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探討芍藥甘草附子湯對(duì)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的作用機(jī)理

道醫(yī) 2023-06-25 16:23:47

摘 要：目的：探討芍藥甘草附子湯對(duì)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的作用機(jī)理

。方法：48只Wistar大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型組
、雷公藤多甙組、芍藥甘草附子湯組
。除空白組外
，各組大鼠復(fù)制類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎模型
，連續(xù)灌胃給藥21天
，采血測(cè)定白介素-1β（IL-1β）
、前列腺素E2（PGE2）水平
，取左踝關(guān)節(jié)組織觀察病理改變。結(jié)果：芍藥甘草附子湯組血清中IL-1β
、PGE2明顯降低，與模型組比較有顯著性差異
。關(guān)節(jié)病理損害明顯改善
。結(jié)論：芍藥甘草附子湯能夠降低IL-1β
、PGE2含量從而減輕其對(duì)關(guān)節(jié)的侵害
。

關(guān)鍵詞：芍藥甘草附子湯

；類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎
；IL-1β；PGE2

芍藥甘草附子湯出自《傷寒論》

，見于68條“發(fā)汗，病不解，反惡寒者
，虛故也，芍藥甘草附子湯主之
?div id="jpandex" class="focus-wrap mb20 cf">！庇砂咨帧⒅烁什?div id="jpandex" class="focus-wrap mb20 cf">、炮附子3味藥組成，其中芍藥酸苦
，養(yǎng)血斂陰，柔肝止痛
；甘草甘溫
，補(bǔ)中緩急，止痛
；二藥相合酸甘化陰，滋陰養(yǎng)血
，緩急止痛
；附子大辛大熱
，補(bǔ)火助陽
，散寒止痛
，與甘草相合辛甘化陽
，附子性猛，得甘草而緩
，芍藥性寒，得附子而和
。且芍藥可破陰結(jié)
，祛除經(jīng)絡(luò)中之瘀
，甘草補(bǔ)中堅(jiān)筋骨，附子走而不守
，通脈散寒。本方雖小
，但用藥精煉
，用治痹證包含祛除病因
，改善臨床癥狀等功能
。并且毒副作用較小
，易長期堅(jiān)持服用
。為探討該方的作用機(jī)理
，以其對(duì)弗氏完全佐劑關(guān)節(jié)炎(AA)大鼠的免疫調(diào)節(jié)及關(guān)節(jié)病理形態(tài)的影響為主要研究內(nèi)容進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察。

1實(shí)驗(yàn)材料

1．1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

普通級(jí)健康Wistar大鼠48只［遼寧中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供

，許可證號(hào)：SYXY（遼）2003-0019］，雌雄各半
，體重（180±20）g
，隨機(jī)分為4組
，即空白對(duì)照組（A組）
、模型組（B組）
、雷公藤多甙對(duì)照組（C組）
、芍藥甘草附子湯組（D組），每組各12只
。

1．2藥物

芍藥甘草附子湯，由白芍

、炙甘草
、炮附子組成（藥材由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院中藥房提供）
，大鼠用量按文獻(xiàn)方法折算
。藥物經(jīng)常規(guī)煎煮、過濾
、水浴蒸發(fā)至每毫升含生藥材0.78g，置4℃冰箱保存?zhèn)溆?div id="4qifd00" class="flower right">
。雷公藤多?江蘇美通制藥有限公司
，國藥準(zhǔn)字：Z32021007
，批號(hào)：070115)
，大鼠用量按文獻(xiàn)方法折算。用蒸餾水稀釋至每毫升含原藥物0.001g備用
。

1．3試劑

白細(xì)胞介素－1β（ELISA）試劑盒（上海西唐生物科技有限公司）

。前列腺素E2(ELISA)試劑盒（北京北方偉業(yè)發(fā)展有限公司）。弗氏完全佐劑試劑盒（北京欣惠澤奧科技有限公司）
。

1．4儀器

電熱恒溫水浴箱（HH.W21.Cr600,北京長安科學(xué)儀器廠）。飛鴿牌系列離心機(jī)（TDL-5-A）

。

2實(shí)驗(yàn)方法

2．1模型復(fù)制

將大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，于B

、C
、D 3組大鼠每只右后足足墊常規(guī)消毒后皮內(nèi)注射弗氏完全佐劑0.1mL，A組不造模
。

2．2處理因素

造模第12天后，開始灌胃給藥

，每日1次
。C組給予芍藥甘草附子湯水煎液
，按0.87mL/100g體重給藥
，A、B兩組分別給予等量無菌生理鹽水
，D組給予雷公藤多甙水溶液，按1mL/100g體重給藥
。每周復(fù)查體重
，及時(shí)調(diào)整藥量
。

