探討芍藥甘草附子湯對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的作用機理

摘 要：目的：探討芍藥甘草附子湯對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的作用機理。方法：48只Wistar大鼠隨機分為空白對照組、模型組、雷公藤多甙組、芍藥甘草附子湯組。除空白組外，各組大鼠復(fù)制類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎模型，連續(xù)灌胃給藥21天，采血測定白介素-1β（IL-1β）、前列腺素E2（PGE2）水平，取左踝關(guān)節(jié)組織觀察病理改變。結(jié)果：芍藥甘草附子湯組血清中IL-1β、PGE2明顯降低，與模型組比較有顯著性差異。關(guān)節(jié)病理損害明顯改善。結(jié)論：芍藥甘草附子湯能夠降低IL-1β、PGE2含量從而減輕其對關(guān)節(jié)的侵害。

關(guān)鍵詞：芍藥甘草附子湯；類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；IL-1β；PGE2

芍藥甘草附子湯出自《傷寒論》，見于68條“發(fā)汗，病不解，反惡寒者，虛故也，芍藥甘草附子湯主之?！庇砂咨帧⒅烁什?、炮附子3味藥組成，其中芍藥酸苦，養(yǎng)血斂陰，柔肝止痛；甘草甘溫，補中緩急，止痛；二藥相合酸甘化陰，滋陰養(yǎng)血，緩急止痛；附子大辛大熱，補火助陽，散寒止痛，與甘草相合辛甘化陽，附子性猛，得甘草而緩，芍藥性寒，得附子而和。且芍藥可破陰結(jié)，祛除經(jīng)絡(luò)中之瘀，甘草補中堅筋骨，附子走而不守，通脈散寒。本方雖小，但用藥精煉，用治痹證包含祛除病因，改善臨床癥狀等功能。并且毒副作用較小，易長期堅持服用。為探討該方的作用機理，以其對弗氏完全佐劑關(guān)節(jié)炎(AA)大鼠的免疫調(diào)節(jié)及關(guān)節(jié)病理形態(tài)的影響為主要研究內(nèi)容進行實驗觀察。

1實驗材料

1．1實驗動物

普通級健康Wistar大鼠48只［遼寧中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心提供，許可證號：SYXY（遼）2003-0019］，雌雄各半，體重（180±20）g，隨機分為4組，即空白對照組（A組）、模型組（B組）、雷公藤多甙對照組（C組）、芍藥甘草附子湯組（D組），每組各12只。

1．2藥物

芍藥甘草附子湯，由白芍、炙甘草、炮附子組成（藥材由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院中藥房提供），大鼠用量按文獻方法折算。藥物經(jīng)常規(guī)煎煮、過濾、水浴蒸發(fā)至每毫升含生藥材0.78g，置4℃冰箱保存?zhèn)溆谩＠坠俣噙?江蘇美通制藥有限公司，國藥準字：Z32021007，批號：070115)，大鼠用量按文獻方法折算。用蒸餾水稀釋至每毫升含原藥物0.001g備用。

1．3試劑

白細胞介素－1β（ELISA）試劑盒（上海西唐生物科技有限公司） 。前列腺素E2(ELISA)試劑盒（北京北方偉業(yè)發(fā)展有限公司）。弗氏完全佐劑試劑盒（北京欣惠澤奧科技有限公司）。

1．4儀器

電熱恒溫水浴箱（HH.W21.Cr600,北京長安科學(xué)儀器廠）。飛鴿牌系列離心機（TDL-5-A）。

2實驗方法

2．1模型復(fù)制

將大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，于B、C、D 3組大鼠每只右后足足墊常規(guī)消毒后皮內(nèi)注射弗氏完全佐劑0.1mL，A組不造模。

2．2處理因素

造模第12天后，開始灌胃給藥，每日1次。C組給予芍藥甘草附子湯水煎液，按0.87mL/100g體重給藥，A、B兩組分別給予等量無菌生理鹽水，D組給予雷公藤多甙水溶液，按1mL/100g體重給藥。每周復(fù)查體重，及時調(diào)整藥量。

2．3取材

于給藥第21天后，用烏拉坦對大鼠進行腹腔麻醉，切開腹腔，用5mL注射器進行腹主動脈穿刺，抽取動脈血約3～5mL，離心后，取上清液待測。取左后足踝關(guān)節(jié)浸泡于福爾馬林中固定備用。 

2．4指標檢測

2．4．1形態(tài)學(xué)指標 左后足踝關(guān)節(jié)上0.5cm處摘取腫脹足爪，常規(guī)固定，脫水，包埋，切片，HE染色，用光鏡觀察。

2．4．2理化指標 采用酶聯(lián)免疫法測定其炎癥介質(zhì)IL-1β、 PGE2水平，按照試劑盒說明書操作。

2．5統(tǒng)計方法

實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差（±s）表示，統(tǒng)計學(xué)分析采用單因素方差分析及秩和檢驗。應(yīng)用SPSS10.0統(tǒng)計軟件進行處理。

3結(jié)果

3．1芍藥甘草附子湯對大鼠細胞因子的影響

結(jié)果見表1~2。模型組與空白組比較，IL-1β、PGE2明顯升高（P＜0.01）；而芍藥甘草附子湯組和雷公藤多甙組與模型組比較，IL-1β、PGE2 明顯降低（P＜0.01，P＜0.05）。

