刀豆又稱大弋豆、刀豆子,為豆科植物刀豆的種子。其性溫,味甘,含有蛋白質(zhì)、脂肪、尿素酶、血球凝集素、刀豆氨酸、淀粉等成分,具有溫中下氣、益腎補(bǔ)元的功效,用于治療虛寒呃逆、嘔吐、腹脹、腎虛腰痛、痰喘等癥。市場上有以同科植物常春油麻藤的種子冒充刀豆,使用時(shí)注意鑒別。
真品刀豆
外觀呈扁卵形或扁腎形,長約2~3.5厘米,寬約1~2厘米,厚約0.5~1.2厘米,表面淡紅色或紅紫色,少數(shù)類白色或?yàn)鹾谏?,略具光澤,微皺縮不平。邊緣具灰黑色種臍,長約1.5~2.5厘米,其上有類白色膜片狀的珠柄殘余,靠近種臍的一端,有珠孔呈小凹點(diǎn)狀,他端有一深色的合點(diǎn),合點(diǎn)與種臍間有隆起的種脊;質(zhì)堅(jiān)硬,難破開,種皮革質(zhì),內(nèi)表面棕綠色,內(nèi)有2片肥厚的子葉,黃白色,胚根細(xì)小,位于珠孔的一端,歪向一側(cè);聞之氣無,口嘗味淡,嚼之具有豆腥味。
偽品常春油麻藤的干燥種子
外觀呈扁橢圓形或類扁圓形,表面為棕至棕黑色,邊緣有黑褐色、近環(huán)形的種臍,約占種子周長的一半以上。種臍有灰黑色珠柄殘基;雖亦質(zhì)硬,但內(nèi)表面為黑褐色,子葉為灰白色;聞之雖亦氣微,口嘗亦味淡,但嚼之無豆腥味。
現(xiàn)代藥理研究表明,刀豆所含的血球凝集素具有抗腫瘤作用,能使腫瘤細(xì)胞重新恢復(fù)到正常細(xì)胞的生長狀態(tài),血球凝集素可凝集由各種致癌劑所引起的變形細(xì)胞,而對(duì)正常細(xì)胞,只有在用胰蛋白酶處理后,方能凝集,這是與變形細(xì)胞表面膜上的葡萄糖或甘露糖樣的部位結(jié)合而起作用的,而這時(shí)正常細(xì)胞是被掩蓋著的,故不會(huì)起到凝集作用,而偽品常春油藤的種子雖與刀豆為同科植物,但不具備這些功效,故不可代替刀豆使用。
中藥有毒性,其實(shí)是一個(gè)基本常識(shí)。但由于人們現(xiàn)在更多的是使用西藥,西藥的化學(xué)毒性比較明顯、劇烈,給人印象較深。而中藥多是生物制藥,毒性比較低且不十分明顯,使不少人產(chǎn)生中藥無毒的認(rèn)識(shí)誤區(qū)。以致近來有關(guān)中藥也有毒性的宣傳似乎成了“新發(fā)現(xiàn)”,并使不少患者對(duì)中藥產(chǎn)生畏懼心理,甚至在一些醫(yī)院臨床醫(yī)生也不敢開中藥,藥房不肯進(jìn)中藥。
中藥的毒性,自我們的祖先開始使用中藥時(shí)就有記載。他們?cè)谥委熂膊〉倪^程中,采取了加工炮制、配伍禁忌、合理使用等多種方式方法,使中藥的毒性降至最低,有效成分發(fā)揮最大功能,又不造成對(duì)人體的傷害 ......
