男性龜頭出現(xiàn)皰疹是什么情況？

男性龜頭出現(xiàn)皰疹就是我們常說的生殖器皰疹，是一種常見的男性疾病之一，一定要及時(shí)到正規(guī)醫(yī)院進(jìn)行治療。那么造成男人出現(xiàn)龜頭皰疹的原因有哪些?

一、原發(fā)生殖器皰疹：一般是男性朋友由于各種原因所導(dǎo)致病菌的出現(xiàn)，在身體虛弱的情況下，那時(shí)的免疫力也很低下，從而引起了病變，導(dǎo)致皰疹的出現(xiàn)。

二、外傷感染：由于外傷的情況下，導(dǎo)致病菌的趁虛而入如，引起皰疹的出現(xiàn)，也是一種常見的形成方式。醫(yī)生指出，生殖器皰疹的皰疹病毒可經(jīng)皮膚或黏膜上的小小破裂傷口侵入體內(nèi)，經(jīng)過潛伏數(shù)日，病菌繁殖到足夠的數(shù)目便開始發(fā)病。因此，要謹(jǐn)慎對(duì)待破裂的傷口。

三、性伴侶沒有同治導(dǎo)致的感染：當(dāng)男性朋友出現(xiàn)皰疹的情況下，在治愈后，由于沒有采用夫妻同治的原則，病菌往往會(huì)在性生活時(shí)再度傳染給男性，造成生殖器皰疹的復(fù)發(fā)，因此，醫(yī)生建議治療生殖器皰疹應(yīng)該采用，夫妻同治的原則。

四、性生活的傳播：很多男性朋友出現(xiàn)生殖器皰疹主要是由于不潔的性生活引起的，由于不潔性生活導(dǎo)致病菌的交叉?zhèn)魅?，引起了男性出現(xiàn)生殖器皰疹。因此，醫(yī)生建議男性朋友關(guān)愛自己的身體，潔身自好，遠(yuǎn)離不潔性生活。

什么原因?qū)е履行陨称鏖L(zhǎng)皰疹

生殖器皰疹是一種社會(huì)上比較常見的性傳播疾病。那么，什么原因?qū)е履行陨称鏖L(zhǎng)皰疹?下面就由我告訴大家吧!

什么原因?qū)е履行陨称鏖L(zhǎng)皰疹

1、生殖器皰疹好發(fā)于龜頭、冠狀溝、尿道口、陰莖、陰囊、大腿和臂部等處。生殖器皰疹后期炎癥波及尿道、膀胱時(shí)，可出現(xiàn)排尿困難、尿痛、尿頻、嚴(yán)重者可發(fā)生尿潴留等現(xiàn)象。

2、患有生殖器皰疹的病人中，男性同性戀者可出現(xiàn)直腸II型皰疹病毒肛門直腸感染，其發(fā)病僅次于淋球菌引起的男性肛門直腸炎。生殖器皰疹臨床表現(xiàn)為肛門直腸疼痛嚴(yán)重、便秘、排膿和里急后重，肛門可有皰和潰瘍。

3、可能有其它癥狀同時(shí)出現(xiàn)，如發(fā)熱、全身不適、頭痛、頸項(xiàng)強(qiáng)直、腦膜炎和骶部神經(jīng)系統(tǒng)功能不全。

生殖器皰疹疾病的治療方法

1.局部療法：原則為干燥、收斂、保護(hù)患部，防止繼發(fā)感染?？赏馔?%龍膽紫溶液，或選用10%次沒食子酸鉍(代馬妥dermatol)、氧化鋅油膏或泥膏、紫草生地榆油膏、0.5%新霉素軟膏、或0.25%~0.1%皰疹凈(IDU)軟膏、5%皰疹凈二甲基亞砜溶液(用于皮膚皰疹)等。對(duì)顏面部者亦可用10%醋酸鋁或鋅銅合劑。

2.全身治療：治療原則其一使感染的HSV不能活化，甚至消滅病毒;其二調(diào)節(jié)免疫，防止再發(fā)，可用阿昔洛韋靜滴或口服，麗珠威口服，干擾素肌注，白細(xì)胞介素Ⅱ肌注。我們?cè)谥委煆?fù)發(fā)性生殖器皰疹時(shí)，使用四醫(yī)大生物技術(shù)中心產(chǎn)的干擾素300萬單位肌注，每日一次，10次為一療程，共三個(gè)療程，適當(dāng)配合使用白細(xì)胞介素Ⅱ或利百多或靈桿菌素，95%的病人不復(fù)發(fā)。

