混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)有反應(yīng)，TB群體反應(yīng)抗體檢測(cè)有反應(yīng)，MTB抗

原理：又稱混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)，是指兩個(gè)無(wú)關(guān)個(gè)體、功能正常的淋巴細(xì)胞在體外混合培養(yǎng)時(shí)，由于HLA II類抗原中D和DP抗原不同，可相互刺激對(duì)方的T細(xì)胞發(fā)生增值，此為雙向混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)，若將其中一方的淋巴細(xì)胞先用絲裂霉素C處理或照射使之細(xì)胞中DNA失去復(fù)制能力，但仍能刺激另一方淋巴細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化，成為單向混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)。兩個(gè)個(gè)體間HLA抗原差異程度越大，反應(yīng)越強(qiáng)烈，可通過(guò)細(xì)胞數(shù)量、形態(tài)檢查或3H-TdR摻入率檢測(cè)反應(yīng)細(xì)胞的增值水平。
通常用于器官移植前的組織配型。

實(shí)驗(yàn)室檢查：
1、遺傳檢查
(1)對(duì)疑有遺傳性疾病者，夫婦雙方均應(yīng)做染色體核型檢查，或進(jìn)一步做夫婦的家系遺傳學(xué)調(diào)查和系譜繪制。
(2)系譜分析：通過(guò)家系調(diào)查，分析遺傳性疾病對(duì)未來(lái)妊娠的影響。
(3)核型分析：同時(shí)檢測(cè)夫婦雙方外周血淋巴細(xì)胞染色體，觀察有否數(shù)目和結(jié)構(gòu)畸變及畸變的類型，推測(cè)其復(fù)發(fā)概率。
(4)分子遺傳學(xué)診斷：目前部分基因遺傳病可通過(guò)分子遺傳學(xué)檢查做出診斷。
2、內(nèi)分泌診斷
(1)基礎(chǔ)體溫測(cè)定(BBT)：基礎(chǔ)體溫能反應(yīng)卵巢的功能狀態(tài)，可用于篩查黃體功能不全。因?yàn)辄S體功能不全可引起習(xí)慣性流產(chǎn)，黃體功能不全者基礎(chǔ)體溫表現(xiàn)為：高溫相小于11天;高溫相體溫上升幅度小于0.3度。
(2)子宮內(nèi)膜活檢：個(gè)體間月經(jīng)周期長(zhǎng)短變異較大，主要是卵泡期長(zhǎng)短不同的結(jié)果，而黃體期時(shí)限及內(nèi)膜變化基本一致。黃體末期做子宮內(nèi)膜活檢，如內(nèi)膜成熟度落后，即可診斷黃體功能不全。內(nèi)膜活檢除做常規(guī)的組織學(xué)檢測(cè)外，最好同時(shí)做雌激素受體測(cè)定。子宮內(nèi)膜雌孕激素受體含量低，即使黃體功能正常，孕激素充足，內(nèi)膜成熟度仍落后正常水平，是為假性黃體功能不全。
(3)激素測(cè)定，包括雌激素和孕激素、絨毛膜促性腺激素等的定量檢測(cè)。血清孕酮測(cè)定：月經(jīng)周期中外周血中的孕酮主要來(lái)自排卵后所形成的月經(jīng)黃體，其含量隨著黃體的發(fā)育而逐漸增加，至黃體發(fā)育成熟，即黃體中期，血中孕酮含量達(dá)高峰，然后不斷下降，月經(jīng)前期達(dá)最低水平。整個(gè)黃體期中外周血的孕酮含量變化呈拋物線狀。黃體功能不全時(shí)，孕激素分泌量下降，因而測(cè)定外周血孕酮水平可反映黃體的功能狀態(tài)。血清孕酮水平大于每毫升3微克(即3ng/ml)，表明卵巢已有排卵，黃體中期孕酮水平大于每毫升15微克(即15ng/ml)表明黃體功能正常，小于此為黃體功能不全。
