防治SARS中藥篩選過(guò)程全記錄（１）

防治SARS中藥篩選過(guò)程全記錄（１）

作者王智民，防治SARS中藥篩選課題組成員。

中藥抗SARS篩選工作是在4月中旬開(kāi)始準(zhǔn)備的，篩選方案幾經(jīng)修改，于4月底得到了國(guó)家"863"計(jì)劃的立項(xiàng)支持。入選進(jìn)入國(guó)家"863"計(jì)劃《治療SARS中藥篩選研究》的中藥品種是按照一定原則進(jìn)行選擇的。首先，鑒于當(dāng)時(shí)許多病理過(guò)程尚未知，篩選依照"三個(gè)做起"的指導(dǎo)原則進(jìn)行--"服務(wù)臨床，從SARS治療中已經(jīng)開(kāi)始使用的藥物做起；解決急需，從已經(jīng)上市的中成藥物做起；結(jié)合實(shí)際，從臨床反映出的關(guān)鍵病理環(huán)節(jié)做起"。根據(jù)當(dāng)時(shí)臨床上反映出的關(guān)鍵病理環(huán)節(jié)--高熱、滲出、肺實(shí)變、急性呼吸窘迫癥、多臟器損傷等，選擇緩解癥狀、減輕病情、降低死亡率為突破口，進(jìn)行篩選方案的設(shè)計(jì)。我們從近萬(wàn)種中成藥中進(jìn)行廣泛的遴選，利用中藥、化學(xué)、藥理、中醫(yī)臨床等的知識(shí)背景初步篩選出了針對(duì)不同發(fā)病時(shí)期癥狀和病理環(huán)節(jié)的100個(gè)中成藥，進(jìn)而對(duì)這100種中成藥查閱國(guó)內(nèi)外研究文獻(xiàn)，對(duì)文獻(xiàn)進(jìn)行分析綜合后，選擇出了65個(gè)，再結(jié)合廣東治療SARS的臨床用藥經(jīng)驗(yàn)，最后確定了首期進(jìn)入篩選計(jì)劃的30個(gè)中成藥的名單。篩選技術(shù)方案是經(jīng)過(guò)各方面專家的反復(fù)論證，采用與臨床病理環(huán)節(jié)相近的動(dòng)物模型進(jìn)行篩選的，并在"七個(gè)統(tǒng)一"的條件下開(kāi)展篩選工作（"七個(gè)統(tǒng)一"即：統(tǒng)一頂層設(shè)計(jì)，統(tǒng)一目標(biāo)，統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，統(tǒng)一陽(yáng)性藥，統(tǒng)一結(jié)果評(píng)定方法，統(tǒng)一供試藥物、劑量、配發(fā)與管理，統(tǒng)一信息發(fā)布的方法），為中醫(yī)藥參與SARS的臨床治療提供了科學(xué)數(shù)據(jù)。進(jìn)入篩選計(jì)劃的中藥品種有：清開(kāi)靈注射液、魚(yú)腥草注射液、復(fù)方苦參注射液、板藍(lán)根顆粒、燈盞細(xì)辛注射液、新雪顆粒、香丹注射液、金蓮清熱顆粒、血塞通注射液、暑熱感冒沖劑、燈盞花素注射液、藿香正氣水、安宮牛黃丸、感冒清熱沖劑、生脈注射液、苦甘沖劑、川芎嗪注射液、諾迪康膠囊、羚翹解毒片、抗病毒口服液、醒腦靜注射液、清熱解毒口服液、參麥注射液、小兒清熱止咳口服液、抗感解毒片、雙黃連口服液、雙黃連粉針劑、丹參注射液、清瘟解毒片、外感風(fēng)痧顆粒、安腦丸。

全部篩選研究的結(jié)果將在科技期刊上陸續(xù)報(bào)道，其中名單的前19個(gè)藥物對(duì)不同的病理環(huán)節(jié)顯示出確切的療效。"全國(guó)防治非典指揮部"于5月22日發(fā)布了階段性研究成果，新聞發(fā)布時(shí)選擇了療效更好的前8個(gè)中藥品種進(jìn)行了發(fā)布。現(xiàn)將這8個(gè)發(fā)布品種的相關(guān)資料和信息與中醫(yī)藥同行分享，并給出相關(guān)的科技文獻(xiàn)，供大家參閱。

一、清開(kāi)靈注射液

處方：板藍(lán)根、金銀花、梔子、水牛角、珍珠母、黃芩苷、膽酸、豬去氧膽酸。

清開(kāi)靈作為解熱抗菌抗病毒藥物在臨床也已應(yīng)用多年，其療效是確實(shí)的。以《中國(guó)期刊網(wǎng)》為主要文獻(xiàn)檢索來(lái)源，對(duì)1994～2003年間在國(guó)內(nèi)核心期刊上發(fā)表的有關(guān)清開(kāi)靈注射液論文進(jìn)行檢索，共檢索文獻(xiàn)330篇，其中有關(guān)臨床應(yīng)用的報(bào)道分析綜述如下。