植物中毒
菜豆
又稱扁豆、四季豆、刀豆、豆角、蕓豆。生的菜豆中含有對(duì)人體有害成分,人們食用了
炒、煮不透的菜豆后可中毒。
毒性:有毒成分為扁豆豆莢中含的皂素和豆粒中含有的血細(xì)胞凝集素。放置過久的菜豆
可產(chǎn)生大量 對(duì)人體有害的亞硝酸鹽。皂素對(duì)消化道有強(qiáng)烈刺激作用,還可引起消化道出血
性炎癥,并對(duì)紅細(xì)胞有溶解作用;血細(xì)胞凝集素具有紅細(xì)胞凝集作用。亞硝酸鹽可形成高鐵
血紅蛋白血癥。
中毒表現(xiàn):進(jìn)食不熟的菜豆后數(shù)分鐘至2~4小時(shí)出現(xiàn)惡心、嘔吐、腹痛、胃部燒灼感、腹脹,水樣便等,重
者可出現(xiàn)頭暈、頭痛、四肢麻木、心慌、胸悶、嘔血等癥狀,少數(shù)可發(fā)生溶血性貧血。
緊急處理:立即手法或藥物催吐,催吐后口服活性炭50克。出現(xiàn)嘔血、呼吸困難、皮膚黃染等嚴(yán)重癥狀時(shí)要
及時(shí)到醫(yī)院就診。經(jīng)恰當(dāng)?shù)奶幚砗蠖嘣?~3天內(nèi)恢復(fù)。
中毒預(yù)防:皂素在100℃,經(jīng)30分鐘毒性消失。不要進(jìn)食放置過久的菜豆,烹制前要洗凈,最好能夠在水中
浸泡15分鐘;菜豆烹調(diào)至無原有的生綠色和生豆味即可。
蓖麻
蓖麻,又名草麻、紅麻。種子稱為大麻子或蓖麻子,含油50~70%。油可作為工業(yè)用油或醫(yī)用緩瀉劑。生食種子或服過量蓖麻油可引起中毒。
毒性:葉、枝、種均有毒。主要毒性成分為蓖麻毒素和蓖麻堿。前者為毒蛋白,對(duì)肝、腎有較強(qiáng)毒性,并可抑制呼吸和血管中樞,對(duì)紅細(xì)胞有溶解作用,人的致死量為2~7毫克;后者含氰基,對(duì)肝、腎有損害,160毫克可致人死亡;另外尚有蓖麻凝血素,對(duì)紅細(xì)胞有強(qiáng)烈凝集作用。小兒生食蓖麻子2~7粒,成人生食12~20粒,可致死。
中毒表現(xiàn):食后18到24小時(shí)出現(xiàn)咽部燒灼感、頭痛、惡心、嘔吐、腹痛、昏睡、高熱、皮膚紅斑等。嚴(yán)重者可便血,心、腎功能障礙。
緊急處理:立即手法或藥物催吐,催吐后口服蛋清、牛奶。出現(xiàn)中毒表現(xiàn)者要及時(shí)到醫(yī)院診治。
中毒預(yù)防:庭院不要種植蓖麻。中毒一般為兒童,所以在外出旅游時(shí)要學(xué)會(huì)識(shí)別方法,不要隨便采食野果。
油桐
又名三年桐、五年桐、桐樹。其果實(shí)榨出的油稱桐油。桐油的外觀、味道與一般食用植物油相似,大量誤食桐油、桐子或多日連續(xù)少量進(jìn)食,均可導(dǎo)致中毒。
毒性:油桐樹的葉、樹皮、種子、根均含有毒成分,種子的毒性最大。主要有毒成分為桐子酸及異桐子酸,對(duì)胃腸道有強(qiáng)烈刺激作用,并可損害肝、腎。榨油后的桐油餅所含毒甙,毒性大于桐油。
中毒表現(xiàn):食后半小時(shí)到4小時(shí)出現(xiàn)口渴、胸悶、頭暈。多數(shù)患者有全身無力、厭食、惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉,多為水樣便。嚴(yán)重者可有便血、四肢麻木、呼吸困難及肝臟、腎臟損傷。發(fā)病較慢者可有發(fā)熱。
預(yù)防:禁食桐油、桐餅或桐子;不要將桐油與食用油放在一起,以免誤用。不要用盛過桐油的容器再盛食用油。桐油有特殊氣味,所以不要食用有異味的油或油炸食品。
荔枝