(4)血清泌乳素(PRL)測(cè)定：血清泌乳素由垂體前葉分泌，主要功能為產(chǎn)后促進(jìn)乳汁分泌。同時(shí)血清泌乳素對(duì)維持正常的黃體功能亦有重要作用，過(guò)低或過(guò)高均可導(dǎo)致黃體功能不全。臨床常見(jiàn)的是血清泌乳素分泌過(guò)多的高泌乳素血癥。血清中血清泌乳素正常值為每毫升4～20微克，大于20微克為升高。血清血清泌乳素輕度升高與反復(fù)流產(chǎn)關(guān)系密切。因血清泌乳素過(guò)高則嚴(yán)重干擾性腺軸功能，導(dǎo)致無(wú)排卵和不孕。
3、免疫學(xué)檢查
(1)首先應(yīng)用混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)反應(yīng)(MLR)及淋巴細(xì)胞毒性抗體測(cè)定，鑒別原發(fā)性與繼發(fā)性流產(chǎn)。原發(fā)性流產(chǎn)多發(fā)生在妊娠20周以內(nèi)，丈夫和妻子比正常配偶共有更多的人類白細(xì)胞抭原(HLA)，妻子不具有抭配偶免疫，對(duì)丈夫表現(xiàn)出較微弱的混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)反應(yīng)，血清不含有混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)阻斷因子，白細(xì)胞治療有效。繼發(fā)性流產(chǎn)配偶間不共有人類白細(xì)胞抭原(HLA)，妻子有補(bǔ)體依賴或補(bǔ)體非依賴抗配偶淋巴細(xì)胞毒性細(xì)胞，對(duì)一組細(xì)胞顯示多性抗體，肝素治療有效。女方對(duì)男方的單相混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)，并和無(wú)關(guān)第三者的抗原做比較。如女方對(duì)丈夫表現(xiàn)為微弱或缺少混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)，提示妻子血中無(wú)抗父系抗體，與丈夫有相同的人類白細(xì)胞抭原。
(2)抗精子抗體的測(cè)定：如抗精子抗體陽(yáng)性，提示生育力低?？咕涌贵w滴度高和宮頸黏液中有抗精子抗體對(duì)生育影響大?？捎镁幽囼?yàn)檢測(cè)精子凝集抗體，精子制動(dòng)試驗(yàn)檢測(cè)精子制動(dòng)抗體，免疫珠試驗(yàn)檢測(cè)精子結(jié)合抗體。
(3)抗磷脂抗體(APA)測(cè)定：懷疑患自身免疫性疾病者要檢測(cè)抗磷脂抗體，可采用酶聯(lián)免疫吸附法等直接測(cè)定女方血清中抗磷脂抗體及其滴度。
(4)自然殺傷細(xì)胞活性測(cè)定：孕前自然殺傷細(xì)胞活性高預(yù)示下次妊娠流產(chǎn)的可能性大。
(5)母體抗父系淋巴細(xì)胞毒抗體測(cè)定：將夫婦雙方淋巴細(xì)胞加補(bǔ)體共同孵育，然后計(jì)數(shù)死亡細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)，如死亡細(xì)胞在90%以上，為正常妊娠，低于20%則多發(fā)生反復(fù)流產(chǎn)。
(6)血型及抭血型抗體測(cè)定：丈夫血型為A或B、或AB型，其妻子為O型又有流產(chǎn)史者，再懷孕時(shí)應(yīng)進(jìn)一步檢查丈夫是否屬于O型，O型不引起ABO血型不合。反之丈夫?yàn)锳或B或AB型時(shí)則應(yīng)考慮檢測(cè)妻子有無(wú)抗A，抗B或抗AB抗體，并做好妊娠監(jiān)測(cè)以防止流產(chǎn)、死產(chǎn)。
習(xí)慣性流產(chǎn)或胎停育有四十多種病因，診斷治療是安太醫(yī)院特長(zhǎng)，安太=安胎。找病因需要一天，要做抗胚胎抗體+四維彩超+電化學(xué)發(fā)光法內(nèi)分泌+動(dòng)態(tài)數(shù)字化子宮輸卵管造影。三千左右，確診后治療，如果是基因疫苗免疫治療和宮頸埋箍，都是三萬(wàn)，治后無(wú)效退全款;其他原因要一到三萬(wàn)不等，擁有國(guó)際專利!