1．文獻(xiàn)分布

2．療效分析

清開(kāi)靈具有確切的解熱和抗病毒效果。在所報(bào)道的應(yīng)用于肺炎等呼吸道疾病中總有效率在80%～95%之間。此外，該藥還用于各種原因引起的腦功能障礙，如昏迷。這也是近年來(lái)臨床應(yīng)用的一個(gè)新的趨勢(shì)--此對(duì)于SARS中高熱伴有意識(shí)障礙的病例更為適用。如文獻(xiàn)中報(bào)導(dǎo)治療肺部感染所致昏迷的肺性腦病，有較好的療效。一般用藥后1～2天熱退，呼吸困難等癥狀、體征消失。臨床報(bào)道多數(shù)設(shè)有對(duì)照組，所使用的藥物為青霉素合病毒唑。

3．使用劑量及療程

規(guī)格：10ml/支，2ml/支。成人用量1～2ml/kg/d。小兒用量為10～50ml/次，3～7天/療程。一般建議劑量為成人每天不超過(guò)30ml。

4．體內(nèi)過(guò)程

以主要有效成分黃芩苷為指標(biāo)顯示，清開(kāi)靈注射液?jiǎn)未谓o藥后家兔體內(nèi)t1/2α6.87±1.49分鐘，t1/2β308.1±87.4分鐘。MRT（平均注留時(shí)間）為96.4±27.3分鐘。

5．不良反應(yīng)

過(guò)敏性休克，藥物性皮炎，喉頭水腫，胃腸道反應(yīng)，血管神經(jīng)性水腫，急性左心衰。清開(kāi)靈注射液劑量過(guò)大（30～40ml/次）易致外周血白細(xì)胞下降，一般在藥后2～3天出現(xiàn)。如用藥量在20～30ml/次之間，則無(wú)白細(xì)胞下降，同時(shí)療效不減。

6．配伍禁忌：

（1）配伍以300ml體積為宜，臨時(shí)配制，在2小時(shí)內(nèi)使用完畢。

（2）與頭孢唑啉鈉配伍有影響，與頭孢拉定、頭孢呋新、頭孢哌酮鈉、頭孢噻肟鈉配伍無(wú)明顯影響。

（3）與硫酸卡那霉素和維生素B6合用，產(chǎn)生混濁。與青霉素、鹽酸林可霉素、維生素C合用可使清開(kāi)靈注射液中黃芩苷含量下降。

（4）禁止與硫酸妥布霉素配伍。

（5）與下列5種喹諾酮類藥物配伍出現(xiàn)混濁：

乳酸環(huán)丙沙星注射液（江西東亞藥業(yè)有限責(zé)任公司，2000011121）

氧氟沙星注射液（江西東亞藥業(yè)有限責(zé)任公司，2000010822）

洛美沙星注射液（安徽蚌埠新一制藥廠，000122.102）

氟羅沙星注射液（保定濟(jì)世生物藥業(yè)有限公司，990801）

培氟沙星注射液（白求恩醫(yī)科大學(xué)制藥廠，990439）

（6）小諾新霉素配伍禁忌。

（7）清開(kāi)靈注射液2ml加入生理鹽水100ml，微粒明顯增加，建議使用帶終端濾器的一次性輸液器。

7．主要生產(chǎn)廠家及產(chǎn)品

北京中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)藥廠，地壇牌清開(kāi)靈注射液，10ml/支。

石家莊神威藥業(yè)股份有限公司，神威牌清開(kāi)靈注射液，2ml/支。

山西太行制藥廠，太行牌清開(kāi)靈注射液，10ml/支。

8．研究用樣品的生產(chǎn)廠家的確定

考慮到該產(chǎn)品具有一定的副反應(yīng)，因此，我們選擇時(shí)制定了（1）必須具有較好的GMP條件，能夠滿足臨床大量應(yīng)用的生產(chǎn)能力；（2）必須是大型企業(yè)；（3）有可供研究用的樣品這三條為選藥原則。因此我們選擇了石家莊神威藥業(yè)股份有限公司、北京中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)藥廠作為研究用樣品。

9．篩選結(jié)論

清開(kāi)靈注射液分別在流感病毒性肺炎、內(nèi)毒素吸入性肺炎、全氟異丁烯（PFIB）性肺損傷、2個(gè)肺細(xì)胞炎性損傷、內(nèi)毒素致熱、多臟器衰竭（DOMS）、急性呼吸窘迫綜合征（ARDS）、急性肺纖維化模型進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果證明清開(kāi)靈注射液均顯示出了較好的效果。