荔枝為荔枝樹的果實(shí),荔枝核可以入藥。過量進(jìn)食荔枝可以中毒,稱荔枝病。
毒性:中毒機(jī)理不完全清楚。一般認(rèn)為食入大量荔枝會(huì)影響其它食物攝取和能量代謝,使得血糖減低,并出現(xiàn)相應(yīng)的癥狀。
中毒表現(xiàn):大量進(jìn)食荔枝后出現(xiàn)饑餓、口渴、惡心、頭暈、眼花、心慌、出汗、面色蒼白、皮膚冰冷等表現(xiàn),嚴(yán)重者會(huì)發(fā)生昏迷、抽搐、呼吸不規(guī)則、心律不齊、四肢及面部肌肉癱瘓,血壓下降,呼吸、心臟停止死亡。
緊急處理:進(jìn)食荔枝后,如出現(xiàn)饑餓、無力、頭暈等癥狀時(shí),要盡快口服糖水或糖塊,一般多能很快恢復(fù)。出現(xiàn)中毒表現(xiàn)者要及時(shí)到醫(yī)院救治。
中毒預(yù)防:食荔枝要節(jié)制,不要過量食用。
桑椹
桑椹為桑樹的果穗,可入藥或生食。桑椹含維生素、胡蘿卜素、揮發(fā)油、胰蛋白酶抑制物等,后者為主要有毒成分。食入過多可致中毒。
毒性:桑椹所含的揮發(fā)油對(duì)消化道有刺激作用;胰蛋白酶抑制物可抑制腸道內(nèi)的多種消化酶,特別是對(duì)胰蛋白酶活性抑制作用較強(qiáng),使其不能破壞C型產(chǎn)氣莢膜桿菌B毒素,可致出血性腸炎。
中毒表現(xiàn):大量進(jìn)食桑椹后出現(xiàn)惡心,嘔吐,無力、劇烈腹痛和腹瀉;嚴(yán)重者可出現(xiàn)血性便、血壓下降、休克等。
緊急處理:立即手法或藥物催吐,催吐后可給患者口服活性炭50克。出現(xiàn)劇烈腹痛、腹瀉,特別是有血性便者要及時(shí)到醫(yī)院診治。
中毒預(yù)防:要限制一次進(jìn)食桑椹量。特別要教育兒童不要過量采食。
馬桑
馬桑果,又名毒空木、馬鞍子、黑果果、扶桑等。為落葉灌木,高4~6米,樹皮紅褐色,葉橢圓形,花小,綠紫色,果實(shí)熟時(shí)呈紅色或紫黑色,扁圓形,外形似桑椹,味微甜。易被兒童采食。主要分布于我國西北、西南等地。其葉、根和樹皮供藥用。馬桑有毒,尤以果實(shí)含有毒物質(zhì)最多。
毒性:有毒成分為馬桑內(nèi)酯、吐丁內(nèi)酯等。有毒成分刺激呼吸中樞、血管運(yùn)動(dòng)中樞及迷走神經(jīng)中樞,增強(qiáng)脊髓反射,引起各種臨床癥狀。曾有兒童服200粒馬桑果實(shí)而中毒。
中毒表現(xiàn):食后半小時(shí)到三小時(shí)出現(xiàn)頭痛、頭昏、胸悶、惡心、嘔吐、腹痛等。嚴(yán)重者全身發(fā)麻、心率減慢、呼吸加快,陣發(fā)性抽搐。反復(fù)發(fā)作驚厥可引起呼吸衰竭。
緊急處理:立即手法或藥物催吐,催吐后取小蘇打(碳酸氫鈉)10克溶于溫開水中灌胃,亦可用蛋清灌胃。出現(xiàn)中毒表現(xiàn)者要及時(shí)到醫(yī)院診治。
中毒預(yù)防:中毒者一般為兒童,外出旅游時(shí)要教育孩子不要采食野果。
果仁
能引起中毒的果仁主要有苦杏仁、苦桃仁、枇芭仁、亞麻仁、楊梅仁、李子仁、櫻桃仁、蘋果仁等。中毒主要是食用了未經(jīng)處理的果仁所至。大量生食甜杏仁亦可中毒。
毒性:上述果仁含有氰甙類毒物,如苦杏仁含有的苦杏仁甙。氰甙類物質(zhì)在有關(guān)酶的作用下,可水解生成氫氰酸及苯甲醛等,氫氰酸能抑制細(xì)胞色素氧化酶活性,造成細(xì)胞內(nèi)窒息,多因呼吸中樞麻痹而死亡。生苦杏仁中毒量:成人生食40~60粒,小兒生食10~20粒,致死量約為60克。生苦桃仁、生枇芭仁致死量分別為0.6克(約1粒)/公斤體重和2.5~4克(2~3粒)/公斤體重。
