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高效液相色譜法測定茶黃酊中兒茶素、表兒茶素和黃芩苷的含量

品茶 2023-11-15 15:38:06

高效液相色譜法測定茶黃酊中兒茶素、表兒茶素和黃芩苷的含量

目的：建立高效液相色譜法測定茶黃酊中兒茶素
、表兒茶素和黃芩苷含量
。方法：采用Agilent ZORBAX Eclipse XDB—C18（150mm×4．6mm
，5μm）色譜柱；流動相A為0．5％三乙胺溶液（以磷酸調(diào)pH至3．0）
，流動相B為乙腈
，梯度洗脫（0～12min，流動相B10％
；12．1～30min，流動相B22％）
；流速：1mL·min^-1，檢測波長278nm
。結(jié)果：兒茶素
、表兒茶素和黃芩苷線性范圍分別為26．75—214．0μg·mL^-1（r=0．9998），5．568～44．54μg·mL^-1（r=0．9998）
，3．520～28．16μg·mL^-1（r=0．9999）
。回收率（n=6）分別為99．8％
，98．9％，102．6％
；RSD分別為0．61％
，1．2％，0．92％。結(jié)論：本方法簡便
、準(zhǔn)確、穩(wěn)定
，重復(fù)性好
，可用于茶黃酊中兒茶素、表兒茶素和黃芩苷的含量測定
。

完成機(jī)構(gòu)：中國人民解放軍第306醫(yī)院藥學(xué)部,北京100101

請問這是什么植物?[有圖]