二、魚(yú)腥草注射液

1．處方：魚(yú)腥草，為鮮魚(yú)腥草經(jīng)加工制成的滅菌水溶液

2．研究用樣品的生產(chǎn)企業(yè)：福建三愛(ài)藥業(yè)股份有限公司

3．入選依據(jù)

魚(yú)腥草注射液具有清熱解毒、利濕的功能，主治肺膿瘍，痰熱咳嗽，白帶，尿路感染，癰癤。作為退熱、抗病毒藥物在臨床也已應(yīng)用多年，其療效是確實(shí)的。該藥物在廣東治療SARS的臨床已經(jīng)應(yīng)用，我們也以《中國(guó)期刊網(wǎng)》為主要文獻(xiàn)檢索來(lái)源，對(duì)1998～2002年間在國(guó)內(nèi)核心期刊上發(fā)表的有關(guān)魚(yú)腥草注射液論文進(jìn)行檢索，有關(guān)臨床應(yīng)用的報(bào)道見(jiàn)參考文獻(xiàn)。

主要有抗菌，增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，抗過(guò)敏和平喘等作用。

體外抑菌實(shí)驗(yàn)表明，魚(yú)腥草素對(duì)卡他球菌、流感桿菌、肺炎球菌、金黃色葡萄球菌等均有明顯的抑制作用。對(duì)多種革蘭氏陽(yáng)性及陰性細(xì)菌都具有明顯的抑制作用，以金黃色葡萄球菌及其耐青霉素株（最低抑菌濃度為62.5～80μg/ml）、肺炎雙球菌、甲型鏈球菌、流感桿菌（最低抑菌濃度為1.25μg/ml）為敏感；卡他球菌、傷寒桿菌等次之；而大腸桿菌、綠膿桿菌及痢疾桿菌不甚敏感；對(duì)白色念珠菌、新型隱球菌、孢子絲菌、曲菌、著色霉菌、紅色癬菌、疊瓦癬菌、石膏樣小孢子菌、鐵銹色小孢菌、鯊癬菌等也具有抑制作用。其最低抑菌濃度為2mg/ml。魚(yú)腥草的乙醚提取物對(duì)結(jié)核桿菌有明顯的抑制作用．在普拜二氏培養(yǎng)基中，其最低抑菌濃度為1：32000，在血清中的最低抑菌濃度為1：2000，對(duì)于尾靜脈感染結(jié)核桿菌H37RV株之動(dòng)物，能延長(zhǎng)生存時(shí)間、降低死亡率，但肺部病變僅有輕度減輕。魚(yú)腥草素在普拜氏液體培養(yǎng)基上對(duì)結(jié)核桿菌H37RV株的最低抑菌濃度為16μg/ml。魚(yú)腥草素及揮發(fā)油與甲氧芐氨嘧啶（TMP）配伍作用對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果表明，魚(yú)腥草素與TMP配伍有協(xié)同作用，抑菌作用顯著增強(qiáng)，魚(yú)腥草揮發(fā)油與TMP有拮抗作用，魚(yú)腥草揮發(fā)油能降低TMP的抑菌作用，但二者配伍能增強(qiáng)抗副傷寒及宋內(nèi)氏痢疾桿菌的作用。也有報(bào)道，魚(yú)腥草注射液在體外試驗(yàn)中，對(duì)大腸桿菌、短小芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、藤黃八疊球菌等均無(wú)抗菌作用，在體內(nèi)試驗(yàn)中，對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌感染的小鼠，均無(wú)保護(hù)作用。

4．不良反應(yīng)

臨床應(yīng)用肌注時(shí)，少數(shù)病人有局部疼痛；陰道內(nèi)給藥時(shí)，個(gè)別病例出現(xiàn)陰道充血。上述反應(yīng)在停藥后均消失。臨床應(yīng)用個(gè)別也有引起大皰性表皮松解萎縮型皮炎或藥疹、過(guò)敏性紫癜、過(guò)敏性休克乃至死亡。

5．篩選結(jié)論

魚(yú)腥草注射液分別在流感病毒性肺炎、內(nèi)毒素吸入性肺炎、2個(gè)肺細(xì)胞炎性損傷、內(nèi)毒素致熱和多臟器衰竭（DOMS）模型上進(jìn)行了驗(yàn)證，其對(duì)肺部各種炎性模型的效果較為滿意，但對(duì)多臟器衰竭模型未顯示出效果。

三、復(fù)方苦參注射液

1.處方：苦參、白土苓。

2.研究用樣品的生產(chǎn)企業(yè)：山西金晶藥業(yè)有限公司

3.入選依據(jù)

該注射液的主要化學(xué)成分為氧化苦參堿、苦參堿、槐果堿、苦參黃酮、土茯苓皂苷等。具有清熱利濕，涼血解毒，散結(jié)止痛的功能。針對(duì)復(fù)方苦參注射液共發(fā)表論文21篇。