4、內(nèi)生殖器畸形的檢查
(1)子宮輸卵管造影(HSG)：子宮輸卵管造影是診斷子宮畸形敏感而特異的方法，根據(jù)子宮腔形態(tài)有否異?；虺溆睋p，可判斷有否子宮畸形。如造影顯示宮頸內(nèi)口直徑大于6毫米，則可有助于診斷宮頸功能不全。
(2)超聲檢查：超聲在診斷宮腔異常方面不如子宮輸卵管造影，但在診斷子宮外部形態(tài)異常中意義較大。如超聲檢查配合子宮輸卵管造影有助于縱隔子宮和雙角子宮的鑒別診斷;超聲波檢查可明確子宮肌瘤的數(shù)目、大小及部位。
(3)磁共振成像：雖然費(fèi)用高，但在判斷內(nèi)生殖器畸形方面作用很大。
(4)腹腔鏡和宮腔鏡：兩者可直接觀察子宮外部形態(tài)和宮腔內(nèi)狀況，能明確子宮畸形及其類型。宮腔鏡還可確診宮腔黏連，并能進(jìn)行一定程度的治療。腹腔鏡還可診斷和治療盆腔病變，如盆腔黏連、子宮內(nèi)膜異位癥等。
(5)宮頸擴(kuò)張器檢查：用8號(hào)子宮頸擴(kuò)張器伸入宮頸內(nèi)口毫無(wú)困難時(shí)提示宮頸功能不全。
5、病原體感染的檢查尿、宮頸黏液培養(yǎng)了解有無(wú)微生物感染。病原體感染也是引起反復(fù)流產(chǎn)的原因，應(yīng)行宮頸分泌物支原體、衣原體、β-溶血性鏈球菌等培養(yǎng)。一般情況下，TORCH檢測(cè)(弓形體、風(fēng)疹病毒、巨細(xì)胞病毒、皰疹病毒免疫檢測(cè)法)及其他病原微生物抗體測(cè)定意義不大，除非病史提示有慢性感染者。流產(chǎn)后妊娠物應(yīng)進(jìn)行病理檢查。

孟海英 侯一平
HLA-G屬非經(jīng)典的HLAⅠ類分子,與經(jīng)典的HLAⅠ類分子相比它有3個(gè)特點(diǎn):(1)多態(tài)性水平低;(2)體內(nèi)分布局限于特定組織;(3)由于內(nèi)含子和外顯子間的剪接位點(diǎn)改變可形成4種膜結(jié)合型和兩種可溶型HLA-G異構(gòu)體.過(guò)去幾年大量研究結(jié)果表明,HLA-G是一種免疫耐受分子.
人類白細(xì)胞抗原(humanleukocyteantigen,HLA)G,E和F同屬非經(jīng)典的HLAⅠ類基因(HLAⅠb),是繼HLA-A,HLA-B,HLA-C和HLA-E之后發(fā)現(xiàn)的第5個(gè)HLAⅠ類基因.HLA-G最早由Geraghty等[1]克隆并測(cè)序,由于它存在于6.0kb的HindⅢ酶切片段中,被命名為HLA-6.0.1988年McAlpine建議為避免在命名中使用標(biāo)點(diǎn)符號(hào),將該基因命名為HLA-60.1990年在Bodmer等[2]發(fā)布的HLA命名通報(bào)中將該基因正式命名為HLA-G.
HLA-G位于6號(hào)染色體HLA-A端粒側(cè),其基因結(jié)構(gòu)與HLA-A,HLA-B和HLA-C相似,但提前出現(xiàn)的終止密碼使其編碼的蛋白產(chǎn)物胞內(nèi)段僅6個(gè)氨基酸,比經(jīng)典HLAⅠ類抗原的30個(gè)氨基酸明顯縮短.HLA-G的這一結(jié)構(gòu)特點(diǎn),加上啟動(dòng)子區(qū)結(jié)構(gòu)與鼠的HLAⅠ類基因Qa相似,提示該基因與Qa基因同源. 1992年Geraghty等發(fā)現(xiàn),在HLA-A和HLA-G之間有一個(gè)高度多態(tài)的區(qū)域,這一區(qū)域在某種HLA單倍型時(shí)缺失,使兩基因之間的距離縮短50kb以上.1993年Morales等報(bào)道了3個(gè)新的HLA-G等位基因,從而證明HLA-G基因有多態(tài)性.