一、病原療法

(1)阿昔洛韋(無環(huán)鳥苷)：可選擇性地抑制病毒復(fù)制，減少新?lián)p害的發(fā)生，減輕疼痛，縮短創(chuàng)面愈合及排毒時(shí)間。對(duì)原發(fā)性或初次發(fā)作的GH，0.2g，口服，5次/d，連用7～10天;對(duì)復(fù)發(fā)性GH，0.2g，口服，5次/d，連用5天，或0.4g，口服，3次/d，連用5天，或0.8g，口服，2次/d，連用5天。輕癥患者1～1.6g/d，分5次口服，連用5～7天;重癥病人15mg/(kg?d)，靜注，連用5～7天。脫水和腎功能不全者慎用。近年來，伐昔洛韋(萬乃洛韋)、泛昔洛韋(famciclorvir)等阿昔洛韋(ACV)的衍生物也用于本病的治療。

(2)膦甲酸鈉：對(duì)有TK基因缺陷的耐ACV病毒感染者，可用膦甲酸鈉40mg/kg，靜注，每8小時(shí)1次，至痊愈。

(3)利巴韋林(三氮唑核苷)：0.6～0.8g/d，口服或肌注，連用5～7天。

(4)?、?及?-干擾素(?、?、?-IFN)：100萬u/d，共5～7天。

(5)聚肌胞2～4ml，肌注，隔天1次，連用5～7天。

(6)阿糖胞苷(cytarabine)等也可用。

二、免疫療法

Straus等采用gD-2疫苗接種，即重組HSV-2在CHO細(xì)胞表達(dá)的糖蛋白D，誘導(dǎo)的抗原特異性中和抗體相當(dāng)于或超過GH患者產(chǎn)生的水平。100?g/次，2個(gè)月后重復(fù)1次，與對(duì)照組相比，復(fù)發(fā)次數(shù)明顯減少，對(duì)減輕癥狀和預(yù)防感染也有效。

三、局部療法

應(yīng)注意保護(hù)創(chuàng)面，保持清潔、干燥，防止繼發(fā)細(xì)菌感染。5%阿昔洛韋(ACV)軟膏或乳劑、?或?干擾素乳劑或凝膠、1%甲紫(龍膽紫)溶液、3%四環(huán)素軟膏或25%氧化鋅油劑等均可使用。