巖舒注射液臨床報(bào)道胸膜腔內(nèi)注入巖舒注射液80ml治療10例癌性胸水，4周后復(fù)查胸片、B超觀察胸水情況，總有效率80%；還報(bào)道42例惡性腹水，在化學(xué)藥物無(wú)效的情況下，用巖舒注射液60ml腹腔注射治療，效果較好，總有效率在75%以上。用本品（含苦參等、山西金晶藥業(yè)生產(chǎn)）20ml、PDD40mg、IL-270萬(wàn)單位，每周1次；對(duì)照組用PDD40mg、IL-220萬(wàn)單位，每周1次。療效標(biāo)準(zhǔn)：完全緩解：胸水消滅至少維持1個(gè)月以上。部分緩解：胸水減少50%以上，維持1個(gè)月。穩(wěn)定：胸水減少不足50%。無(wú)效：胸水未減少或增加。結(jié)果：兩組分別完全緩解10、8例，部分緩解7、6例，穩(wěn)定1、3例，無(wú)效2、3例，總有效率85%、70%。結(jié)論：本品清熱利濕，殺蟲(chóng)利尿，有良好的抗腫瘤作用。

注射液中所含氧化苦參堿、苦參堿的有關(guān)報(bào)道從1984～2003年共457篇。臨床報(bào)道具有胸腔內(nèi)注射治療惡性胸水、肺纖維化、肝炎、癌癥的作用。

氧化苦參堿、苦參堿等的抗炎作用與氫化考的松相似，能對(duì)抗巴豆油、角叉菜膠（大鼠）和冰醋酸（小鼠）誘發(fā)的滲出性炎癥。對(duì)大鼠由棉球誘發(fā)的慢性炎癥無(wú)效，其抗急性炎癥與垂體-腎上腺系統(tǒng)無(wú)關(guān)，管內(nèi)實(shí)驗(yàn)證明是直接抑制炎癥反應(yīng)。實(shí)驗(yàn)觀察到肌肉注射氧化苦參堿具有明顯延長(zhǎng)小鼠異體游離心肌存活期的作用，并具有量效關(guān)系。

對(duì)移植和非移植小鼠的脾臟淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化和免疫球蛋白分泌細(xì)胞影響的研究結(jié)果顯示，移植術(shù)后10d小鼠體外脾臟細(xì)胞自發(fā)增殖增強(qiáng)，對(duì)刀豆蛋白A刺激的轉(zhuǎn)化反應(yīng)則明顯減弱。氧化苦參堿可顯著抑制正常小鼠的脾細(xì)胞的自發(fā)增殖及對(duì)刀豆蛋白A或脂多糖刺激的轉(zhuǎn)化反應(yīng)，而對(duì)手術(shù)已使之顯著降低的脾細(xì)胞對(duì)刀豆蛋白A刺激的轉(zhuǎn)化反應(yīng)無(wú)影響。這種選擇性抑制作用可能利于避免用其他常規(guī)非特異免疫抑制劑所帶來(lái)的危害。

以1％二硝基氯苯乙醇致敏豚鼠建立了實(shí)驗(yàn)性接觸性皮炎動(dòng)物模型，3天后，實(shí)驗(yàn)組肌注苦參素1/7LD50致死量，一周后觀察，實(shí)驗(yàn)組8只豚鼠中僅有一只皮膚有紅斑、充血及脫屑，空白對(duì)照組8只豚鼠7只皮膚有紅斑、充血及脫屑。兩組紅斑發(fā)生率有顯著差異（P＜0.05）。組織切片兩組動(dòng)物表層細(xì)胞內(nèi)水腫的細(xì)胞數(shù)差異有顯著性（P＜0.01），而炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)程度，兩組差異無(wú)顯著性。

注射液（40ml/次/日）具有非常明顯的消除癌癥腹水的作用，較強(qiáng)的鎮(zhèn)痛，特別是閾前鎮(zhèn)痛的確切作用，抗炎、退熱作用，對(duì)于SARS治療中的肺實(shí)變，肺纖維化可能會(huì)具有較好的作用。

本品具有較好的安全性。急性毒性：小鼠靜脈注射LD50：12.14g/kg,腹腔注射LD50：27.8g/kg,肌肉注射最大耐受量為80g/kg,是臨床用量的300倍。大鼠的2個(gè)月長(zhǎng)期毒性研究表明：注射給藥大（21.2g/kg）、中（5.2g/kg）、?。?.6g/kg）三個(gè)劑量組的各個(gè)臟器（心，肝，脾、肺、腎、胃、十二指腸、腎上腺、睪丸、卵巢、輸卵管）均沒(méi)有出現(xiàn)任何異常，未見(jiàn)明顯的病變，與對(duì)照組相比，沒(méi)有顯著性差異。1個(gè)半月的犬長(zhǎng)毒，大（12g/kg），中（4.8g/kg）、小（0.6g/kg）靜脈給藥，結(jié)果：大、中劑量均出現(xiàn)了明顯的植物神經(jīng)系統(tǒng)的反應(yīng)，表現(xiàn)流涎癥狀，但此癥狀為一時(shí)性的，大劑量的流涎在30分鐘消失，中劑量在15分鐘消失，癥狀較輕；除了大劑量2只犬腎組織中出現(xiàn)輕度蛋白外，其它各組犬的病理檢查未見(jiàn)異常情況。