　　太陽花
　　品名：
　　半枝蓮
　　英文名：HERBASCUTELLARIAEBARBATAE

。
　　別名 ：
　　狹葉韓信草、牙刷草
、并頭草、赴山鞭
、芽刷單、太陽花
、死不了。
　　概述 ：
　　半枝蓮為唇形科植物半枝蓮（ScutellariabarbataD．Don．）的干燥地上部分
，具清熱解毒
、活血祛瘀、消腫止痛
、抗癌等功能。
　　蔣儀《藥鏡拾遺賦》記載"半支蓮解蛇傷之仙草"
。民間除治毒蛇咬傷外，尚用治腫瘤
，有一定的近期療效
?div id="jpandex" class="focus-wrap mb20 cf">！缎Ｕ静菥V目》記載"此草開紫白色花，草紫紅色
，對結(jié)對葉，七八月采用"
。所述形態(tài)與本種相近
。民間草藥中以半支蓮或"半支"為名的品種甚多
。《百草鏡》載"各種半支有七十二種"
。趙學(xué)敏在《本草綱目拾遺》中收載有鼠牙半支
、狗牙半支及虎牙半支等，系景天科景天屬的幾種植物
。《中華人民共和國藥典》1985年版一部收載的半支蓮即為本品
。
　　產(chǎn)地分布：
　　分布于我國南方各省區(qū)
。河南省確山縣為現(xiàn)在主產(chǎn)區(qū)，近年來發(fā)展量較大
。
　　形態(tài)特征：
　　多年生草本，株高30-40厘米。莖下部匍匐生根
，上部直立，莖方形
、綠色。葉對生
，葉片三角狀卵形或卵圓形
，邊緣有波狀鈍齒，下部葉片較大
，葉柄極短
。花小
，2朵對生，排列成偏側(cè)的總狀花序
，頂生；花梗被黏性短毛
；苞片葉狀
，向上漸變小，被毛
。花萼鐘狀
，外面有短柔毛
，二唇形，上唇具盾片
?div id="4qifd00" class="flower right">
；ü诖叫危{(lán)紫色
，外面密被柔毛；雄蕊4
，二強(qiáng)；子房4裂
，柱頭完全著生在子房底部，頂端2裂
。小堅果卵圓形
，棕褐色
?div id="d48novz" class="flower left">
；ㄆ?-6月，果期6-8月
。
　　生態(tài)環(huán)境：
　　多見于溝旁
、田邊及路旁潮濕處。過于干燥的土壤不利生長
。
　　生物學(xué)特性：
　　半枝蓮為馬齒莧科馬齒莧屬一年生草本植物。高15-20厘米
，莖葉肉質(zhì)
，葉圓筒形?div id="d48novz" class="flower left">
；ㄖ谇o頂，花色豐富
，有紫紅、大紅
、粉紅、橘紅
、橙黃
、淺黃、純白及多種復(fù)色的單瓣與復(fù)瓣品種
，自3月初至9月底陸續(xù)開花不絕
。開花多少、大小與日光密切有關(guān)
，中午日照下花朵怒放，色彩鮮艷
，傍晚和陰天，花關(guān)閉或開花少
。蒴果，種子黑色
，7-9月陸續(xù)成熟，自行裂開
，種子散落
。
　　半枝蓮一般栽培3-4年后，植株開始衰老
，萌發(fā)能力減弱
，必須進(jìn)行分株另栽或重新播種
。種子容易萌發(fā)，發(fā)芽適溫為25℃
。種子壽命為1年。
　　生長習(xí)性：
　　半枝蓮喜溫暖濕潤的氣候
，對土壤條件要求不高。
　　生長周期：
　　多年生草本植物
。
　　采收加工：
　　用種子繁殖的，從第二年起
，每年5
、7．9月都可收割1次。分株繁殖的
，當(dāng)年9月收獲1次，以后每年也可收割3次
。收時用鐮刀齊地割取全株
，揀除雜草，捆成小把
，曬干或陰干即可。
　　儲藏養(yǎng)護(hù)：
　　置干燥處
。
　　形狀規(guī)格：
　　本品長15-35cm
，無毛或花軸上疏被毛。根纖細(xì)
。莖叢生，較細(xì)
，方柱形
；表面暗紫色或棕綠色
。葉對生，有短柄
；葉片多皺縮，展平后呈三角狀卵形或披針形
，長1.5-3cm，寬0.5-1cm；先端鈍
，基部寬楔形，全緣或有少數(shù)不明顯的鈍齒
；上表面暗綠色
，下表面灰綠色?div id="jpandex" class="focus-wrap mb20 cf">；▎紊谇o枝上部葉腋，花萼裂片鈍或較圓
；花冠二唇形
，棕黃色或淺藍(lán)紫色，長約1.2cm
，被毛。果實扁球形
，淺棕色
。氣微，味微苦
。
　　性味功能：
　　辛、苦
，寒。歸肺
、肝、腎經(jīng)
。功能與主治清熱解毒
，化瘀利尿
。用于疔瘡腫毒，咽喉腫痛
，毒蛇咬傷
，跌撲傷痛，水腫
，黃疸。用法與用量15-30g
，鮮品30-60g
；外用鮮品適量，搗敷患處
。
　　真?zhèn)舞b別：
　　性狀鑒別：
　　全長15-40cm，無毛或花軸上疏被毛
。根纖細(xì)
。莖四棱形，表面暗紫色或棕綠色
。葉對生
，有短柄或近無柄
；葉片皺縮或卷摺
，展平后呈三角狀卵形或披針形，長1.5-3cm
，寬0.5-1cm，先端鈍
，基部截形或?qū)捫ㄐ危壔蛴猩贁?shù)有明顯的鈍齒
，上面深綠色
，下面淡綠色；質(zhì)脆易碎
?div id="d48novz" class="flower left">
；ㄐ蛏谥Χ耍ü诙叫?div id="d48novz" class="flower left">
，棕黃色或深藍(lán)紫色，長約1.2cm
，被毛，但商品中花冠常已脫落
，留有匙形的下萼和具盔狀盾形的上萼
，內(nèi)藏4個扁球形小堅果
，淺棕色。全草質(zhì)柔軟
，易折斷
。氣微
，味苦澀。
　　以色綠
、味苦者為佳。
　　顯微鑒別：
　　葉表面制片：表皮細(xì)胞呈長多角形
，垂周壁波狀彎曲，上表皮細(xì)胞較大
，長55-93μm
，寬14-40μm，下表皮細(xì)胞長25-48μm
，寬11-25μm
。非腺毛1-2個細(xì)胞組成，圓錐形
，壁具疣狀突起，基部細(xì)胞具放射狀角質(zhì)層紋理
；近葉緣處非腺毛較大，由1-3個細(xì)胞組成
，長48-141μm
。腺鱗上表面較少，下表面較多
，腺頭圓球形、扁圓球形
，由7-8個細(xì)胞組成
，直徑50-75μm
，腺柄單細(xì)胞
；腺毛存在于下表皮，由4個細(xì)胞組成的腺頭
，直徑約28μm
，腺柄單細(xì)胞。氣孔存在于下表皮
，直軸式
。
　　理化鑒別：
　　1、取本品粉末10g
，加80%乙醇50ml，置水浴上回流半小時，趁熱濾過
，濾液作以下試驗：
　　（1）取濾液1ml
，加鎂粉少許及濃鹽酸4滴
，溶液漸呈緋紅色。（檢查黃酮類）
　?div id="jfovm50" class="index-wrap">。?）取濾液1ml
，加1%三氯化鐵試液1-2滴，溶液呈墨綠色
。（檢查酚類）
　?div id="jfovm50" class="index-wrap">。?）取以上剩下的濾液于水浴上蒸干