四、對(duì)癥療法

如繼發(fā)細(xì)菌感染，應(yīng)酌用抗生素。若疼痛劇烈時(shí)可予以止痛劑。

五、性伴侶的處理

由于大多數(shù)性伴侶可能已經(jīng)感染HSV，因此他們也應(yīng)接受檢查，必要時(shí)予以治療。

生殖器皰疹的癥狀有哪些？

一、癥狀
HSV感染是一種全身性疾病，病毒經(jīng)呼吸道、口腔、生殖器粘膜或破損皮膚進(jìn)入人體，可潛于人體正常粘膜、血液、唾液以及局部感覺神經(jīng)節(jié)和多數(shù)器官內(nèi)，幾乎所有的內(nèi)臟和粘膜表皮內(nèi)都可分離到HSV。
原發(fā)感染多為隱性，大多無臨床癥狀或呈亞臨床表現(xiàn)，僅有少數(shù)(約1-10%)可以出現(xiàn)臨床癥狀。主要見于免疫功能低下嬰幼兒或嚴(yán)重營(yíng)養(yǎng)不良或有其它感染的兒童，成人罕見。原發(fā)感染消退后，病毒可持續(xù)潛居體內(nèi)。正常人中約有半數(shù)以上為本病毒的攜帶者，可通過口、鼻分泌物而成為傳染源，由于HSV在人體中不產(chǎn)生永久免疫力，故每當(dāng)機(jī)體抗病能力減退時(shí)，如患某種發(fā)熱性傳染病，胃腸功能紊亂、月經(jīng)、妊娠、病灶感染、過度疲勞、情緒環(huán)境改變時(shí)，體內(nèi)潛伏的HSV即被激發(fā)而發(fā)病。
HSV-1主要引起口唇皰疹，咽炎，角膜結(jié)膜炎和散發(fā)性腦炎，而HSV-2感染主要引起生殖器皰疹，但在臨床上也有相反情況。
HSV感染的潛伏期為1-45天，平均為6天，HSV-1感染主要發(fā)生于口角、唇緣、鼻孔等皮膚粘膜交界處，亦可見顏面或口唇，開始局部先有灼癢及輕度緊張感，偶有伴發(fā)神經(jīng)痛。隨即出現(xiàn)紅斑，在紅斑基礎(chǔ)上發(fā)生簇集性小丘疹，迅速變?yōu)樗诹Ｖ辆G豆大小的水皰，內(nèi)容澄清，水皰破裂后出現(xiàn)糜爛面，數(shù)日后干燥結(jié)痂。自覺灼癢，偶有倦怠，不適和輕微發(fā)熱等全身癥狀，愈合可遺留暫時(shí)性色素沉著。全病程1-2周左右。
HSV-2感染主要發(fā)生于生殖器部位，患部先有燒灼感，很快在紅斑的基礎(chǔ)上發(fā)生成群的小水皰，多見男性包皮、龜頭、冠狀溝、陰莖等處，偶見于尿道;女性常見于陰唇、陰蒂、陰道、宮頸等處。水皰可逐漸變成膿皰，約6天左右破潰而形成糜爛或淺的潰瘍，自覺疼痛。病人可發(fā)生尿道炎，出現(xiàn)排尿困難。多數(shù)人有腹股溝淋巴結(jié)腫大疼痛，有的病人可出現(xiàn)發(fā)熱、肌肉痛及腦膜炎癥狀。如發(fā)于女性宮頸者可形成潰瘍壞死，陰道分泌物增多，可有下腹痛。應(yīng)注意有無宮頸癌發(fā)生。孕期患生殖器皰疹時(shí)易致流產(chǎn)、早產(chǎn)或死胎，并易使新生兒感染，發(fā)生新生兒?jiǎn)渭儼捳睢１静∫话憬?jīng)過3周左右可以痊愈，但常有反復(fù)發(fā)作，一般原發(fā)疹后1-4個(gè)月內(nèi)復(fù)發(fā)，癥狀較原發(fā)者輕，范圍亦小，局限于生殖器部位，有時(shí)僅有1-2個(gè)皰疹，病程亦短，自發(fā)病至愈合8-12天。本病也可伴有生殖器以外部位的感染，如口唇、臂部及中樞神經(jīng)系統(tǒng)等。
二、體征
皮損為紅斑基礎(chǔ)上可見成群的水皰或膿皰或成糜爛及潰瘍。女性患者約90%伴有HSV宮頸炎，宮頸可見發(fā)紅、糜爛、潰瘍，有膿性陰道分泌物。有的患者可有腹股溝淋巴結(jié)腫大壓痛或體溫升高。皮膚病變也可出現(xiàn)在口唇、手指、臀部、大腿、手臂，甚至眼部與咽喉。并發(fā)腦膜炎或橫貫性脊髓炎，一般于發(fā)疹后3-12天出現(xiàn)頸項(xiàng)強(qiáng)直等顱內(nèi)壓增高的現(xiàn)象。
三、潛伏感染和復(fù)發(fā)
HSV感染人體后1周左右，血中出現(xiàn)中和抗體，3-4周達(dá)高峰，可持續(xù)多年，這些抗體能清除病毒和使機(jī)體康復(fù)，但大多數(shù)個(gè)體不能徹底消滅病毒，也不能阻止復(fù)發(fā)，病毒以潛伏狀態(tài)長(zhǎng)期存在宿主體內(nèi)。不同亞型HSV感染者急性首發(fā)生殖器皰疹的臨床過程相似，但生殖器病變復(fù)發(fā)率不同，首發(fā)HSV-2感染者約90%，在12個(gè)月內(nèi)會(huì)出現(xiàn)一次復(fù)發(fā)(平均復(fù)發(fā)4次)，而初次感染HSV-1者僅50%出現(xiàn)類似復(fù)發(fā)(平均復(fù)發(fā)次數(shù)小于1)。不同個(gè)體及同一病人一生中生殖器HSV-2感染的復(fù)發(fā)率變化很大，大多數(shù)年復(fù)發(fā)5-9次，一般在原發(fā)皰疹消退后1-4個(gè)月內(nèi)發(fā)生，有些患者受到促發(fā)因素，如發(fā)熱、月經(jīng)、日曬、寒冷、某些病毒感染等的影響而復(fù)發(fā)，其特點(diǎn)是每次復(fù)發(fā)往往發(fā)生在同一部位，復(fù)發(fā)前可有前驅(qū)癥狀如局部瘙癢，發(fā)疹前數(shù)小時(shí)感染部位有灼燒，麻刺感。