4．不良反應(yīng)：本品無(wú)明顯全身毒副反應(yīng)，局部使用有輕度刺激，但吸收良好。

5．篩選結(jié)論

復(fù)方苦參注射液在內(nèi)毒素吸入性肺炎、全氟異丁烯性肺損傷、2個(gè)肺細(xì)胞炎性損傷、多臟器衰竭模型進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果其對(duì)多臟器衰竭的效果較為突出，并顯示較好的抗纖維化作用，對(duì)全氟異丁烯性肺損傷未顯示出效果。

中華人民共和國(guó)傳染病防治法釋義：第八條

第八條 國(guó)家發(fā)展現(xiàn)代醫(yī)學(xué)和中醫(yī)藥等傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)，支持和鼓勵(lì)開(kāi)展傳染病防治的科學(xué)研究，提高傳染病防治的科學(xué)技術(shù)水平。

國(guó)家支持和鼓勵(lì)開(kāi)展傳染病防治的國(guó)際合作。

【釋義】本條是關(guān)于在傳染病防治中依靠科學(xué)和開(kāi)展國(guó)際合作的基本政策的規(guī)定。

在傳染病防治中依靠科學(xué)，科學(xué)防治是至關(guān)重要的。疾病是客觀存在的，它的發(fā)生、發(fā)展常常是不以人的意志為轉(zhuǎn)移的，有時(shí)是不可避免的，在疾病面前只有依靠科學(xué)，才能取得勝利。從人類戰(zhàn)勝天花、鼠疫、霍亂，直到今天的SARS無(wú)一不是運(yùn)用科學(xué)的力量。歷史的經(jīng)驗(yàn)證明，醫(yī)學(xué)也是在人類與疾病斗爭(zhēng)中不斷發(fā)展的。中國(guó)抗擊SARS的成功經(jīng)驗(yàn)之一就是依靠科學(xué)，發(fā)揮科學(xué)技術(shù)重要作用。面對(duì)突如其來(lái)的疫情災(zāi)害，在沒(méi)有充分認(rèn)識(shí)、了解的時(shí)候，只有尊重科學(xué)規(guī)律，采用科學(xué)方法，依靠科學(xué)手段，制定和實(shí)施科學(xué)的防治策略，切實(shí)做好治療、預(yù)防和控制的各項(xiàng)工作。例如：根據(jù)SARS的傳播特點(diǎn)和其他傳染病的防治措施，提出了早發(fā)現(xiàn)、早報(bào)告、早隔離、早治療的有效措施，防止了疫病的進(jìn)一步擴(kuò)散和蔓延。同時(shí)集中力量進(jìn)行科學(xué)攻關(guān)，積極探索防治規(guī)律，加強(qiáng)檢測(cè)手段、防治藥物和疫苗的研究。因此，本法強(qiáng)調(diào)國(guó)家發(fā)展現(xiàn)代醫(yī)學(xué)和中醫(yī)藥等傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)，支持和鼓勵(lì)開(kāi)展傳染病防治的科學(xué)研究。這里要特別說(shuō)明的是發(fā)展中醫(yī)藥等傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)。中醫(yī)藥等傳統(tǒng)醫(yī)藥主要是指中醫(yī)藥和藏醫(yī)、蒙醫(yī)、維醫(yī)等中國(guó)的傳統(tǒng)醫(yī)藥（以下簡(jiǎn)稱中醫(yī)藥）。中醫(yī)藥是中國(guó)優(yōu)秀傳統(tǒng)文化的基本組成部分，是中華民族對(duì)人類文化的偉大貢獻(xiàn)，她為中華民族幾千年繁衍生息、日益強(qiáng)盛發(fā)揮了重要作用。中國(guó)歷曾遭遇無(wú)數(shù)次疫病侵襲，但從未像歐洲那樣出現(xiàn)大規(guī)模死亡，就是因?yàn)橹嗅t(yī)藥在重大疫病的防治中發(fā)揮了重要作用。在防治SARS的過(guò)程中，中醫(yī)藥已成為救治患者的一支重要力量，其科學(xué)價(jià)值得到充分體現(xiàn)。吳儀副總理曾指出，中醫(yī)藥專家研究探索非典型肺炎的發(fā)病和診療規(guī)律，積極運(yùn)用中醫(yī)藥、中西醫(yī)結(jié)合的方法救治病人，發(fā)揮了積極的作用。這些經(jīng)驗(yàn)非常寶貴，需要進(jìn)一步總結(jié)、研究和推廣。世界衛(wèi)生組織駐華代表也表示，傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)作為在全球醫(yī)療體系中一種非常有價(jià)值的研究領(lǐng)域，一直為世界衛(wèi)生組織所認(rèn)可，中國(guó)將傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)整合融入到中國(guó)醫(yī)療體系的做法，可以作為其他國(guó)家效仿的模版。為此，本法將現(xiàn)代醫(yī)學(xué)和中醫(yī)藥等傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)提到同等重要的地位，體現(xiàn)了中西醫(yī)并重的衛(wèi)生工作方針。