中毒表現(xiàn):一般在進(jìn)食果仁2小時(shí)內(nèi)發(fā)病。輕度中毒者出現(xiàn)惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉及面紅、口唇及舌麻木、頭痛、頭暈、心慌、胸悶等,呼出氣中有苦杏仁味。重度中毒可出現(xiàn)抽搐等。另外,尚可出現(xiàn)四肢末端疼痛、感覺異常。
緊急處理:立即手法或藥物催吐。出現(xiàn)中毒癥狀者要立即吸入亞硝酸異戊酯,同時(shí)送醫(yī)院搶救。
中毒預(yù)防:不食用未經(jīng)處理的果仁。將果仁去皮去尖,熱水浸泡一天,不加蓋煮熟,使氫氰酸揮發(fā)后方可食用。
薄荷
薄荷又名蘇薄荷,為常用中藥,其提取劑薄荷醇為清涼油的主要成分。民間也有用薄荷葉外敷或煮成糊狀外用治療某些疾病。中毒常因過量服用所致。
毒性:薄荷含揮發(fā)油1~3%,油中含薄荷醇(薄荷腦)80%左右,其次為薄荷酮、異薄荷醇、蒎烯等。對(duì)消化道有刺激作用,對(duì)延髓中樞及心臟有抑制作用。服薄荷腦20毫升可致嚴(yán)重中毒。
中毒表現(xiàn):多在進(jìn)食后10余分鐘至數(shù)小時(shí)發(fā)病。表現(xiàn)為惡心、嘔吐、腹痛、頭昏、手足麻木、步態(tài)不穩(wěn)、昏睡、昏迷等。部分患者可出現(xiàn)喉頭痙攣、呼吸慢、呼吸道分泌物增加、血壓下降等。可發(fā)生過敏性皮膚改變。
緊急處理:立即手法或藥物催吐,催吐后給患者口服活性炭50克。中毒后24小時(shí)內(nèi)禁食牛奶及油膩食物。出現(xiàn)中毒癥狀者要盡快到醫(yī)院就診。
中毒預(yù)防:避免小兒采食薄荷。不要聽信偏方,大量食用薄荷。治療要在中醫(yī)大夫的指導(dǎo)下進(jìn)行。
毒芹
又稱野芹菜、毒人參、芹葉鉤吻、斑毒芹等。為多年生草本植物,形態(tài)似芹菜。常因誤食中毒。
毒性:全株有毒,以成熟種子毒性最強(qiáng)。主要有毒成分為毒芹堿、甲基毒芹堿和毒芹毒素。毒芹堿的作用類似箭毒,能麻痹運(yùn)動(dòng)神經(jīng),抑制延髓中樞。人中毒量為30~60毫克,致死量為120~150毫克;加熱與干燥可降低毒芹毒性。毒芹毒素主要興奮中樞神經(jīng)系統(tǒng)。
中毒表現(xiàn):誤服進(jìn)食30~60分鐘后出現(xiàn)口咽部燒灼感,流涎、惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉、四肢無力、站立不穩(wěn)、吞咽及說話困難、瞳孔散大、呼吸困難等。嚴(yán)重者可因呼吸麻痹死亡。嘔吐物有特殊臭味。
緊急處理:立即手法或藥物催吐,催吐后給口服活性炭50克。多飲水。進(jìn)食量較大或雖進(jìn)食量小但出現(xiàn)中毒表現(xiàn)者應(yīng)盡快到醫(yī)院就診。
中毒預(yù)防:不要采摘、食用不明成分的野生植物。毒芹分布地區(qū)人們要學(xué)會(huì)鑒別食用芹菜和毒芹。
馬鈴薯
又稱土豆、山藥蛋子,綠色未成熟的馬鈴薯、發(fā)芽的馬鈴薯含有對(duì)人體有害成分,可致中毒。
毒性:有毒的成分為茄堿,又稱馬鈴薯毒素或龍葵素,以嫩芽中含有的有毒成分濃度最高,每克嫩芽含茄堿420~730毫克,其次為花、葉及塊莖的外皮含量較高。茄堿是一種弱堿性的甙生物堿,溶于水,與醋酸共同加熱可破壞其毒性。。200~400毫克茄堿可引起人中毒。茄堿對(duì)黏膜有刺激作用,對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng),尤其對(duì)呼吸中樞有顯著麻醉作用,并有溶血作用。