到2000年10月止,共發(fā)現(xiàn)14個(gè)HLA-G等位基因,其中5個(gè)有氨基酸序列異,即G*0101,G*0102,G*0103,G*0104和G*0105N.G*0101包括8個(gè)編碼序列不同,但沒(méi)有氨基酸序列差異的等位基因,即G*01011～G*01018.G*0104包括3個(gè)類似的等位基因,即G*01041～G*01043.G*0105N在外顯子3第1597位,即第130密碼子的胞嘧啶缺失使讀碼框架改變,終止密碼在第4外顯子起始部位第189密碼子提前出現(xiàn),正常HLA-G1分子跨膜區(qū)不能被轉(zhuǎn)錄,形成一個(gè)可溶型HLA-G分子.從以上資料可以看出,HLA-G的多態(tài)性遠(yuǎn)低于經(jīng)典HLAⅠ類基因.且HLA-GDNA序列在經(jīng)典HLAⅠ類分子的功能必需區(qū)高度保守,與經(jīng)典HLAⅠ類核酸高變區(qū)相應(yīng)的HLA-G區(qū)域多態(tài)性有限[3].關(guān)于HLA-G多態(tài)性在不同群體中分布的研究結(jié)果令人困惑.有研究顯示HLA-G多態(tài)性在高加索人群和美國(guó)黑人間的分布差異有顯著性,在美國(guó)黑人女性群體中的雜合度可達(dá)67%,其中大多數(shù)多態(tài)性出現(xiàn)于編碼α2結(jié)構(gòu)域的序列中[4].有人借助逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)分析HLA-GmRNA多態(tài)性,發(fā)現(xiàn)在高加索和非洲加勒比海人群中,其多態(tài)性遠(yuǎn)低于上述報(bào)道,其原因可能是前者的引物選在外顯子區(qū),而不是象以前的實(shí)驗(yàn)選在內(nèi)含子區(qū)[5]. 胎盤(pán)中存在的另一種細(xì)胞因子IL-10,可上調(diào)人類滋養(yǎng)層和單核細(xì)胞HLA-G表達(dá)[10].干擾素也可實(shí)驗(yàn)性提高轉(zhuǎn)染鼠滋養(yǎng)層HLA-G基因表達(dá).
HLA-G蛋白產(chǎn)物以兩種形式存在,即表達(dá)于細(xì)胞表面的膜結(jié)合型(membrane-boundHLA-G,mHLA-G),以及存在細(xì)胞內(nèi)的胞漿可溶型(solubleHLA-G,sHLA-G).在DNA多態(tài)性基礎(chǔ)上,HLA-GmRNA包括一個(gè)全長(zhǎng)的HLA-GmRNA(HLA-G1)和3個(gè)跨膜區(qū)縮短的HLA-GmRNA(HLA-G2,3和4),及兩個(gè)無(wú)跨膜的異構(gòu)體,蛋白水平僅觀察到1個(gè)包括完整跨膜區(qū)的mHLA-G分子(HLA-G1)及sHLA-G,未觀察到跨膜縮短的HLA-G分子,它們留在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中,可能對(duì)細(xì)胞表面HLA-G1或HLA-E表達(dá)起調(diào)節(jié)作
