力學的原理和方法，定量地研究毒性劑量下藥物在動物體內的吸收、分布、代謝、排泄過程和特點，進而探討藥物毒性發(fā)生和發(fā)展的規(guī)律性的一門科學。其主要目的是：揭示在毒性試驗條件下藥物所達到的全身暴露與毒性發(fā)生的內在聯系；比較動物與人的全身暴露來解釋毒理試驗數據的價值；為臨床前毒性研究的實驗設計（如動物種屬、試驗劑量和用藥方案的設計）提供依據。

細胞毒性試驗MTT法 這是借助于細胞生物學技術直接觀察中藥在細胞學水平上的毒性反應。包括對細胞、細胞器形態(tài)結構的影響和對細胞整體活動的影響等。而MTT法可以快速高效地檢測藥物對細胞增殖的影響及毒性反應。從微觀角度反映中藥毒理作用的生物學基礎。

中藥血清藥理學方法 該方法應用于中藥毒性研究的尚較少，但直接用實驗動物的含藥血清培養(yǎng)細胞觀察中藥的毒性效應，可從微觀角度闡明毒理。為從細胞分子水平闡明中藥毒性機理開辟道路，值得借鑒。

分子生物學技術 將分子生物學方法應用于中藥毒理學研究，如對中毒臟器中核酸含量測定，對藥物性損傷的肝細胞中藥物代謝酶和抗氧化物酶活性的測定、毒理基因組學和蛋白組學的探討等，均將有助于從基因分子水平探討中藥毒性產生的機理與本質。

中藥毒性研究必須注意的幾個問題

1.中藥毒性的相對性 中藥是借助于藥物的偏性糾正疾病的偏性，辨證準確，效如桴鼓相應。如果辨證不確，就會產生毒副作用。如日本報道的應用小柴胡湯引起間質性肺炎的案例，就是一個很好的說明。而某些藥物如三氧化二砷對正常人使用反映為毒性，而用于急性粒細胞白血病卻發(fā)揮了很好的治療作用，并未發(fā)生毒副反映。

2.中藥毒性研究的復雜性 其復雜性在于中藥多使用制劑粗、用量大、毒性小、起效慢、療程長、靶點多、給藥途徑以口服為主等，給中藥毒理學的研究帶來了困難。制劑較粗，與對照組在顏色、氣味、用藥量、給藥途徑等方面存在很大的差異，影響了各實驗組間的齊同性；藥量較大，超過實驗動物的胃容量；毒性較低，甚至檢測不出半數致死量等數據；用藥療程長，短期內可能無毒性反應，有毒性蓄積的傾向；中藥從原藥材到制劑的質量標準均不夠嚴格和科學，使實驗重復性受到很大的影響；中藥保存條件與保存期與化學藥品不同；中藥尤其是復方成分復雜且難以確定，其毒代動力學研究具有許多困難與特殊性。

3.辨證看待古代文獻毒性的記載 如七情和合中相反的涵義為配伍后能增加毒性，但并不意味著絕對不能配伍。漢末張仲景《金匱要略》中的“甘遂半夏湯”以甘遂與甘草同用；《千金翼方》腎瀝散中烏頭、白蘞同用；《儒門事親》中通氣丸海藻、甘草同用等，經過長期臨床使用并未見有毒性反應的報道。高曉山等對病理生理條件下中藥十八反進行了系統(tǒng)研究，認為十八反是古人在臨床用藥中發(fā)現的問題，病人處于病理生理狀態(tài)，因此十八反應限定于專屬的病理生理條件下，廣泛地增加毒性，未必是十八反的普遍規(guī)律。病理生理條件下某些十八反組可顯示毒性增強，死亡率升高或某些不利于治療的情況。川烏與半夏2∶1配伍，8g生藥/kg劑量對于飼喂甲狀腺粉所致陽盛實驗動物耐高溫能力有明顯的抑制作用，顯示較明顯毒性增強，而對正常健康動物來說，同樣的高溫下生存時間則較病理模型下長。提出只有在特定的病理生理條件下顯示毒性增強的特點，可能為十八反的主流。

在GLP規(guī)范下開展中藥毒理學研究。1978年美國FDA頒布了世界上第一部藥品安全性評價的研究法規(guī)—《藥品非臨床安全研究工作質量管理規(guī)范》（Good Lab?鄄oratory Practice，GLP），隨后，GLP管理規(guī)范逐漸成為世界藥品安全性評價的通行標準，已有約70個國家和地區(qū)制定了本國的GLP。且隨著GLP規(guī)范的廣泛采用，它所包括的范圍已擴大到整個藥學、藥效學研究，可以說所有的非臨床實驗研究（質量控制、化學檢測、分離提取、藥理實驗等）都要遵循其管理原則。所制定的SOP（Standard Operation Procedure）也正逐步向GLP規(guī)范靠擾。

GLP建設不僅是中藥國際化、產業(yè)化的重要前提與依托，而且是對整個中醫(yī)藥研究工作的管理與方法學示范。以其軟件建設SOP文件制作為例，包含了以下13個方面。(1)供試品和對照品的接受、貼標簽、儲存、處理、配制方法以及取樣等；(2)動物房準備和動物的飼養(yǎng)管理；(3)設施和設備的維護、修理；(4)動物的轉移、飼養(yǎng)、安置、標記、編號等；(5)動物的一般狀況觀察；(6)各種檢查、測試等操作；(7)瀕死或者已死動物的檢查處理；(8)動物的尸檢以及組織病理學檢查；(9)實驗標本的收集和編號；(10)數據處理、儲存和檢索；(11)研究單位、安全性研究機構、質量保證部門和專題負責人的職責；(12)工作人員的健康檢查制度；（13）安全性研究機構認為需要制定標準操作規(guī)程的其他工作。在GLP規(guī)范下進行中藥毒理學研究，就要將硬、軟件建設工作以SOP的形式體現在上述各方面。資料來源：中國中醫(yī)藥報

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