中毒表現(xiàn):進(jìn)食未成熟或發(fā)芽馬鈴薯后口舌發(fā)麻,數(shù)十分鐘至數(shù)小時(shí)后出現(xiàn)上腹部不適,繼之無力、惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉等。
緊急處理:立即手法或藥物催吐,催吐后口服活性炭50克。出現(xiàn)中毒表現(xiàn)的需到醫(yī)院就診。
中毒預(yù)防:馬鈴薯要保存在低溫、無陽光直射的地方。不購買、不食用綠皮、已經(jīng)發(fā)芽、有黑斑的馬鈴薯。對(duì)輕微發(fā)芽的馬鈴薯,必須徹底挖去芽、芽眼及芽周部分,用清水浸泡30分鐘后再烹制。
白果樹
白果樹又稱銀杏樹,種子稱白果或銀杏。白果肉、外種皮、種仁及綠色的胚含白果二酚,白果酚、白果酸等有毒成分及銀杏毒,種仁尚含微量氫氰酸,若食用過量或生食可引起中毒。中毒多見于兒童。
毒性:白果二酚,白果酚、白果酸等對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)有先興奮后抑制的作用,并損害末梢神經(jīng),對(duì)皮膚黏膜和胃腸道有強(qiáng)烈刺激作用,白果酸和銀杏毒有溶血作用。三歲一下嬰幼兒中毒量為10粒左右;兒童中毒量為10~50粒。
中毒表現(xiàn):口服1~12小時(shí)后可出現(xiàn)惡心、嘔吐、腹瀉、頭痛、頭暈、乏力、煩躁等;重度中毒者可發(fā)生抽搐、昏迷和腦水腫;部分病人可有末梢神經(jīng)感覺障礙及下肢遲緩性癱瘓。
緊急處理:立即手法或藥物催吐,催吐后口服牛奶300毫升,或蛋清適量。有中毒表現(xiàn)者要及時(shí)到醫(yī)院治療。
中毒預(yù)防:白果肉可食用,但切忌食用過量。勿將白果放在小兒能夠接觸到的地方。白果的有毒成分易溶于水,加熱后毒性減低,所以食用前可用清水浸泡1個(gè)小時(shí)以上,加熱后食用更為安全。
麻瘋樹
麻瘋樹又名假花生樹、青桐木、黃腫樹、臭油桐、亮桐、水漆、桐油樹等,屬大戟科灌木,高3~4米。種子呈長圓形,種衣呈灰黑色??梢吧酁樗幱迷耘嘀参?。野生麻風(fēng)樹分布于兩廣、瓊、云、貴、川等省。中毒多因誤食其種子引起。
毒性:麻風(fēng)樹全株有毒。莖、葉、樹皮均有豐富的白色乳汁,內(nèi)含大量毒蛋白,但以種子含量最高。其毒性與蓖麻毒蛋白類似。種子中還含有少量氫氰酸及川芎嗪。毒蛋白有強(qiáng)烈的胃腸道刺激作用,可導(dǎo)致出血性胃腸炎。川芎嗪是一種生物堿,能夠抑制血管運(yùn)動(dòng)中樞,引起血壓下降,還可抑制呼吸中樞出現(xiàn)產(chǎn)生呼吸困難。食2~3粒即可中毒,7~8??芍滤?。
中毒表現(xiàn):進(jìn)食麻瘋樹種子后數(shù)小時(shí)至10余小時(shí)發(fā)病,主要表現(xiàn)為頭痛、頭暈、惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉等消化道癥狀,也可出現(xiàn)畏寒、發(fā)熱、腰痛、醬油色尿、黃疸、貧血等溶血癥狀。部分患者還可表現(xiàn)出皮膚干燥、口干、面部皮膚潮紅、瞳孔輕度擴(kuò)大,心率快等。中毒輕者一般一天左右能夠恢復(fù)。