用[11].HLA-G*0105N基因的表達(dá)產(chǎn)物就是一種sHLA-G.膜結(jié)合型和胞漿可溶型HLA-G分子都可與細(xì)胞內(nèi)來(lái)源的相同肽片段結(jié)合. HLA-G分子的功能尚不清楚.有人認(rèn)為它可能與血管生成和(或)胎盤(pán)形成有關(guān),目前普遍接受的觀點(diǎn)認(rèn)為HLA-G是一種免疫耐受分子,可能與母胎耐受及抗感染免疫有關(guān).大量的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)及臨床研究已證實(shí)這種觀點(diǎn),但也有少數(shù)報(bào)道否定上述觀點(diǎn),基于HLA-G是一種免疫耐受分子,其在習(xí)慣性流產(chǎn),先兆子癇,感染性疾病,腫瘤和其他免疫相關(guān)性疾病發(fā)生中的作用,及在防治移植排斥反應(yīng)中的應(yīng)用受到關(guān)注.1998年在法國(guó)巴黎召開(kāi)了第1屆國(guó)際HLA-G會(huì)議,標(biāo)志著HLA功能研究的進(jìn)一步深入,同時(shí)也說(shuō)明HLA-G的重要性[12].3.1抗原遞呈功能1994年Onno等提出一種關(guān)于HLA-G功能的假設(shè);在不利因素(如感染,轉(zhuǎn)化)的刺激下,HLA-G蛋白的合成被誘導(dǎo),通過(guò)某種機(jī)制,受損傷的體細(xì)胞被靶向性殺傷,達(dá)到免疫清除的目的.實(shí)驗(yàn)證實(shí),用熱休克蛋白,亞砷酸鹽等處理,腫瘤細(xì)胞株內(nèi)各種HLA-G同源異構(gòu)體轉(zhuǎn)錄水平提高,而HLA-A,-B,-E和-F等HLAⅠ類基因的轉(zhuǎn)錄水平無(wú)明顯改變,說(shuō)明HLA-G分子可能作為一個(gè)信號(hào)分子調(diào)節(jié)人類對(duì)各種不利因素的免疫應(yīng)答.此外,mHLA-G和sHLA-G都可與來(lái)源于細(xì)胞內(nèi)的相同類型的9肽片段結(jié)合,這些9肽片段的錨著殘基分別是第2位的亮氨酸或異亮氨酸,第3位的脯氨酸和第9位的亮氨酸.當(dāng)這3個(gè)錨著位點(diǎn)同時(shí)被甘氨酸替代時(shí),該肽片段不能與HLA-G分子結(jié)合,但這3個(gè)錨著位點(diǎn)中任意一個(gè)位點(diǎn)的替代,不影響肽片段與HLA-G分子結(jié)合[13].與HLA-A2遞呈的抗原肽比較,HLA-G分子可遞呈的抗原肽種類較少.因此不能排除HLA-G分子具有結(jié)合和遞呈抗原的功能.3.2HLA-G與母胎免疫耐受胎盤(pán)植入期,絨毛膜外滋養(yǎng)層(extravilloustrophoblast,EVT)通過(guò)子宮蛻膜向子宮螺旋動(dòng)脈靠近的過(guò)程中,滋養(yǎng)層損傷動(dòng)脈壁,使胎兒從母體獲得足夠的血流供應(yīng).與其它細(xì)胞不同,EVT細(xì)胞表達(dá)HLA-C,HLA-E和HLA-G3種HLAⅠ類分子,其中高水平表達(dá)HLA-G是EVT細(xì)胞所獨(dú)有.雖然在腫瘤及其他組織中也發(fā)現(xiàn)有少量HLA-G分子,但都沒(méi)有觀察到象EVC組織中一樣的HLA-G積聚.HLA-G分子獨(dú)特分布可能和HLA-E一樣,在母胎免疫耐受中發(fā)揮作用.