本條規(guī)定的另一個(gè)內(nèi)容是開(kāi)展國(guó)際合作。疾病是沒(méi)有國(guó)界的。隨著全球化一體化進(jìn)程的加快，國(guó)際交往越來(lái)越頻繁，疾病傳播的機(jī)會(huì)和范圍也越來(lái)越廣。因此，加強(qiáng)傳染病防治的國(guó)際合作十分重要。國(guó)際合作的內(nèi)容主要是傳染病信息的通報(bào)和傳染病監(jiān)測(cè)、預(yù)警、處理有關(guān)技術(shù)的交流。國(guó)際合作既包括政府之間的交流與合作，也包括與國(guó)際組織和民間機(jī)構(gòu)之間的交流與合作。開(kāi)展國(guó)際合作，建立健全傳染病監(jiān)測(cè)、預(yù)防、治療和信息通報(bào)網(wǎng)絡(luò)，一旦出現(xiàn)異常情況，可以按照共同商定的規(guī)范和途徑，及時(shí)通報(bào)，使有關(guān)國(guó)家能夠正確地作出判斷和應(yīng)對(duì)。去年，中國(guó)政府與世界衛(wèi)生組織合作以及與國(guó)際社會(huì)攜手抗擊非典型肺炎，得到了道義的理解和資金、物質(zhì)及技術(shù)等方面的支持與援助。同時(shí)，中國(guó)政府與國(guó)際社會(huì)合作，在應(yīng)對(duì)全球疾病災(zāi)害方面承擔(dān)自己的責(zé)任，履行自己的義務(wù)，發(fā)揮建設(shè)性的作用。世界衛(wèi)生組織在全球衛(wèi)生事務(wù)中發(fā)揮了一定的作用。例如世界衛(wèi)生組織制定的《國(guó)際衛(wèi)生條例》規(guī)定，鼠疫、霍亂和黃熱病三種烈性傳染病是國(guó)際檢疫傳染病，一經(jīng)發(fā)現(xiàn)，必須及時(shí)向世界衛(wèi)生組織通報(bào)，世界衛(wèi)生組織將有關(guān)情況發(fā)送各國(guó)政府有關(guān)部門，使有關(guān)國(guó)家在港口、機(jī)場(chǎng)對(duì)來(lái)自疫區(qū)的人員、貨物等實(shí)施衛(wèi)生檢疫等措施，控制并防止疫病傳入。

