以神經(jīng)內(nèi)肽酶為靶點篩選治療阿爾茨海默癥天然藥物的實驗研究

目的篩選具有提高神經(jīng)內(nèi)肽酶(NEP)活性從而降低神經(jīng)細胞β-淀粉樣肽(Aβ)水平的藥物,為臨床治療阿爾茨海默癥(AD)提供實驗依據(jù)。方法以脂質(zhì)體LipofectamineTM2000介導(dǎo)瑞典突變型淀粉樣肽前體蛋白(sweAPP)表達質(zhì)粒pcDNA3.1-sweAPP轉(zhuǎn)染神經(jīng)母細胞瘤細胞SK-N-SH,G418篩選獲得穩(wěn)定表達細胞株作為AD模型細胞,采用蛋白印跡技術(shù)檢測sweAPP表達情況,酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測細胞培養(yǎng)基中A4β0和A4β2含量變化,進而以MTT法檢測各天然藥物對SK-N-SH細胞增殖能力的影響,確定藥物的有效濃度及最佳作用時間,以NEP肽酶實驗檢測藥物對NEP酶活性影響,ELISA法檢測藥物對Aβ水平的影響。結(jié)果Western Blot結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染后SK-N-SH細胞高表達sweAPP蛋白;ELISA結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染后的SK-N-SH細胞分泌A4β0、A4β2明顯升高,分別為轉(zhuǎn)染前的7.26和3.27倍(P<0.05)。NEP肽酶實驗檢測結(jié)果顯示,茶多酚、人參皂苷Rb1、Rg3能夠明顯提高NEP酶活性,分別為(117±2.8)%(、131±4.0)%和(121±1.6)%。ELI...

完成機構(gòu)：山東大學(xué)醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究所 山東大學(xué)附屬濟南市中心醫(yī)院

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