3.3HLA-G與NK細(xì)胞胎盤(pán)侵入期,表達(dá)HLA-G的胎兒滋養(yǎng)層侵入母體組織,母體NK細(xì)胞識(shí)別胎兒細(xì)胞表面HLA-G的刺激信號(hào)產(chǎn)生細(xì)胞因子,這些細(xì)胞因子調(diào)節(jié)胎盤(pán)生長(zhǎng),發(fā)育和分化,并使母體對(duì)HLA半異源的胎兒產(chǎn)生免疫耐受.妊娠各階段子宮的白細(xì)胞類別及胎兒組織表達(dá)的各種細(xì)胞因子受體不同,滋養(yǎng)層與子宮細(xì)胞間的作用方式相當(dāng)復(fù)雜,包括各種細(xì)胞因子,細(xì)胞因子受體,粘附分子,酶和激素,這些因素都隨著妊娠階段不同而發(fā)展變化.至少有4種NK細(xì)胞表面的殺傷細(xì)胞抑制性受體(killer-cellinhibitoryreceptor,KIR)可識(shí)別HLA-G分子,它們分別是CD94/NKG2,LIR-1,CD158a/p58.1NKR和KIR2DL4.母體中大量CD16-,CD56+NK細(xì)胞浸潤(rùn)子宮蛻膜,在子宮蛻膜基底部,即EVT細(xì)胞的侵入部位,NK細(xì)胞聚集更為明顯,它們與侵入蛻膜的EVT細(xì)胞緊密接觸.這種NK細(xì)胞表達(dá)各種識(shí)別HLAⅠ類分子的受體,如CD94/NKG2.因此,胎兒細(xì)胞表面HLA-G分子可能通過(guò)與母體NK細(xì)胞表面KIR結(jié)合,抑制NK細(xì)胞殺傷活性,從而導(dǎo)致母體對(duì)HLA半異源性胎兒產(chǎn)生免疫耐受.用蛻膜來(lái)源的NK細(xì)胞和NK細(xì)胞克隆進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)證實(shí),HLA-G分子可與母體蛻膜中NK細(xì)胞表面受體結(jié)合,抑制NK細(xì)胞殺傷活性.HLA-G分子與CD94/NKG2受體的作用可被抗CD94/NKG2受體抗體阻斷,使表達(dá)HLA-G分子的細(xì)胞被人體胎盤(pán)的CD94/153 NKG2陽(yáng)性NK細(xì)胞殺傷[14].Dorling等[15]研究表明,除抑制NK細(xì)胞殺傷活性外,HLA-G分子可抑制NK細(xì)胞游走.另一方面,在HLA-G低表達(dá)時(shí),EVT細(xì)胞以劑量依賴的方式被NK細(xì)胞殺傷[16].3.4HLA-G與細(xì)胞毒性T細(xì)胞據(jù)認(rèn)為HLA-G分子還可通過(guò)與細(xì)胞毒性T(cytotoxicTlymphocyte,CTL)細(xì)胞作用,保護(hù)胎兒免受母體CTL細(xì)胞殺傷.HLA-G分子與CTL的作用有幾個(gè)特點(diǎn):
(1)抗原肽劑量依賴性;
(2)可被抗HLA-G單克隆抗體阻斷;
(3)在HLA-E/CD94/NKG2A途徑被阻斷后,抑制作用依然存在;
(4)HLA-G分子濃度依賴性[17].
在混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中,用各種濃度的純化HLA-G檢測(cè)其對(duì)CTL細(xì)胞反應(yīng)能力的影響,結(jié)果表明≥0.1g/ml的HLA-G可抑制30%～100%的異源CTL細(xì)胞殺傷活性;0.01～0.05g/ml的HLA-G可使異源CTL細(xì)胞殺傷活性提高25%～50%;≤0.001g/ml的HLA-G分子對(duì)異源CTL細(xì)胞殺傷活性無(wú)影響.≥0.1g/ml的HLA-G分子誘導(dǎo)輔助性T細(xì)胞2(Thelpertype2,Th2)介導(dǎo)的免疫應(yīng)答,而0.01～0.05g/ml的HLA-G分子誘導(dǎo)Th1介導(dǎo)的免疫應(yīng)答[18].