2．3取材

于給藥第21天后

，用烏拉坦對(duì)大鼠進(jìn)行腹腔麻醉，切開腹腔
，用5mL注射器進(jìn)行腹主動(dòng)脈穿刺，抽取動(dòng)脈血約3～5mL
，離心后
，取上清液待測(cè)
。取左后足踝關(guān)節(jié)浸泡于福爾馬林中固定備用
。 

2．4指標(biāo)檢測(cè)

2．4．1形態(tài)學(xué)指標(biāo) 左后足踝關(guān)節(jié)上0.5cm處摘取腫脹足爪，常規(guī)固定

，脫水，包埋
，切片，HE染色
，用光鏡觀察
。

2．4．2理化指標(biāo) 采用酶聯(lián)免疫法測(cè)定其炎癥介質(zhì)IL-1β、 PGE2水平

，按照試劑盒說明書操作。

2．5統(tǒng)計(jì)方法

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示

，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用單因素方差分析及秩和檢驗(yàn)
。應(yīng)用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理
。

3結(jié)果

3．1芍藥甘草附子湯對(duì)大鼠細(xì)胞因子的影響

結(jié)果見表1~2

。模型組與空白組比較
，IL-1β
、PGE2明顯升高（P＜0.01）；而芍藥甘草附子湯組和雷公藤多甙組與模型組比較
，IL-1β、PGE2 明顯降低（P＜0.01
，P＜0.05）
。

3．2光鏡下各組大鼠病變關(guān)節(jié)的病理改變

A組：關(guān)節(jié)軟骨表層細(xì)胞較少

，呈單個(gè)分布
，深層細(xì)胞較大且成行分布，多層滑膜細(xì)胞排列較為疏松
。

B組：淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞及巨噬細(xì)胞明顯浸潤

，滑膜細(xì)胞明顯增生
，并蔓延跨過軟骨表面
，滑膜細(xì)胞增生形成的成纖維細(xì)胞
、小血管和炎性細(xì)胞侵入形成的肉芽組織(血管翳)導(dǎo)致軟骨表面糜爛
、潰瘍
，并有軟骨細(xì)胞溶解死亡
，軟骨和骨骺破壞。

C組：軟骨細(xì)胞

、骨細(xì)胞形態(tài)正常，滑膜細(xì)胞增生及炎性細(xì)胞浸潤較B組明顯減少
。

D組：軟骨細(xì)胞

、骨細(xì)胞形態(tài)正常，仍有大量滑膜細(xì)胞增生及炎性細(xì)胞浸潤
。

　4討論

4．1病因病機(jī)

我國遠(yuǎn)在公元前6世紀(jì)就有了這方面的記載，如《左傳?昭公元年傳》云：“風(fēng)淫末疾”

，就是指的一種因受風(fēng)而得的四肢疾病。中醫(yī)學(xué)雖無類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的病名
，但依據(jù)其臨床癥狀
，本病屬于中醫(yī)學(xué)“痹癥”范疇，又可稱為“周痹”
、“歷節(jié)”、“頑痹”
、“骨痹”等
。論痹首見于《內(nèi)經(jīng)》
，《素問?痹論》“風(fēng)寒濕三氣雜至
，合而為痹”認(rèn)為風(fēng)寒濕氣夾雜侵襲人體，壅閉經(jīng)絡(luò)
，閉阻氣血是其病機(jī)?div id="jfovm50" class="index-wrap">！镀諠?jì)方?諸風(fēng)門》曰：“體虛膚空
，掩護(hù)不謹(jǐn)
，以致風(fēng)寒濕之邪偏歷關(guān)節(jié)”
。主要是由于先天稟賦不足，身體素弱
，腠理不固
，掩護(hù)不當(dāng)，以致風(fēng)寒濕邪乘虛侵襲
，流注經(jīng)絡(luò)
、關(guān)節(jié)
、肌肉
，致氣血津液運(yùn)行不暢而成。可見本虛標(biāo)實(shí)是本病的病機(jī)特點(diǎn)
。本虛為氣血
、陰陽、臟腑虧損
，標(biāo)實(shí)為外受風(fēng)寒濕熱之邪。外邪內(nèi)傷脾胃
，運(yùn)化功能失常
，正氣無力抗邪,邪氣羈留日久
，蘊(yùn)結(jié)不解
，閉阻氣血經(jīng)絡(luò)，耗津損液
，化燥傷陰,由輕至重,必漸耗傷肝腎，筋骨失養(yǎng)
，最終致畸致殘
。