復(fù)發(fā)生殖器皰疹(GH)對(duì)患者心理影響較大，由于目前尚無預(yù)防復(fù)發(fā)的有效療法及可能有誘發(fā)生殖器惡變的危險(xiǎn)性，故給患者帶來心理影響，患者多有抑郁、恐懼等心理障礙，這又直接影響HSV的復(fù)發(fā)。我們的治療經(jīng)驗(yàn)，只要患者堅(jiān)持規(guī)律治療，都能治愈。
四、HSV與HIV感染：
HSV常與HIV-1同時(shí)感染，并能促進(jìn)病情發(fā)展，引起嚴(yán)重的局部和播散性感染。目前認(rèn)為HSV是一種調(diào)節(jié)因素，能激活HIV復(fù)制，Heng對(duì)6例AIDS合并生殖系統(tǒng)HSV皮膚損害患者進(jìn)行皮膚活檢，發(fā)現(xiàn)角化細(xì)胞和巨噬細(xì)胞均有HIV-1和HSV-1雜交后使HIV-1保留其感染性，而無需與CD4分子結(jié)合即能進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。此外HSV-1能刺激潛伏型HIV-1，而增加HIV-1/HSV-1共同感染和在組織中的復(fù)制。
表皮細(xì)胞發(fā)生氣球樣變性，其中可見有嗜酸性包涵體。表皮開始為網(wǎng)狀變性形成的多房性水皰，以后聚合為單房性水皰。真皮乳頭層有輕度水腫，有輕重不等炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。反應(yīng)嚴(yán)重時(shí)可有嚴(yán)重血管炎表現(xiàn)。
HSV感染的診斷要依據(jù)病史、臨床表現(xiàn)和實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果而定。有不潔性交史，而且在生殖器部位出現(xiàn)皮膚紅斑和原發(fā)性水皰，易復(fù)發(fā)等不難診斷。必要時(shí)可作皰液涂片，培養(yǎng)、接種、免疫熒光檢查。血清免疫抗體測(cè)定等，均有助于診斷和確定病毒類型。
一、細(xì)胞學(xué)方法
對(duì)皮損刮片做Wright-Gemsa(Tzanck試驗(yàn))或Papanicolaou染色，可檢出HSV感染特征的巨細(xì)胞包函體，但不能區(qū)別HSV感染或水痘―帶狀皰疹病毒感染，敏感性僅為病毒分離的60%。
二、培養(yǎng)法
從水皰底部取材做組織培養(yǎng)分離病毒，為目前較敏感、最特異的檢查方法，需5-10天，因其技術(shù)條件要求高，價(jià)格昂貴，不能普遍使用。
三、抗體檢測(cè)
目前最廣泛的是HSV-2抗體檢測(cè)，如蛋白印跡法也可用gD2作抗原檢測(cè)HSV-2抗體，具有敏感性，且能區(qū)分HSV-1和HSV-2的優(yōu)點(diǎn)。
四、基因診斷
(一)用PCR分型檢測(cè)單純皰疹病毒
PCR是一種敏感性高，特異性強(qiáng)的快速檢測(cè)方法，標(biāo)本中含有1fgHSV-DNA就可以檢出，其在HSV感染的診斷研究中發(fā)展較快，且分型檢測(cè)HSV是發(fā)展的趨勢(shì)。
1、標(biāo)本采集和處理
(1)標(biāo)本采集
①腦脊液：直接無菌采取患者0.5ml腦脊液標(biāo)本于無菌試管送檢.如肉眼可見血色，應(yīng)離心取上清。
②羊水及嬰兒血清:同上，應(yīng)避免溶血.
③腦組織:腦組織尸檢、活檢標(biāo)本，加1mlPBS標(biāo)本緩沖液研磨后，待檢。
④眼及皮膚病灶分泌物：用預(yù)測(cè)(半干)棉拭子直接取患處分泌物，置1mlPBS標(biāo)本緩沖液中送檢。
⑤生殖器(宮頸、陰道、外陰、陰莖)標(biāo)本：先用消毒棉拭子擦去病變部位表面粘液、污垢，再用預(yù)潮棉拭子用力擦拭患處分泌物，置1mlPBS標(biāo)本緩沖液中送檢。
(2)標(biāo)本處理
①預(yù)處理：所有液體標(biāo)本均可直接進(jìn)行模板制備;可以取100μl標(biāo)本液，離心5000r/min×5min后，去上清，取沉淀物進(jìn)行模板制備。
②模板制備：a:蛋白酶K消化裂解法：沉淀物加100μl蛋白酶K消化裂解液，55℃1h后，煮沸10min，離心5000r/min×5min，收集上清。b:水煮法：沉淀物加100μl蒸餾水，搖均水煮20min，離心5000r/min×5min收集上清。c:1%TritonX-100裂解法:取采集的標(biāo)本液100μl，加入1μlTritonX-100，水煮20min，5000r/min×5min，收集上清。d:5%NP-40裂解法：取采集的標(biāo)本液100μl，加5μlNP-40，水煮20min，5000r/min×5min收集上清。e:如標(biāo)本溶血嚴(yán)重經(jīng)上述裂解處理后，再加等體積酚-氯仿抽提、冷乙醇沉淀DNA，加10μlDW溶解待檢。