且由于α3結(jié)構(gòu)域(第223～229氨基酸)氨基酸序列的差異,使HLA-G分子與經(jīng)典HLAⅠ類分子構(gòu)象不同,導(dǎo)致HLA-G分子與CD8結(jié)合能力顯著高于經(jīng)典HLAⅠ類分子[19].3.5sHLA-G的功能除mHLA-G,sHLA-G也存在于整個(gè)妊娠期母胎接觸面及母體血循環(huán)中,據(jù)認(rèn)為可能是妊娠期一種特異性免疫抑制分子.1999年Menicucci等[20]發(fā)現(xiàn)sHLA-G存在于卵細(xì)胞培養(yǎng)液中.2000年Hunt等[21]通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)用抗sHLA-G的mAb檢測(cè),發(fā)現(xiàn)sHLA-G存在于妊娠各階段,孕婦血清中sHLA-G水平明顯高于非孕婦,其主要同源異構(gòu)體是sHLA-G2.Fournel等通過(guò)親合純化得到與β2微球蛋白結(jié)合的sHLA-G1可誘導(dǎo)活化CD8+細(xì)胞凋亡.Western雜交結(jié)果顯示,sHLA-G1可促進(jìn)活化CD8+細(xì)胞表面CD95配體表達(dá).將CD8+細(xì)胞與CD95mAbZB4或可溶性CD95-Fc重組體一起預(yù)孵育,CD8+細(xì)胞的細(xì)胞毒性被抑制,提示CD8+細(xì)胞凋亡可能是通過(guò)CD95/CD95配體途徑.sHLA-G1誘導(dǎo)的凋亡依賴于CD8分子參與,抗CD8mAb可阻斷程序性細(xì)胞死亡[22].3.6HLA-G對(duì)HLA-E表達(dá)的調(diào)節(jié)作用HLA-G分子引導(dǎo)序列的肽片段可與HLA-E分子結(jié)合而被遞呈至細(xì)胞表面,通過(guò)和NK細(xì)胞表面CD94/NKG2受體結(jié)合,產(chǎn)生NK細(xì)胞抑制信號(hào). 4.1
HLA-G與先兆子癇先兆子癇(pre-eclampsia,PE)是一種常見(jiàn)的產(chǎn)科綜合征,其病理學(xué)特征是胎兒滋養(yǎng)層侵入母體蛻膜螺旋動(dòng)脈缺乏或程度不足.目前尚未發(fā)現(xiàn)該病特異性病因,流行病學(xué)研究顯示先兆子癇具有高度家族性傾向,疾病連鎖分析表明胰島素樣生長(zhǎng)因子Ⅱ(insulin-likegrowthfactorⅡ,IGF-Ⅱ)和HLA-G是PE的候選基因.PE患者HLA-G基因第8外顯子的插入/缺失多態(tài)性分布顯著性偏離Hardy-Weinberg平衡,表現(xiàn)為雜合度過(guò)高.另外,粘附分子異常表達(dá)可能也有助于滋養(yǎng)層異常侵入,患者子宮蛻膜中Th1水平也與滋養(yǎng)層侵入特性有關(guān).RNA原位雜交實(shí)驗(yàn)顯示,正常妊娠時(shí)HLA-G表達(dá)于EVT,表達(dá)水平與侵入蛻膜的深度成正比,在多數(shù)PE患者的胎盤(pán)中HLA-G缺乏或表達(dá)水平降低
[23].結(jié)合上述HLA-G分子與CTL作用的濃度依賴,推測(cè)低濃度HLA-G分子可能與Th1水平上改變及
先兆子癇的發(fā)生有關(guān).新近報(bào)道發(fā)現(xiàn)HLA-G*0105N純合型的健康個(gè)體[24].也有其它群體遺傳學(xué)資料顯示,HLA-G*0105N的等位基因頻率與先兆子癇和宮內(nèi)發(fā)育遲滯無(wú)關(guān),提示膜結(jié)合型HLA-G分子對(duì)
妊娠和胎兒成活可能并非必需.