緊急處理:誤食麻瘋樹的果實(shí)后,應(yīng)立即手法或藥物催吐,多飲水。出現(xiàn)中毒表現(xiàn)的要及時(shí)到醫(yī)院處理。
中毒預(yù)防:到麻風(fēng)果分布區(qū)旅游時(shí)要學(xué)會(huì)麻風(fēng)果的識(shí)別方法,對(duì)不認(rèn)識(shí)的野果不要隨便食用。
夾竹桃
夾竹桃有紅花、白花、黃花三種,一般作為觀賞植物。
毒性:全株有毒,含強(qiáng)心甙類物質(zhì),作用類似治療心臟病的洋地黃,有強(qiáng)心、利尿功效。誤服對(duì)消化系統(tǒng)、心臟和神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生毒作用。夾竹桃含歐夾竹桃甙,以葉子含量最高,其次為根皮及樹皮。成人食用鮮夾竹桃葉8~10片或干葉2~3克即可中毒;黃花夾竹桃含黃夾甙和黃夾次甙,以種子、花、葉含量最高,有服用夾竹桃葉10~60片中毒的病例報(bào)道。3克干葉、8~10粒黃夾竹桃的種子可致成人死亡。
中毒表現(xiàn):誤服后出現(xiàn)頭痛、頭昏、食欲不振、惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉、胸痛、心悸、耳鳴、嗜睡、四肢麻木。嚴(yán)重者可出現(xiàn)心肌損傷、呼吸衰竭、昏迷、抽搐等表現(xiàn)。
緊急處理:誤服后要立即口服催吐藥物或手法催吐,然后服濃茶水后再次催吐,催吐后給患者活性炭50克,2小時(shí)后重復(fù)一次。隨時(shí)注意觀察患者的呼吸情況。有中毒表現(xiàn)者要盡快到醫(yī)院救治。
中毒預(yù)防:看護(hù)好嬰幼兒,以免誤服夾竹桃的花、葉。不要聽信偏方,用夾竹桃治病。
黃豆及其制品
黃豆?fàn)I養(yǎng)豐富,能夠加工成多種多樣的食品。但若加熱不充分,食用后可引起中毒。
毒性:黃豆中含有胰蛋白酶抑制劑、尿酶、血細(xì)胞凝集素等,均為耐熱的有毒物質(zhì)。未經(jīng)充分處理的黃豆或其制品,毒素不能徹底破壞,如進(jìn)食則對(duì)胃腸道有刺激作用,在體內(nèi)可抑制蛋白酶的活性,引起各種臨床癥狀。
中毒表現(xiàn):一般在食后1個(gè)小時(shí)內(nèi)出現(xiàn)頭痛、頭昏、惡心、嘔吐、腹痛等癥狀,較重者出現(xiàn)腹瀉。一般在數(shù)小時(shí)內(nèi)恢復(fù)。
緊急處理:立即口服活性炭100克,大量飲水,注意休息。
中毒預(yù)防:干炒黃豆不能完全破壞毒素,所以干炒黃豆不能多食;未煮透的豆?jié){中含有毒素。煮豆?jié){起泡沫時(shí),豆?jié){還未沸騰,毒素尚未破壞,要繼續(xù)加熱至泡沫消失、沸騰持續(xù)數(shù)分鐘后方可食用。
回答者:穿過骨頭 - 見習(xí)魔法師 二級(jí) 5-19 12:30
毒物進(jìn)入體內(nèi),發(fā)生毒性作用,使組織細(xì)胞或其功能遭受損害而引起的不健康或病理現(xiàn)象稱為中毒。根據(jù)經(jīng)過時(shí)間的長短和癥狀發(fā)作的緩急,可分為急性、亞急性和慢性中毒。
中毒可導(dǎo)致機(jī)能狀態(tài)減弱或失調(diào),甚至危及生命。
對(duì)中毒的急救,特別是急性中毒非常重要,要及時(shí)和準(zhǔn)確,在初步處理的同時(shí),盡快設(shè)法查明中毒原因,立即終止接觸毒物,阻止毒物繼續(xù)侵害人體,并盡快使其排出或分解。
A1落葉...................................水杉
