作者：朱鳳才 楊華富 胡曉杼 汪華 王廣和 宋亞軍 楊瑞馥
2000年4月
關(guān)鍵詞：豬鏈球菌 分離與鑒定
論文完成日期：2000年6月15日
目 錄
摘要………………………………………………1
前言………………………………………………2
1.試驗(yàn)材料……………………………………….2
2.方法…………………………………………….2
2.1病原分離……………………………………..2
2.2分離菌株的鑒定……………………………..2
2.3致病力及保護(hù)力試驗(yàn)………………………..3
2.4藥敏試驗(yàn)……………………………………..3
3.結(jié)果…………………………………………….4
3.1分離菌的培養(yǎng)特性及形態(tài)特征….………….4
3.2生化試驗(yàn)結(jié)果………………………………..5
3.3血清學(xué)鑒定結(jié)果……………………………..5
3.4致病力試驗(yàn)及保護(hù)力試驗(yàn)結(jié)果……………..5
3.5細(xì)菌回收試驗(yàn)結(jié)果…………………………..5
3.6藥敏試驗(yàn)結(jié)果………………………………..5
4分析與討論…………………………………….6
參考文獻(xiàn)…………………………………………7
豬鏈球菌的分離與鑒定
摘 要
2000年4月
關(guān)鍵詞：豬鏈球菌 分離鑒定
前 言
豬鏈球菌（Streptococcosis suis）是豬的一種重要疾病
豬鏈球菌截止到目前已發(fā)現(xiàn)的莢膜型已超過30種[1]。我國于1995年首例鑒定證實(shí)2型豬鏈球菌在我國的存在[2]
2000年4月
1． 實(shí)驗(yàn)材料
1．1病料 無菌采取岐山縣種豬繁育場(chǎng)患關(guān)節(jié)炎病豬的關(guān)節(jié)液8份，編號(hào)為1—8號(hào)，無菌采取患敗血癥豬的肝
1．2試劑 試驗(yàn)所用的各種糖均購自上海化學(xué)試劑二廠，批號(hào)自95—98年不等
。1．3培養(yǎng)基 綿羊鮮血平板
、匹克氏增菌液、10ml/L豬血清肉湯及各種糖培養(yǎng)基按常規(guī)方法制備[8]。1．4血清學(xué)試驗(yàn) 豬鏈球菌診斷血清與平板凝集抗原均購自中國獸藥鑒察所
，批號(hào)為990705。1．5藥敏紙片 購自浙江省軍區(qū)后勤部，批號(hào)20000312
。1．6試驗(yàn)動(dòng)物 健康小白鼠（30—35g）50只，購自第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心
。2． 方法
2．1病原分離
將所采病料分別涂片
，革蘭氏染色鏡檢，然后，分別接種鮮血瓊脂平板。37℃需氧培養(yǎng)24h后2．2分離菌株的鑒定
2．2．1生化試驗(yàn)
隨機(jī)抽取上述分離菌血清肉湯培養(yǎng)物3#、8#
、13#、15#，分別接種于蔗糖、山梨醇、棉實(shí)糖、葡萄糖、甘露糖、蕈糖、乳糖、菊糖、水楊苷、馬尿酸鈉培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)24h后，觀察其對(duì)糖的利用情況。2．2．2血清學(xué)鑒定
將3#、8#
、13#、15#菌經(jīng)緩沖肉湯培養(yǎng)8h2．3致病力及保護(hù)力試驗(yàn)
2．3．1菌落形成單位的測(cè)定 按常規(guī)方法進(jìn)行[9]
2．3．2致病力試驗(yàn)
無菌吸取上述血清肉湯培養(yǎng)物（含菌量5.0*108CFU/ml）以0.1ml/只
2．3．3保護(hù)力試驗(yàn)
將3#
2．3．4細(xì)菌回收試驗(yàn)
對(duì)致病力試驗(yàn)出現(xiàn)癥狀及死亡小白鼠剖檢，并采集病料
2．4藥敏試驗(yàn)
采用紙片擴(kuò)散法
表1各種抗菌藥物的抑菌圈與敏感標(biāo)準(zhǔn)
抗菌藥物名稱
抑菌圈直徑（mm）
耐藥
中度敏感
高度敏感
青霉素
土霉素
潔霉素
鏈霉素
慶大霉素
卡那霉素
頭孢菌素
10~12
10~14
10~14
10~14
13~14
13~14
10~15
>13
>15
>15
>15
>15
>15
>15
3．結(jié)果
3．1分離細(xì)菌的培養(yǎng)特性及形態(tài)特征
3．1．1培養(yǎng)特性
37℃培養(yǎng)24h后
3．1．2染色特性