，殘渣加5%鹽酸5ml溶解
，濾過。于三支試管中各加濾液約1ml
，再分別加碘化鉍鉀試液
、碘化汞鉀試液及鎢酸試液各1-2滴，均產(chǎn)生沉淀
。（檢查生物堿）
　　2、薄層層析樣品制備：本品粉末（20目）2g
，加乙醚10ml
，回流半小時，傾去乙醚
，殘渣加甲醇15ml，回流半小時后冷卻
，濾過，濾液供點(diǎn)樣用
。點(diǎn)樣量10ml
。吸附劑：硅膠H（黃巖熒光化學(xué)廠），加0.5%CMC鋪板
，110℃活化半小時。展開劑：甲苯-甲酸乙酯-甲酸（3:3:1）
。展距12cm
。于紫外光燈（365nm）下觀察斑點(diǎn)
。
　　種植技術(shù) ：
　　1
、選地、整地
　　以疏松
、肥沃的砂壤土或壤土為好
，翻耕
，同時每畝施入農(nóng)家肥2000千克作基肥，耕細(xì)整平
，作成1.3米寬的畦。
　　2
、繁殖方法
　　以種子繁殖為主
，也可用分株繁殖。（1）種子繁殖多直播
，時間于9月下旬至10月上旬
，條播或穴播。條播按行距25-30厘米開溝
，溝深4厘米左右
；穴播者按穴距27厘米左右開穴
。播種時，先將種子撒人混有畜糞水的草木灰里
，拌成種子灰，再均勻地撒人溝內(nèi)或穴內(nèi)
，覆一層細(xì)土或草木灰，厚度不得超過0.5厘米
。播后在出苗前要絕對保持土壤濕潤
，播后約20天即可出苗。每畝用種子1.5-2千克
。（2）分株繁殖春夏進(jìn)行
。將植株老根挖起，選健壯
、無病蟲害植株進(jìn)行分株，每株有苗3-4根
，按穴距27厘米左右穴栽
，裁后澆水。
　　3
、田間管理
　　（1）間苗
、補(bǔ)苗直播的在苗高5-7厘米時按株距4-5厘米進(jìn)行間苗，同時進(jìn)行補(bǔ)苗
，補(bǔ)苗應(yīng)帶土移栽
，栽后澆水。（2）中耕除草出苗即行中耕除草
，以后每次收割后都應(yīng)及時進(jìn)行
。（3）追肥結(jié)合中耕除草，每次每畝追施2000千克人畜糞水
。
　　4
、病蟲害防治
　　半枝蓮在生長過程中，幾乎無病害發(fā)生
，花期易發(fā)生蚜蟲和菜黑蟲為害
，前者可用樂果防治
，后者可用50%的敵敵畏l000倍液噴霧防治
。
　　5、留種技術(shù)5-6月
，種子逐漸成熟時分批采收果枝
，曬干或陰干，搓出種子
，簸凈莖稈
、雜質(zhì)
，置布袋中
，于干燥處貯藏
。半枝蓮連作田無需留種，一般可以連茬3-4年再更新1次根苗
。
　　藥典標(biāo)準(zhǔn)：
　　拼音名：Banzhilian
　　英文名：HERBASCUTELLARIAEBARBATAE
　　本品為唇形科植物半枝蓮ScutellariabarbataD.Don的干燥全草
。夏、秋二季莖葉茂盛時采挖
，洗凈
，曬干。
　　性狀：本品長15-35cm
，無毛或花軸上疏被毛
。根纖細(xì)。莖叢生
，較細(xì)
，方柱形；表面暗紫色或棕綠色
。葉對生
，有短柄；葉片多皺縮
，展平后呈三角狀卵形或披針形，長1.5-3cm
，寬0.5-1cm
；先端鈍，基部寬楔形
，全緣或有少數(shù)不明顯的鈍齒
；上表面暗綠色，下表面灰綠色
?div id="d48novz" class="flower left">
；▎紊谇o枝上部葉腋
，花萼裂片鈍或較圓；花冠二唇形
，棕黃色或淺藍(lán)紫色
，長約1.2cm，被毛
。果實扁球形
，淺棕色。氣微
，味微苦
。
　　含量測定： 總黃酮對照品溶液的制備 精密稱取在105℃干燥至恒重的野黃芩苷對照品10mg
，置50ml量瓶中
，加甲醇至刻度
，搖勻
，即得（每1ml中含野黃芩苷0.2mg）
。
　　標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取對照品溶液0.4ml、0.8ml
、1.2ml
、1.6ml、2.0ml
，分別置25ml量瓶中
，加甲醇至刻度，搖勻
。以甲醇為空白
，照分光光度法（附錄ⅤB），在335nm的波長處分別測定吸收度
，以吸收度為縱坐標(biāo)
，濃度為橫坐標(biāo)
，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線
。
　　測定法 精密量取野黃芩苷[含量測定]項下經(jīng)索氏提取并稀釋至100ml的甲醇溶液1ml，置50ml量瓶中
，加甲醇至刻度，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項下方法
，自"以甲醇為空白"起，依法測定吸收度
，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中野黃芩苷的重量（mg）
，計算，即得
。
　　本品按干燥品計算
，含總黃酮以野黃芩苷（C21H18O12）計，不得少于1.50%
。
　　野黃芩苷 照高效液相色譜法（附錄Ⅵ D）測定
。
　　色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水-醋酸（35:61:4）為流動相
；檢測波長為335nm
。理論板數(shù)按野黃芩苷峰計算應(yīng)不低于1500。
　　對照品溶液的制備 精密稱取野黃芩苷對照品8mg
，置100ml量瓶中
，加流動相至刻度，搖勻
，即得（每1ml中含野黃芩苷80μg）
。
　　供試品溶液的制備 取本品粉末（過三號篩）約1g[同時另取本品粉末測定水分（附錄ⅨH第一法）]，精密稱定
，置索氏提取器中
，加石油醚（60-90℃）提取至無色，充去醚液
，藥渣揮去石油醚
，加甲醇繼續(xù)提取至無色，轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中
，加甲醇至刻度
，精密量取25ml，蒸干
，殘渣用20%甲醇溶解
，并轉(zhuǎn)移至25ml量瓶中，稀釋至刻度
，搖勻
，濾過，取續(xù)濾液
，用微孔濾膜（0.5μm）濾過
，即得
。
　　測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀
，測定
，即得。
　　本品按干燥品計算
，含野黃芩苷（C21H18O12）不得少于0.20%
。
　　炮制：除去雜質(zhì)，洗凈
，切段。
　　性味與歸經(jīng)：辛
、苦
，寒。歸肺
、肝
、腎經(jīng)。
　　功能與主治：清熱解毒
，化瘀利尿
。用于疔瘡腫毒，咽喉腫痛
，毒蛇咬傷
，跌撲傷痛，水腫
，黃疸
。
　　用法與用量：15-30g；鮮品30-60g
。外用鮮品適量
，搗敷患處。
　　貯藏：置干燥處
。