4.2
HLA-G與病毒感染據(jù)認(rèn)為HLA-G分子可與病毒來(lái)源的抗原肽結(jié)合,并把它們遞呈給母體免疫系統(tǒng),引起被感染胎兒組織溶解.因此,它可能在人類巨細(xì)胞病毒(humancy-tomegalovirus,CMV)感染中發(fā)揮一定作用,與習(xí)慣性流產(chǎn)有關(guān).已有報(bào)道顯示,兩個(gè)患有習(xí)慣性流產(chǎn)的婦女是無(wú)效等位基因HLA-G*0105N的純合子.人類CMV可調(diào)節(jié)HLA-G表達(dá),但這方面的研究結(jié)果相當(dāng)混亂.Onno等研究表明,單核細(xì)胞被CMV感染后,由其分化而成的組織巨噬細(xì)胞表達(dá)HLA-G,而CMV在上調(diào)HLA-G表達(dá)的同時(shí),下調(diào)部分經(jīng)典MHCⅠ分子表達(dá).急性CMV感染性肺炎患者支氣管肺泡的巨噬細(xì)胞中也表達(dá)HLA-G,在U-373MG星形細(xì)胞瘤細(xì)胞中也可發(fā)現(xiàn)CMV感染與HLA-G(包括sHLA-G)表達(dá)上調(diào)有直接關(guān)系.Jun等[25]認(rèn)為,人CMV的US3和US6蛋白下調(diào)HLA-G表達(dá),US3在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與HLA-G直接接觸,使HLA-G滯留在內(nèi)質(zhì)網(wǎng);US6通過(guò)TAP抑制肽轉(zhuǎn)運(yùn).習(xí)慣性流產(chǎn)患者NK細(xì)胞活性異常增強(qiáng),這也可能與CMV下調(diào)HLA-G表達(dá)有關(guān).如果HLA-G是一種免疫耐受分子的假設(shè)成立,HLA-G分子應(yīng)該有助于CMV逃脫宿主的免疫監(jiān)視[26].此外,有研究顯示HLA-G表達(dá)于各種感染性肌病的肌纖維中.在正常人和患者的培養(yǎng)成肌細(xì)胞中加入干擾素γ,可誘導(dǎo)細(xì)胞表達(dá)各種HLA-G異構(gòu)體,提示在感染性肌病和其他局限性免疫應(yīng)答中,HLA-G分子可能發(fā)揮重要功能[27].
4.3
HLA-G與腫瘤免疫HLA-G還可表達(dá)于實(shí)體腫瘤(如黑素瘤,肉瘤和淋巴瘤).在原發(fā)性黑素瘤細(xì)胞和轉(zhuǎn)移細(xì)胞表面高表達(dá)各種HLA-G異構(gòu)體[28].這些HLA-G分子使腫瘤細(xì)胞能逃避NK細(xì)胞和CTL細(xì)胞的殺傷,溶解作用,這是一種新的腫瘤細(xì)胞逃脫免疫監(jiān)視的機(jī)制.非實(shí)體腫瘤,絨毛膜癌的發(fā)生也可能與HLA-G分子抑制NK細(xì)胞的殺傷作用有關(guān).
4.4
HLA-G與移植排斥HLA-G可能通過(guò)抑制NK細(xì)胞和(或)CTL細(xì)胞激活而下調(diào)移植排斥反應(yīng).HLA-G分子的參與有助于在供受者HLA不相配時(shí)提高移植受者生存率,并可能抑制異種移植排斥.HLA-G分子抑制移植排斥反應(yīng)的機(jī)理尚不清楚.除通過(guò)調(diào)節(jié)HLA-E分子表達(dá)間接作用于NK細(xì)胞,HLA-G還可通過(guò)NK
細(xì)胞表面的CD94/NKG2受體直接抑制NK細(xì)胞的活性.豬內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)的HLA-G分子可直接抑制人NK細(xì)胞對(duì)豬內(nèi)皮細(xì)胞的異源殺傷作用,其抑制作用可被抗CD94抗體阻斷[29].同時(shí),HLA-G分子也可抑制NK細(xì)胞向移植物內(nèi)皮細(xì)胞移動(dòng).此外,HLA-G分子還可抑制異源T細(xì)胞增值,降低T細(xì)胞對(duì)異源細(xì)胞的殺傷作用.2000年Lila等[30]對(duì)31例心臟移植患者進(jìn)行253 心臟活檢,發(fā)現(xiàn)5例HLA-G分子的表達(dá)與急性移植排斥反應(yīng)水平顯著降低及缺乏慢性排斥反應(yīng)有關(guān).