關(guān)節(jié)液、鮮血瓊脂
3．2生化試驗(yàn)結(jié)果（見表2）
表2分離菌生化試驗(yàn)結(jié)果
鑒定 蔗糖 山梨 棉實(shí) 葡萄 甘露 蕈糖 乳糖 菊糖 水楊 馬尿
項(xiàng)目 醇 糖 糖 糖 苷 酸鈉
3#+--++++++-
8#+--++++++-
13#+--++++++-
15#+--++++++-
判定標(biāo)準(zhǔn)：“+”表示大多數(shù)（90%—100%）菌株為陽性
表2表明分離的3#
3．3血清學(xué)鑒定結(jié)果
將3#
3．4致病力試驗(yàn)結(jié)果及保護(hù)力試驗(yàn)結(jié)果
3．4．1致病力試驗(yàn)結(jié)果
第一組、第二組小白鼠注射血清肉湯培養(yǎng)物48h內(nèi)均未見死亡
，第三組48h內(nèi)有一只死亡，第四組、第五組、第六組在注射血清肉湯培養(yǎng)物18h內(nèi)全部死亡。死亡后，小白鼠皮膚發(fā)紺，剖檢肝、脾3．4．2保護(hù)力試驗(yàn)結(jié)果 免疫的小白鼠再經(jīng)攻毒后均未發(fā)病。
3．5細(xì)菌回收試驗(yàn)結(jié)果
將上述死亡及發(fā)病的小白鼠剖檢采集病料
，進(jìn)行細(xì)菌分離、生化試驗(yàn)及血清學(xué)鑒定，能得到原分離菌。3．6藥敏試驗(yàn)結(jié)果（見表3）
表3藥敏試驗(yàn)結(jié)果
菌號(hào)
抑菌環(huán)直徑（mm）
頭孢菌素 青霉素 潔霉素 卡那霉素 土霉素 鏈霉素 慶大霉素
3#19151413877
8#18161313867
13#19161413778
15#19151314888
平均值18.7515.513.513.257.757.07.5
表3表明
，結(jié)果敏感的藥物依次是：頭孢菌素、青霉素；中度敏感的依次是：潔霉素和卡那霉素；而對(duì)土霉素、鏈霉素、慶大霉素具有抗藥性。4．分析與討論
4．1豬鏈球菌（Streptoccus suts）是危害養(yǎng)豬業(yè)的一種重要病原菌。80年代初
，加拿大由豬鏈球菌引起的疾病開始增加。那時(shí)僅檢出9種夾膜血清型，其中2型是最常見的。4．2豬鏈球菌病在臨床上有敗血型
、腦膜腦炎型、關(guān)節(jié)炎型支氣管炎型等。過去屢有敗血型豬鏈球菌的報(bào)道，而關(guān)于集約化養(yǎng)豬場(chǎng)關(guān)節(jié)炎型鏈球菌病的報(bào)道較少。本次試驗(yàn)從患關(guān)節(jié)炎豬的關(guān)節(jié)液中成功的分離出了豬鏈球菌。另外，岐山種豬場(chǎng)，約有60%的仔豬流行關(guān)節(jié)炎，嚴(yán)重者可發(fā)生敗血癥而死亡，給種豬場(chǎng)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。所以，研究本病可為生產(chǎn)中防制本病提供理論依據(jù)。4．3病豬和帶菌豬是本病的重要傳染源。病豬的鼻液
、尿液、肌肉、內(nèi)臟和關(guān)節(jié)內(nèi)均帶有病原體，所以，我們建議，首先應(yīng)加強(qiáng)對(duì)健康豬的免疫。另一方面，在發(fā)病后，加強(qiáng)病豬和健康豬的隔離，根據(jù)實(shí)驗(yàn)室所做的藥敏試驗(yàn)結(jié)果，配合藥物治療，建議用頭孢菌素4．4從致病力試驗(yàn)結(jié)果可以看出
參考文獻(xiàn)
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[15]郝天斌
[16]陳書琨
[17]汪誠天，葉祝年
應(yīng)用抗菌類藥物治療有效
1. 人感染豬鏈球菌病是一種嚴(yán)重的疾病
，嚴(yán)重病例病情進(jìn)展非常快，如果診斷、治療不及時(shí)，預(yù)后較差，病死率極高，所以一旦懷疑此病，應(yīng)該到有細(xì)菌培養(yǎng)條件的醫(yī)院接受診斷和治療，并積極做血培養(yǎng)和有關(guān)分泌物培 養(yǎng)，分離并原菌，以便得到準(zhǔn)確的診斷治療。
（1）治療 對(duì)病豬進(jìn)行隔離治療。如已分離出病原菌
（2）免疫預(yù)防 在疫區(qū)或疫場(chǎng)
豬鏈球菌病的類型及防治
冬季天氣寒冷
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