3．2光鏡下各組大鼠病變關(guān)節(jié)的病理改變

A組：關(guān)節(jié)軟骨表層細胞較少，呈單個分布，深層細胞較大且成行分布，多層滑膜細胞排列較為疏松。

B組：淋巴細胞、漿細胞及巨噬細胞明顯浸潤，滑膜細胞明顯增生，并蔓延跨過軟骨表面，滑膜細胞增生形成的成纖維細胞、小血管和炎性細胞侵入形成的肉芽組織(血管翳)導(dǎo)致軟骨表面糜爛、潰瘍，并有軟骨細胞溶解死亡，軟骨和骨骺破壞。

C組：軟骨細胞、骨細胞形態(tài)正常，滑膜細胞增生及炎性細胞浸潤較B組明顯減少。

D組：軟骨細胞、骨細胞形態(tài)正常，仍有大量滑膜細胞增生及炎性細胞浸潤。

　4討論

4．1病因病機

我國遠在公元前6世紀就有了這方面的記載，如《左傳?昭公元年傳》云：“風(fēng)淫末疾”，就是指的一種因受風(fēng)而得的四肢疾病。中醫(yī)學(xué)雖無類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的病名，但依據(jù)其臨床癥狀，本病屬于中醫(yī)學(xué)“痹癥”范疇，又可稱為“周痹”、“歷節(jié)”、“頑痹”、“骨痹”等。論痹首見于《內(nèi)經(jīng)》，《素問?痹論》“風(fēng)寒濕三氣雜至，合而為痹”認為風(fēng)寒濕氣夾雜侵襲人體，壅閉經(jīng)絡(luò)，閉阻氣血是其病機?！镀諠?諸風(fēng)門》曰：“體虛膚空，掩護不謹，以致風(fēng)寒濕之邪偏歷關(guān)節(jié)”。主要是由于先天稟賦不足，身體素弱，腠理不固，掩護不當，以致風(fēng)寒濕邪乘虛侵襲，流注經(jīng)絡(luò)、關(guān)節(jié)、肌肉，致氣血津液運行不暢而成?？梢姳咎摌藢嵤潜静〉牟C特點。本虛為氣血、陰陽、臟腑虧損，標實為外受風(fēng)寒濕熱之邪。外邪內(nèi)傷脾胃，運化功能失常，正氣無力抗邪,邪氣羈留日久，蘊結(jié)不解，閉阻氣血經(jīng)絡(luò)，耗津損液，化燥傷陰,由輕至重,必漸耗傷肝腎，筋骨失養(yǎng)，最終致畸致殘。

4．2中醫(yī)藥治療

芍藥甘草附子湯由白芍、炙甘草、炮附子3藥組成，仲景原意用其治療汗后陰陽兩虛證。上已述及類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）的發(fā)病機制為先天稟賦不足，腠理不固，風(fēng)寒濕邪乘虛侵襲，閉阻氣血經(jīng)絡(luò)，最終耗損肝腎。方中白芍性微寒，味苦、酸；入肝、脾經(jīng)，具有養(yǎng)血斂陰，柔肝止痛，平抑肝陽等作用，可“除血痹，通順血脈。”炙甘草健脾益氣補中，解百毒，緩急止痛，《神農(nóng)本草經(jīng)》曰其：“主五藏六腑，寒熱邪氣。堅筋骨，長肌肉，倍力?！薄度杖A子本草》：“通九竅，利百脈，益精養(yǎng)氣，壯筋骨”。二藥相合酸甘化陰，滋陰養(yǎng)血，緩急止痛。附子大辛大熱，可溫壯心腎之陽，且溫經(jīng)散寒除濕止痹痛，《神農(nóng)本草經(jīng)》：“主風(fēng)寒咳逆邪氣，溫中，金瘡破癥堅積聚，血瘕，寒濕。痿躄，拘攣，膝痛，不能行步。”與甘草相合辛甘化陽，且附子性猛，得甘草而緩，與白芍相伍，一腎一肝，一剛一柔，一燥一潤，一走一守，一氣一血，肝腎并補，陰陽互調(diào)，既可溫陽補腎，又可養(yǎng)陰柔肝,除濕柔筋止痛。RA病至后期，多表現(xiàn)為肝、腎、脾三臟不足，此與芍藥甘草附子湯的功效主治基本相符，故本方能治該病。

4．3實驗指標

大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎屬于變態(tài)反應(yīng)性免疫炎癥反應(yīng)：（1）IL-1β是關(guān)節(jié)軟骨破壞的最重要的炎癥介質(zhì)。IL-1β可刺激急性期蛋白，凝血酶原激活物等產(chǎn)生，刺激T細胞活化，刺激膠原酶合成；IL-1β刺激成骨細胞分泌粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子，反過來使破骨細胞產(chǎn)生增加，導(dǎo)致骨質(zhì)疏松；IL-1β可抑制軟骨蛋白多糖的合成，使軟骨降解。（2）PGE2：PGE2主要由成骨細胞合成，通過特異性受體的介導(dǎo)完成對骨組織代謝的調(diào)節(jié)。高濃度的PGE2可刺激軟骨細胞及破骨細胞減少蛋白多糖的合成、加速其降解，并可促進滑膜纖維母細胞及軟骨細胞產(chǎn)生釋放蛋白水解酶、膠原酶，釋放骨鈣，導(dǎo)致軟骨基質(zhì)崩解、軟骨吸收和骨破壞。

5結(jié)論

芍藥甘草附子湯能明顯地降低AA大鼠血清中IL-1β、PGE2含量(P＜0．05)，改善關(guān)節(jié)的病理損害,據(jù)此認為芍藥甘草附子湯對治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎有積極作用。本方仲景本意為治汗后陰陽兩虛證，而對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎亦有較好療效，可見中醫(yī)古方絕非專方專病，只要辨證相同，可廣范用于多系統(tǒng)疾病。

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文章來源：中華中醫(yī)藥學(xué)刊

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