4．2中醫(yī)藥治療

芍藥甘草附子湯由白芍、炙甘草

、炮附子3藥組成，仲景原意用其治療汗后陰陽兩虛證
。上已述及類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）的發(fā)病機(jī)制為先天稟賦不足
，腠理不固
，風(fēng)寒濕邪乘虛侵襲
，閉阻氣血經(jīng)絡(luò)，最終耗損肝腎
。方中白芍性微寒
，味苦、酸
；入肝、脾經(jīng)
，具有養(yǎng)血斂陰
，柔肝止痛，平抑肝陽等作用
，可“除血痹，通順血脈
?div id="jfovm50" class="index-wrap">！敝烁什萁∑⒁鏆庋a(bǔ)中
，解百毒
，緩急止痛，《神農(nóng)本草經(jīng)》曰其：“主五藏六腑
，寒熱邪氣。堅(jiān)筋骨
，長肌肉
，倍力?div id="jpandex" class="focus-wrap mb20 cf">！薄度杖A子本草》：“通九竅，利百脈
，益精養(yǎng)氣
，壯筋骨”
。二藥相合酸甘化陰
，滋陰養(yǎng)血，緩急止痛
。附子大辛大熱，可溫壯心腎之陽
，且溫經(jīng)散寒除濕止痹痛
，《神農(nóng)本草經(jīng)》：“主風(fēng)寒咳逆邪氣
，溫中
，金瘡破癥堅(jiān)積聚
，血瘕，寒濕
。痿躄，拘攣
，膝痛
，不能行步
?div id="jpandex" class="focus-wrap mb20 cf">！迸c甘草相合辛甘化陽，且附子性猛
，得甘草而緩，與白芍相伍
，一腎一肝，一剛一柔
，一燥一潤，一走一守
，一氣一血
，肝腎并補(bǔ)，陰陽互調(diào)
，既可溫陽補(bǔ)腎，又可養(yǎng)陰柔肝,除濕柔筋止痛
。RA病至后期
，多表現(xiàn)為肝
、腎
、脾三臟不足，此與芍藥甘草附子湯的功效主治基本相符
，故本方能治該病。

4．3實(shí)驗(yàn)指標(biāo)

大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎屬于變態(tài)反應(yīng)性免疫炎癥反應(yīng)：（1）IL-1β是關(guān)節(jié)軟骨破壞的最重要的炎癥介質(zhì)

。IL-1β可刺激急性期蛋白
，凝血酶原激活物等產(chǎn)生
，刺激T細(xì)胞活化
，刺激膠原酶合成
；IL-1β刺激成骨細(xì)胞分泌粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子，反過來使破骨細(xì)胞產(chǎn)生增加
，導(dǎo)致骨質(zhì)疏松；IL-1β可抑制軟骨蛋白多糖的合成
，使軟骨降解
。（2）PGE2：PGE2主要由成骨細(xì)胞合成
，通過特異性受體的介導(dǎo)完成對(duì)骨組織代謝的調(diào)節(jié)
。高濃度的PGE2可刺激軟骨細(xì)胞及破骨細(xì)胞減少蛋白多糖的合成、加速其降解
，并可促進(jìn)滑膜纖維母細(xì)胞及軟骨細(xì)胞產(chǎn)生釋放蛋白水解酶、膠原酶
，釋放骨鈣
，導(dǎo)致軟骨基質(zhì)崩解
、軟骨吸收和骨破壞
。

5結(jié)論

芍藥甘草附子湯能明顯地降低AA大鼠血清中IL-1β、PGE2含量(P＜0．05)

，改善關(guān)節(jié)的病理損害,據(jù)此認(rèn)為芍藥甘草附子湯對(duì)治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎有積極作用。本方仲景本意為治汗后陰陽兩虛證
，而對(duì)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎亦有較好療效
，可見中醫(yī)古方絕非專方專病，只要辨證相同
，可廣范用于多系統(tǒng)疾病。

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文章來源：中華中醫(yī)藥學(xué)刊

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