豬流感（甲型H1N1流感）的預(yù)防方法有哪些？

5、公眾可采取何種措施？
（1）避免接觸流感樣癥狀（發(fā)熱，咳嗽，流涕等）或肺炎等呼吸道病人。
（2）注意個(gè)人衛(wèi)生，經(jīng)常使用洗手液（肥皂）和清水洗手，尤其在咳嗽或打噴嚏后。
（3）避免接觸生豬或前往有豬的場(chǎng)所。
（4）避免前往人群擁擠場(chǎng)所。
（5）咳嗽或打噴嚏時(shí)用紙巾遮住口鼻，然后將紙巾丟進(jìn)垃圾桶。
（6）如果生病了，請(qǐng)留在家中，并減少與其他人接觸，避免感染他人。
（7）盡量避免觸摸自己的眼睛、鼻子或嘴巴，因?yàn)椴【梢酝ㄟ^(guò)這些途徑進(jìn)行傳播。
二、出入境人員須知
1、以下人員不應(yīng)出外旅游：
(1)有任何不適，尤其是發(fā)熱；
(2)在過(guò)去十天內(nèi)，曾經(jīng)與疑似或確診豬流感病例有緊密接觸，即曾照顧患者、與患者同住、或接觸過(guò)患者的呼吸道分泌物和體液人員。
2、出境人員需做到：
（1）旅游前，需預(yù)備以下幾項(xiàng)物品:
一般應(yīng)急用品如：紙巾、口罩等，以備不時(shí)之需。
含65~95%酒精的消毒劑，以便在沒(méi)有洗手設(shè)備的情況下，清潔及消毒雙手。
當(dāng)?shù)刂袊?guó)領(lǐng)事館聯(lián)絡(luò)電話。
（2）旅程中
A．檢疫
與檢疫及衛(wèi)生人員合作，完成必須的出入境程序及檢疫措施。切勿亂拋垃圾和隨地吐痰。
垃圾應(yīng)放在廢屑箱內(nèi)。如需吐痰，應(yīng)用紙巾包好，然后棄置于廢屑箱內(nèi)。
B．勤洗手
經(jīng)常保持雙手清潔，如廁后、進(jìn)食前、處理食物前及觸摸過(guò)公共對(duì)象后都應(yīng)用洗手液洗手。避免觸摸眼睛、鼻及口，如需觸摸，應(yīng)先洗手。如沒(méi)有洗手設(shè)備，可用含酒精的消毒劑洗手。
C．備用紙巾/手帕
帶用紙巾/手帕。打噴嚏及咳嗽時(shí)應(yīng)用紙巾/手帕掩著口鼻。
D．備用私人用品
不要共享毛巾及私人用品，以免傳播疾病。
E．備用口罩
可帶備口罩，以便自己/同團(tuán)人員有呼吸系統(tǒng)病癥時(shí)戴上。
F．公筷及公匙
吃飯時(shí)應(yīng)使用公筷及公匙，不應(yīng)與人共享飯盒及飲品。
G．健康生活
旅游期間繼續(xù)實(shí)踐健康生活模式，及保持身體清潔，不要吸煙。
H．如有不適
如有不適，尤其是發(fā)熱，應(yīng)通知酒店及領(lǐng)隊(duì)/導(dǎo)游或相關(guān)人員；
病者及其照顧者應(yīng)立刻戴上口罩；
盡快安排醫(yī)生診治；
留在酒店房間/房間休息及暫時(shí)終止行程，直至痊愈。
旅客若被當(dāng)?shù)蒯t(yī)生懷疑或證實(shí)染上豬流感，需留在當(dāng)?shù)蒯t(yī)院作進(jìn)一步檢查或治療，同行人員如無(wú)必要，應(yīng)減少與病者接觸，并遵照當(dāng)?shù)蒯t(yī)生指示，嚴(yán)格遵守個(gè)人衛(wèi)生措施。同行人員需配合當(dāng)?shù)匦l(wèi)生及檢疫部門的指示，安排余下行程和所須的檢疫措施。
（3）旅程后
回國(guó)2周內(nèi)，如出現(xiàn)流感樣癥狀（發(fā)熱，咳嗽，流涕等），應(yīng)及時(shí)與當(dāng)?shù)匦l(wèi)生疾控部門聯(lián)系。
3、入境人員需做到：
（1）從疫區(qū)歸國(guó)入境時(shí)，如出現(xiàn)流感樣癥狀（發(fā)熱，咳嗽，流涕等），應(yīng)主動(dòng)向出入境檢驗(yàn)檢疫機(jī)構(gòu)說(shuō)明。
（2）從疫區(qū)歸國(guó)2周內(nèi)，如出現(xiàn)流感樣癥狀（發(fā)熱，咳嗽，流涕等），應(yīng)及時(shí)與當(dāng)?shù)匦l(wèi)生疾控部門聯(lián)系。
三、參與公眾活動(dòng)者注意事項(xiàng)：
參與公眾活動(dòng)時(shí)，要預(yù)防豬流感及其它傳染病，建議公眾注意：
1、參與活動(dòng)前：
如有不適，尤其是發(fā)燒及／或有咳嗽、打噴嚏等呼吸道感染癥狀，就不應(yīng)前往活動(dòng)，應(yīng)盡早找醫(yī)生診治。
雙手應(yīng)經(jīng)常保持清潔，接觸公用對(duì)象或設(shè)施后應(yīng)洗手。
應(yīng)隨身帶備手帕或紙巾。
2、參與活動(dòng)期間：