A2常綠
B1鱗形葉..............................側(cè)柏
B2條形葉或針狀葉
C1條形葉............................冷杉
C2針狀葉
D1針葉三針一束...............白皮松
D2針葉五針一束...............華山松
影響免疫檢測的因素有哪些
影響免疫檢測的因素有很多,包括緩沖液、封閉、抗體、清洗、檢測底物等等。下面是我為大家?guī)淼挠绊懨庖邫z測的因素的知識(shí),歡迎閱讀。
緩沖液
最常用的兩種緩沖液是磷酸鹽緩沖液(PBS)和Tris緩沖液(TBS)。調(diào)整配方中緩沖液組分的各種改良配方已見諸期刊。緩沖液的關(guān)鍵要求是它應(yīng)有助于保持抗體的生物活性。因此,離子強(qiáng)度和pH值應(yīng)相當(dāng)接近生理狀態(tài)。PBS的配方(磷酸鹽總濃度10mM)適用于廣泛的抗體和檢測底物。
在孵育過程中,裝有膜的容器應(yīng)輕輕搖動(dòng)。緩沖液的量應(yīng)足夠,完全覆蓋膜,使其在緩沖液中自由漂浮。如果不止一張印跡放在容器中,緩沖液容量不足會(huì)導(dǎo)致印跡膜粘在一起。這將影響孵育溶液的充分接觸,導(dǎo)致各種假象,如背景高、信號(hào)弱和靈敏度不均勻等。
封閉
要獲得有意義的結(jié)果,必須保證抗體只與感興趣的蛋白質(zhì)結(jié)合,而不與膜結(jié)合。利用惰性蛋白、非離子去污劑,或無蛋白的封閉劑來封閉膜上未被占據(jù)的位點(diǎn),可減少抗體的非特異結(jié)合(NSB)。
封閉劑與膜的親和力應(yīng)高于抗體。它應(yīng)填滿膜上未被占據(jù)的位點(diǎn),但不會(huì)替換膜上的目標(biāo)蛋白。最常用的封閉劑是牛血清白蛋白(BSA,0.2-5.0%)、脫脂牛奶、酪蛋白、明膠、吐溫20去污劑的稀釋液(0.05-0.1%)以及Bl?k?試劑。封閉劑通常溶解在PBS或TBS中。
與封閉相關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)包括:選擇不適當(dāng)?shù)姆忾]劑或過量封閉會(huì)替換或掩蓋目標(biāo)蛋白質(zhì)。因此,封閉劑的正確選擇對(duì)成功的免疫檢測很關(guān)鍵。例如,奶粉不能用于生物素化或刀豆蛋白標(biāo)記的抗體,因?yàn)榕D讨泻刑堑鞍缀蜕锼?。在用磷酸化特異性抗體對(duì)磷酸化蛋白進(jìn)行檢測分析時(shí),如果采用粗蛋白制劑作為封閉劑,由于這些制劑中可能含有磷酸酶,而印跡上的磷酸化蛋白會(huì)被這些酶去磷酸化,就有可能會(huì)影響分析結(jié)果。研究表明,在封閉液中添加磷酸酶抑制劑可增強(qiáng)磷酸化特異性抗體的信號(hào)。此外,適用于一種抗原-抗體組合的封閉劑可能不適用于其他組合。
封閉液被點(diǎn)樣在空白的PVDF膜上,而膜已在甲醇中浸潤,并在TBS中平衡。隨后在印跡上添加檢測試劑,孵育5分鐘,并曝光在X射線膠片上。暗斑的出現(xiàn)則表明封閉劑與檢測試劑不兼容。如果在標(biāo)準(zhǔn)的Western印跡操作中用Immobilon?-P轉(zhuǎn)印膜來替代Immobilon?-PSQ轉(zhuǎn)印膜,那么封閉液可能不足以飽和膜表面。可能需要更多的清洗步驟來降低背景。
抗體