2、PCR擴(kuò)增
(1)引物設(shè)計(jì)。以HSVDNA聚合酶的高保守區(qū)為檢測(cè)靶序列以確保特異性。設(shè)計(jì)3個(gè)引物，一個(gè)上游共同性引物，DNAP5(5′ATGGTGAAAACATCGACATGTACGG3′)：二個(gè)下游特異性引物，DNAP3-1(5′CCTCGCGTTCGTCCTCGTCCTCC3′)和DNAP3-2(5′CCTCCTTGTCGAGGCCCCGAAAC3′)，可以分別擴(kuò)增出HSV-1469bpDNA片段(1981～2359)、HSV-2391bp片段(1561～1953)：從二型PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中設(shè)計(jì)了一個(gè)不分型的特異性探針HSVP35‘GGCGTAGTAGGCGGGGATGTCGCG3‘)。
(2)PCR實(shí)驗(yàn)體系。取模板10μl：DNAP50.5(0.2μmol/L)：DNAP3-10.5μl(0.2μmol/L)：DNAP3-20.5μl(0.2μmol/L)：4×dNTP8μl(4×200μmol/L)：10×dNTP8μl(4×200μmol/L);10×緩沖液10μl：DMSO4μl;加DW65.5μl;石蠟油30μl.。
水煮(96℃～100℃)7min
加TaqDNA聚合酶1μl;(2.5U)
72℃4min
↓
95℃40s
↓
65℃60s→72℃70s
↓33個(gè)循環(huán)
70℃4min
3.擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測(cè)和分析
(1)瓊脂糖凝膠電泳染色法：取擴(kuò)增產(chǎn)物20μl加樣品緩沖液4μl混勻后，點(diǎn)樣于2%瓊脂糖凝膠板，70V電泳15～20min，溴化乙錠(EB)染色5min，于紫外燈下觀察結(jié)果在溴酚藍(lán)后面有一條或二條亮紅帶為陽性結(jié)果，HSV-2帶在前，HSV-1帶在后，無帶則為陰性結(jié)果。
(2))XhoI酶譜法：取HSV-1型PCR產(chǎn)物50μl加XhoI50U，37℃1h后，置3%瓊脂糖凝膠中，70V電泳15～20min，可產(chǎn)生46bp片段帶(引物后面);與正常PCR產(chǎn)物比較，XhoI酶切后的大片段電泳位置前移。
(3)Southern印跡法：PCR產(chǎn)物20μl經(jīng)電泳分離后，用變性液處理60min，再用中和液處理90min，轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上：80℃烤膜2h，42℃預(yù)雜交(雜交液中)30min，加入32p標(biāo)記HSVP3探針后，42℃雜交過夜;次日用1%SDS/PBSpH7.2，42℃洗15min，0.5%SDS/PBSpH7.2，42℃洗15min;膜置X線暗盒內(nèi)放射性自顯影12～15h，顯影為陽性，不顯影為陰性。
(二)套式PCR
套式PCR(nestedprimers-polymerasechainreaction，NP-PCR)是通過“外側(cè)”、“內(nèi)側(cè)”兩對(duì)引物，即一對(duì)擴(kuò)增較大DNA片段的“外側(cè)”引物和一對(duì)位于擴(kuò)增產(chǎn)物中再擴(kuò)增小片段的“內(nèi)側(cè)”引物，這樣兩次連續(xù)放大可以提高PCR檢測(cè)的靈敏度，保證產(chǎn)物的特異性。但該方法不能分型，能100%檢出HSV-1，50%檢出HSV-2，應(yīng)改進(jìn)分型檢測(cè)HSV，更好地在臨床應(yīng)用和基礎(chǔ)研究中推廣應(yīng)用。
1、標(biāo)本處理：
(1)標(biāo)本采集同上
(2)DNA制備：①腦脊液：取100μlCSF水煮15min，加入250μl無水乙醇，放-30℃10min;離心10000g30min，去上清，30℃干燥后，加入10μlDW;②腦組織細(xì)胞：取沉淀物加100μl蛋白酶K消化裂解液，56℃作用1h，水煮10min;取上清加入等體積酚一氯仿(V/V)，輕搖10min，離心10000r/min×10min;取水相，加入250μlDW溶解。
2、PCR擴(kuò)增
(1)引物設(shè)計(jì)：選擇HSV1糖蛋白D基因?yàn)闄z測(cè)靶基因。
NP-PCR的引物和探針序列
“外”引物
BJHSV1.1ATCACGGTAGCCCGGCCGTGTGACA19-43
BJHGV1.2CATACCGGAACGCACCACACAA218-239