燈盞細(xì)辛的藥物分析

方法名稱： 燈盞細(xì)辛－野黃芩苷的測定－高效液相色譜法
應(yīng)用范圍： 本方法采用高效液相色譜法測定燈盞細(xì)心中野黃芩苷的含量

。
本方法適用于菊科植物短葶飛蓬的干燥全草。
方法原理： 本品加三氯甲烷于索氏提取器中提取
，藥渣加甲醇加熱回流
，取續(xù)濾液蒸干，殘渣加甲醇溶解
，搖勻
，濾過，續(xù)濾液進(jìn)入高效液相色譜儀進(jìn)行色譜分離
，用紫外吸收檢測器
，于波長335nm處檢測野黃芩苷的吸收值
，計算出其含量。
試劑： 1. 甲醇
2. 0.1%磷酸溶液
3. 三氯甲烷
儀器設(shè)備： 1 儀器
1.1 高效液相色譜儀
1.2 色譜柱
十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑
，理論塔板數(shù)按野黃芩苷峰計算應(yīng)不低于5000
。
1.3 紫外吸收檢測器
2色譜條件
2.1流動相：甲醇 0.1%磷酸溶液=40 60
2.2檢測波長：335nm
2.3柱溫：室溫
試樣制備： 1. 稱取供試品
精密稱定本品粉末0.5g，為供試品
。
2. 對照品溶液的制備
精密稱取野黃芩苷對照品適量
，加甲醇制成每1mL含0.1mg的溶液。
3. 供試品溶液的制備
取本品粗粉約0.5g
，精密稱定
，置索氏提取器中，加三氯甲烷適量
，加熱回流至提取液無綠色
，棄去三氯甲烷液，藥渣揮去溶劑
，連同濾紙筒移入具塞錐形瓶中
，精密加入甲醇50mL，密塞
，稱定重量
，放置1小時，水浴中加熱回流1小時
，放冷
，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量
，搖勻
，濾過，精密量取續(xù)濾液25mL
，回收溶劑至干
，殘渣用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度
，搖勻
，濾過，續(xù)濾液作為供試品溶液
。
操作步驟： 分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各5~10mL
，注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器于波長335nm處測定野黃芩苷（C21H18O12）的峰面積
，計算出其含量
。
參考文獻(xiàn)： 中華人民共和國藥典，國家藥典委員會編
，化學(xué)工業(yè)出版社
，2005版
，一部，p100
。

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