在封閉之后,印跡與一個(gè)或多個(gè)抗體孵育。第一個(gè)抗體與目標(biāo)蛋白結(jié)合,而第二個(gè)抗體與第一個(gè)結(jié)合。第二個(gè)抗體結(jié)合有酶或染料,可用來指示蛋白的位置。
盡管一抗能直接標(biāo)記,但使用二抗有明顯的優(yōu)勢。首先,不止一個(gè)二抗分子能夠與單個(gè)一抗分子結(jié)合,形成信號(hào)擴(kuò)增。其次,標(biāo)記的二抗(酶-抗體結(jié)合物)可用于大量不同特異性的一抗,從而不再需要標(biāo)記多個(gè)一抗。
多克隆或單克隆的`一抗都可使用。多克隆抗體通常是以抗血清或親和純化的抗體形式提供的。單克隆抗體是在腹水或組織培養(yǎng)液中表達(dá)的,可直接使用或進(jìn)行親和純化。一定要記住,變性蛋白可能無法被天然抗原培育出的抗體所識(shí)別。在某些情況下,可能需要非變性凝膠來進(jìn)行印跡??贵w以緩沖液和封閉液稀釋,以避免與膜的非特異結(jié)合。抗體稀釋液通常也包含痕量的吐溫20或另一種去污劑,以防止抗體的非特異聚集。許多發(fā)表的化學(xué)發(fā)光操作需要在封閉液和抗體稀釋液中添加0.1%(v/v)吐溫20。我們必須認(rèn)識(shí)到,高于0.05%(v/v)的濃度有可能從膜上洗掉一些印跡的蛋白質(zhì)。
提高吐溫20去污劑的濃度通常會(huì)降低背景。一種更簡單且更經(jīng)濟(jì)的策略是降低抗體的濃度,特別是二抗(詳見圖1)??贵w必須特異針對(duì)目的蛋白,不能與封閉液中的組分交叉反應(yīng),且應(yīng)該是相對(duì)純凈的。其他蛋白質(zhì)或聚集物形式的雜質(zhì)會(huì)導(dǎo)致非特異性結(jié)合和背景增高。
免疫檢測是一種極其靈敏的方法。為了實(shí)現(xiàn)高的信噪比和最高的靈敏度,一抗和二抗的濃度應(yīng)針對(duì)每種情況來優(yōu)化。一般來說,高倍稀釋一抗或降低凝膠上的蛋白上樣量可減少非特異信號(hào)。高倍稀釋酶標(biāo)記的二抗可最大限度降低整體的高背景。
一抗和二抗的最佳濃度也取決于檢測試劑的靈敏度。高靈敏度的試劑(檢測到飛克級(jí))與低靈敏度的試劑(檢測到皮克級(jí))相比,抗體用量可減少20倍??贵w濃度的優(yōu)化取決于檢測底物的例子如圖13所示。在使用最靈敏的檢測試劑時(shí),過量的抗體導(dǎo)致高的非特異性和整體背景增高(左上)。在這種情況下,將一抗稀釋度從1:1,000提高到1:10,000,改善了信噪比。在使用沒那么靈敏的檢測試劑(中間和最下面一行)時(shí),抗體需要更為濃縮,以產(chǎn)生相同的信號(hào)。
清洗
清洗印跡,從膜上去除未結(jié)合的抗體,它們可能導(dǎo)致高背景和檢測不佳。通常使用吐溫20的PBS或TBS稀釋液(0.05% v/v),特別是當(dāng)抗體制劑是粗制的,或高濃度使用時(shí)。如前所述,濃縮的去污劑溶液可能導(dǎo)致感興趣的蛋白質(zhì)從膜上洗脫。對(duì)于高度純化的抗體,往往只使用緩沖液進(jìn)行清洗。
所需的清洗次數(shù)最好根據(jù)實(shí)驗(yàn)來確定。清洗太少會(huì)產(chǎn)生過多的背景,而清洗過度有可能洗脫抗體并降低信號(hào)。建議至少清洗三次,每次5分鐘。
在TBS清洗液中添加最多0.5M NaCl和0.2% SDS,并將清洗時(shí)間延長至2小時(shí),可降低頑固的背景。
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