“內(nèi)引物”
BJHSV1.3CCATACCGACCACACCGACGA51-79
BJHSV1.4CGTAGTTGGTCGTTCGCGCTGAA166-188
探針
BJHSV-1PROTACGAGGAGGAGCTGTATAACAAAGTCTGT96-125
(2)PCR實(shí)驗(yàn)體系和程序:反應(yīng)體積為50μl;模板10μl;BJHSV1.10.5μl(0.2pmol/L);BJHSV1.20.5μl(0.2pmol/L);10×緩沖液5μl;4×dNTP4μl(4×200mmol/L);DW27μl;石蠟油30μl。循環(huán)參數(shù)為95℃30s;55℃30s;72℃60s;循環(huán)20次，取其擴(kuò)增產(chǎn)物1μl加入含有BJHSV1.3和BJHSV1.4反應(yīng)體系中進(jìn)行套式擴(kuò)增，先95℃變性2min，循環(huán)參數(shù)為95℃30s;55℃30s;72℃60s;循環(huán)30次后，72℃延伸5min;。
(3)擴(kuò)增產(chǎn)物分析：
①瓊脂糖凝膠電泳染色法：
取擴(kuò)增產(chǎn)物10μl點(diǎn)樣于2%瓊脂糖凝膠中，70V電泳15-20min，溴化乙錠染色5min，于紫外燈下觀察結(jié)果，在溴酚蘭后面有一條，或二條亮紅條帶為陽性結(jié)果，HSV-2帶在前，HSV-1帶在后，無帶則為陰性結(jié)果。
②Southern印跡法：
PCR產(chǎn)物20μl經(jīng)電泳分離后，用變性液處理60min，再用中和液處理90min，轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上，80℃烤膜2h，42℃預(yù)雜交(雜交液中)30min，加入32P標(biāo)記HSV探針后，42℃雜交過夜，次日用1%SDS/PBSpH7。2，42℃洗15min，0.5%SDS/PBSpH7.2，42℃洗15min;膜置X線暗盒內(nèi)，放射性自顯影12-15h，，顯影為陽性，不顯影為陰性。
(三)、聚合酶鏈反應(yīng)―酶譜法(polymerasechainreaction-endonucleasecleavagePCR-EC)
具有經(jīng)濟(jì)廣泛等特點(diǎn);不僅能一次性分型檢測(cè)HSV-1，HSV-2，EBV，CMV四種病毒，而且方法本身快速、方便、無放射線損傷，易被實(shí)驗(yàn)室接受?？蓹z出3個(gè)CFU的HSV1，靈敏度高，能檢測(cè)出中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染第1dCSF中HSVDNA陽性結(jié)果，并可用于藥物治療效果的評(píng)價(jià)。由于病毒的變異性，會(huì)出現(xiàn)酶切點(diǎn)突變丟失現(xiàn)象，從而造成酶切陰性結(jié)果。對(duì)此可以通過型特異性探針或序列分析解決。
1.標(biāo)本處理
(1)標(biāo)本采集，方法同上。
(2)DNA模板制備：每份標(biāo)本取200μl，按200μg/ml加入蛋白酶k，56℃作用1h;
加入等體積的酚―氯仿(v/v)輕搖10min，離心1000r/min×5min;取水相加入500μl(2.5倍體積)無水乙醇，-20℃過夜沉淀DNA，離心15000r/min×5min，吸去液體，30℃干燥后，加蒸餾水25μl溶解，待檢。
2.引物設(shè)計(jì)：
P1，5′CGACTTTGCCAGCCTGTACC3′
P2，5′AGTCCGTGTCCCCGTAGATG3′
(1)PCR實(shí)驗(yàn)體系：
反應(yīng)體積100μl;模板10μl;P10.5μl(10pmol/L)，P20.5μl(10pmol/L);4×dNTP4μl(4×200mmol/L);10×緩沖液10μl，DMSD5μl，DW65μl，循環(huán)參數(shù)為94℃60s;60℃60s;72℃60s;循環(huán)40次72℃延伸4min。
(2)擴(kuò)增產(chǎn)物檢測(cè)與酶切分型.
①第一步電泳鑒定:取10μlPCR產(chǎn)物加4μl樣品緩沖液，加入2%瓊脂糖凝膠板，70V電泳(5-20min)加EB染色5min后，紫外燈下觀察，可初步鑒定擴(kuò)增產(chǎn)物大小。
②酶切分析：分別取20μlPCR產(chǎn)物于2個(gè)Eppendorf管中，加入50μl無水乙醇，-20℃沉淀DNA，再分別用20μlSmal和BamHI反應(yīng)緩沖液溶解，加入SmaI或BamHI50U于相應(yīng)Eppendorf管內(nèi)，37℃作用1h。
③第二步電泳分型，取10μlPCR酶切物加4μl樣品緩沖液，加到2%瓊脂糖凝膠中，70V電泳，15-20min后，EB染色5min，與同步加入未酶切的PCR產(chǎn)物相對(duì)照。紫外燈下觀察，結(jié)果如下:
PCR-EC法檢測(cè)四種病毒結(jié)果
病毒型號(hào)靶片段SmaIBamHI
HSV1518bp476bp+42bp
HSV2518bp―225+293bp
EBV524bp100bp+424bp277bp+247bp
CMV589bp不需酶切，第一步電泳就可以區(qū)分
(四)用RT-PCR檢測(cè)單純皰疹病毒
RNA的聚合酶鏈反應(yīng)(RNA-PCR)，可能通過檢測(cè)HSV不同期的RNA，這不僅可診斷HSV感染，而且有利于HSV的潛伏期感染機(jī)制的深入研究。
RT-PCR是以RNA為模板經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)(RT)產(chǎn)生cDNA，再以cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增以達(dá)到檢測(cè)目的。因此，RNA-PCR也可稱為RT-PCR。
1、標(biāo)本處理：
組織塊細(xì)胞總RNA提取，取100mg組織標(biāo)本，加1ml硫氰酸胍變性液，于勻漿器中，室溫研磨均勻后，移入2.5mlEppendorf管中。依次加入0.1ml3mol/L(pH4.0)NaAc，1ml水飽和酚和0.2ml氯仿一異戊醇混勻，用力振搖10s，置冰浴15min。10000g4℃，離心20min，取上清水相(上層DNA、下層DNA和變性蛋白質(zhì))加入等體積異丙醇置-20℃1h，沉淀RNA。離心15000r/min×10min，棄上清，RNA重新用0.3ml硫氰酸胍變性液溶解，再加0.3ml異丙醇沉淀，-20℃1h，沉淀RNA.離心15000r/min×10min，去上清，沉淀RNA用75%冷乙醇洗一次，真空干燥。.加10μlTE緩沖液(pH7.4)溶解，低溫保存?zhèn)溆?臨用前冰浴溶解。
2、PCR擴(kuò)增:
(1)引物設(shè)計(jì):選擇HSV-1ICPO基因(極早期)為檢測(cè)靶基因.設(shè)計(jì)2個(gè)引物，
P15′GGATCCTCACGTGGTTACCCGCGGTCT3′
P25′AAGCTTCCGGGGCCGTCCCCGCGGGCG3′可以擴(kuò)增ICPO中266bp序列。
1個(gè)探針：5′CCGGCTGGAGCCGCCGCACCCTGCT3′。
(2)PCR實(shí)驗(yàn)體系：總反應(yīng)體積為50μl，模板10μl(0.25-1.0μg)P11μl(20pmol/L);P21μl(20pmol/L);4×dNTP4μl(200μmol/L);10×緩沖液5μl;AMV(逆轉(zhuǎn)錄酶)2μl(50U);DW26μl;循環(huán)參數(shù)，94℃變性2min后94℃50s，60℃60，72℃60s，循環(huán)40次后72℃延伸5min。
3、擴(kuò)增產(chǎn)物的鑒定：
(1)瓊脂糖凝膠電泳染色法：取10μlPCR擴(kuò)增產(chǎn)物加4μl樣品緩沖液，混勻后加樣2%瓊脂糖凝膠板，70V電泳15-20min，EB染色5min。紫外燈下觀察擴(kuò)增條帶。
(2)Southern印跡雜交法：用32P標(biāo)記的特異性探針檢測(cè)PCR產(chǎn)物，方法同上。
總之，在HSV感染性疾病的臨床診斷中，PCR能對(duì)前病毒或潛伏期低復(fù)制的HSV特異性靶DNA片段進(jìn)行擴(kuò)增檢測(cè)，遠(yuǎn)較DNA探針敏感，并能在血清中抗體出現(xiàn)前就可以檢出。因此，PCR無論是作為基礎(chǔ)研究手段，還是作為臨床檢驗(yàn)診斷方法，均具有廣闊的前景。
五、病理組織學(xué)診斷
細(xì)胞內(nèi)水腫，基底層形成大水皰，病灶周圍有多核巨細(xì)胞浸潤(rùn)，特別是多核白細(xì)胞與淋巴細(xì)胞充斥于病灶中間。
1.原發(fā)性GH
(1)潛伏期：為2～7天，常為3～5天。
(2)好發(fā)部位：男性多發(fā)生于龜頭、冠狀溝、尿道口、陰莖體及陰囊。女性好發(fā)于外陰、陰道及宮頸。兩性均可見于肛周、大腿及臀部。
(3)皮損形態(tài)及演變：患處先有燒灼感，隨即出現(xiàn)多個(gè)群集的紅色斑丘疹，并迅速變成小水皰。皰液起初清亮，以后漸變?yōu)槟撔?。水皰易破潰，形成糜爛或淺潰瘍，伴明顯疼痛。之后結(jié)痂而愈，病程約2～4周。
(4)全身癥狀：發(fā)病前或發(fā)病時(shí)可有全身癥狀，如發(fā)熱、頭痛、全身不適、頸項(xiàng)強(qiáng)直和骶2～4段感覺異常，或有排尿困難和白帶增多。幾乎所有患者均可伴腹股溝淋巴結(jié)腫大及壓痛。
2.復(fù)發(fā)性GH
約在原發(fā)性GH痊愈后1～4個(gè)月發(fā)生。首次HSV-2感染后1年內(nèi)近60%的患者復(fù)發(fā)，第1年內(nèi)可復(fù)發(fā)4～6次，以后復(fù)發(fā)次數(shù)減少。eves等發(fā)現(xiàn)在生殖器感染者中，HSV-1感染者復(fù)發(fā)率為14%，而HSV-2感染者則有60%復(fù)發(fā)。
復(fù)發(fā)性GH患者可有上述激發(fā)因素，或有前驅(qū)癥狀，全身癥狀較輕，復(fù)發(fā)部位多在原處，病程也較短，皮損約經(jīng)10天左右即消退。由于病損反復(fù)發(fā)作，難以控制，患者易出現(xiàn)精神負(fù)擔(dān)和性功能障礙，甚至發(fā)生抑郁癥等。但其損害與原發(fā)性者甚為相似。
3.特殊型GH
(1)男性同性戀者GH：本病僅次于淋球菌引起的肛門直腸炎。有人從62例有肛門直腸癥狀但淋球菌檢查陰性的男性同性戀者中，29%檢出了HSV-2。臨床表現(xiàn)多為嚴(yán)重的肛門、直腸疼痛，其他癥狀為便秘、肛門內(nèi)有分泌物、里急后重和發(fā)熱等。部分病人肛周有水皰或潰瘍。
(2)孕婦和新生兒GH：孕婦患GH后，其后果嚴(yán)重。對(duì)妊娠GH患者HSV-2攜帶者來說，最重要的是傳染給新生兒。當(dāng)產(chǎn)道內(nèi)存在HSV-2時(shí)，可有40%～60%的新生兒遭受感染，感染嚴(yán)重者可致死亡。
在妊娠早期，患GH的孕婦可影響胎兒，導(dǎo)致流產(chǎn)或死胎。新生兒的先天性感染，出生時(shí)可出現(xiàn)帶狀分布的皰疹、癲癇發(fā)作、出血傾向與肝脾腫大。如通過產(chǎn)道感染或胎膜早破而發(fā)生逆行感染時(shí)，輕者出生后數(shù)日至數(shù)周可無臨床癥狀，早期可僅有吃奶較差、興奮，以后可發(fā)生病毒血癥或皰疹性腦炎，重者發(fā)生播散性HSV感染，可出現(xiàn)高熱、呼吸困難、出血及中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變，預(yù)后不良。
因此，妊娠足月患GH者，如時(shí)間允許，應(yīng)每周從陰道及子宮頸取材，檢查有無病毒感染，若細(xì)胞學(xué)或病毒培養(yǎng)陽性而羊膜尚完整，或破裂后不足6h，建議剖宮產(chǎn)，以避免胎兒經(jīng)陰道分娩而發(fā)生新生兒HSV感染。
HSV-2感染與宮頸癌：有證據(jù)表明，生殖器HSV-2感染可能與宮頸癌的發(fā)生有關(guān)。血清流行病學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)，宮頸癌患者血清中抗HSV-2抗體較對(duì)照組婦女明顯增高。Nahmias等發(fā)現(xiàn)，GH患者發(fā)生宮頸非典型增生者為對(duì)照組的2倍，而發(fā)生原位癌者則為對(duì)照組的8倍。近年來研究證明，患侵襲性宮頸癌和癌前期病變的婦女宮頸脫落細(xì)胞中,HSV-2抗原陽性率明顯高于對(duì)照組，這種HSV-2抗原位于腫瘤細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)，提示為腫瘤細(xì)胞表達(dá)的病毒抗原。有人發(fā)現(xiàn)，宮頸有高度非典型增生、原位癌及鱗狀細(xì)胞癌者的活檢組織中，用間接免疫熒光染色可發(fā)現(xiàn)其中的HSV-2抗原。應(yīng)用DNA-RNA原位雜交技術(shù)在宮頸癌和癌前期組織中67%可發(fā)現(xiàn)HSV-2特異性mRNA。Frenkel等在宮頸癌組織中檢出HSV-2的DNA。還有作者從手術(shù)切除后經(jīng)放射的宮頸癌病變組織中分離出了HSV-2。
HSV-2感染與HIV感染與其他生殖器潰瘍性疾病一樣，GH增加了HIV感染的危險(xiǎn)性。HSV感染是HIV感染的輔助因子。在HIV感染者尤其是HIV感染的同性戀者中，HSV-2感染率更高，且GH的并發(fā)癥多而嚴(yán)重。在AIDS患者中，耐阿昔洛韋(無環(huán)鳥苷)的HSV毒株感染多見。
根據(jù)病史、癥狀和皮膚或黏膜表現(xiàn)，一般不難作出診斷。必要時(shí)可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢查，以明確病原體。
中醫(yī)病機(jī)和辨證本病多因體內(nèi)蘊(yùn)熱，外感毒邪，熱毒相結(jié)，肝膽二經(jīng)濕熱下注而生;或因肌膚虛弱，邪毒留膚，遇熱即發(fā)。
中醫(yī)辨證分型
1.濕熱下注型
主證：患處水皰、糜爛、癢痛交作，大便秘結(jié)，小便短赤。舌紅，苔黃膩，脈弦滑數(shù)。
辨證：濕熱下注，外感毒邪。
2.肝腎虧損型
主證：病情反復(fù)發(fā)作，兼有心煩寐少，腰酸頭昏，食少乏味，口干咽燥。舌質(zhì)淡，脈沉細(xì)。
辨證：清熱化濕，養(yǎng)肝滋腎。

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