保持良好個(gè)人衛(wèi)生。打噴嚏或咳嗽時(shí)應(yīng)掩蓋口鼻，其后并立刻用洗手液洗手，以免飛沫傳播細(xì)菌。
在觸摸眼睛、口或鼻前、進(jìn)食前及如廁后都應(yīng)該洗手。
用洗手液洗手，其后用紙巾或烘干設(shè)備弄干雙手。
如沒(méi)有洗手設(shè)施，則使用含65~95%酒精的洗手液消毒雙手。
不要隨地吐痰或亂拋垃圾。痰涎應(yīng)用紙巾包好，棄置垃圾桶內(nèi)。垃圾亦應(yīng)棄置進(jìn)垃圾桶內(nèi)。
不應(yīng)吸煙。
3、參與活動(dòng)后：
保持雙手清潔。
回家后，應(yīng)洗澡及洗頭，清除身體上的污垢及細(xì)菌。
四、乘坐公共交通工具注意事項(xiàng)
1、在未出現(xiàn)本地感染豬流感病例之前：
（1）保持車廂/船艙清潔
不要在車廂/船艙內(nèi)飲食。
不要吸煙。
不要隨地吐痰。
不要亂拋垃圾。請(qǐng)將垃圾放入設(shè)于車站/月臺(tái)/大堂的垃圾箱。
如需嘔吐，應(yīng)使用嘔吐袋。
（2）保持良好個(gè)人衛(wèi)生
避免用手觸摸眼睛、鼻及口。
打噴嚏或咳嗽時(shí)應(yīng)掩著口鼻。
假如你有呼吸道感染的癥狀或發(fā)燒，應(yīng)及早求醫(yī)。
（3）佩戴口罩
乘搭公共交通工具人員宜戴上口罩，尤其：
有呼吸道感染征狀或發(fā)燒的人員；
需照顧有呼吸道感染或發(fā)燒病者的人員。
2、在出現(xiàn)本地感染豬流感病例之后：
除上述措施外，還需：
（1） 佩戴口罩
乘搭公共交通工具人員應(yīng)戴上口罩，尤其：在繁忙時(shí)段人流稠密的時(shí)候；在密封式的車廂/船艙內(nèi)；
有呼吸道感染征狀或發(fā)燒的人員；及曾與豬流感患者有緊密接觸[1]的人員，應(yīng)從最后接觸日起連續(xù)十天戴上口罩。
與豬流感患者有社交接觸[2]的人員亦可戴上口罩。
（2）保持車廂/船艙空氣流通
如車窗/船窗屬開(kāi)關(guān)式，應(yīng)適量打開(kāi)車窗/船窗，確保車廂/船艙內(nèi)空氣流通。
（3）要求協(xié)助
若懷疑自己患上豬流感；
請(qǐng)使用救護(hù)車前往醫(yī)院；
若身在車站或碼頭，或已乘坐在車廂/船艙內(nèi)，可要求司機(jī)或運(yùn)輸機(jī)構(gòu)工作人員協(xié)助召喚救護(hù)車或水警，前往醫(yī)院就診。
注[1]：緊密接觸指曾經(jīng)照顧患者，與患者共同居住，或曾經(jīng)直接接觸過(guò)患者的呼吸道分泌物或體液。
注[2]：社交接觸是指普通的會(huì)面，即是未曾照顧患者，并非與患者共同居住，及未曾直接接觸過(guò)患者的分泌物或體液。
五、正確洗手方法
保持手部衛(wèi)生是預(yù)防傳染病的首要條件。用洗手液徹底洗手或用酒精搓手液消毒雙手均可保持手部衛(wèi)生。
1、什么時(shí)候應(yīng)洗手？
（1）在接觸眼、鼻及口前
（2）進(jìn)食及處理食物前
（3）如廁后
（4）當(dāng)手被呼吸道分?物染污時(shí)，如打噴嚏及咳嗽后
（5）觸摸過(guò)公共對(duì)象，例如電梯扶手、升降機(jī)按鈕及門柄后
（6）為幼童或病人更換尿片后，及處理被染污的物件后
（7）探訪醫(yī)院及飼養(yǎng)場(chǎng)的前后
（8）接觸動(dòng)物或家禽后
一般情況下，當(dāng)雙手有明顯污垢或可能被體液沾污例如如廁后或更換尿片后，打噴嚏及咳嗽后，應(yīng)用洗手液（肥皂）及清水洗手。如雙手沒(méi)有明顯污垢時(shí)，可用含70-80%酒精搓手液消毒雙手。
2、正確洗手步驟：
用洗手液洗手, 程序如下:
（1）開(kāi)水龍頭沖洗雙手。
（2）加入洗手液，用手擦出泡沫。
（3）最少用二十秒時(shí)間揉擦手掌、手背、指隙、指背、拇指、指尖及手腕，揉擦?xí)r切勿沖水。
（4）洗擦后才用清水將雙手徹底沖洗干凈。
（5）用干凈毛巾或抹手紙徹底抹干雙手，或用干手機(jī)將雙手吹干。
（6）雙手洗干凈后，?要再直接觸摸水龍頭，可先用抹手紙包裹著水龍頭，才把水龍頭關(guān)上；或潑水將水龍頭沖洗干凈。
3、注意：
（1）切勿與別人共享毛巾或紙巾。
（2）擦過(guò)手的紙巾用后應(yīng)妥善棄置。
（3）個(gè)人用的抹手毛巾應(yīng)放置妥當(dāng)，并應(yīng)每日至少?gòu)氐浊逑匆淮?，如能預(yù)備多于一條毛巾作經(jīng)常替換，則更為理想。
4、用酒精搓手液消毒雙手，程序如下：
把足夠份量的酒精搓手液倒于掌心，然后揉擦手掌、手背、指隙、指背、拇指、指尖及手腕，各處至少20 秒直至雙手干透。
六、正確使用口罩
佩戴外科口罩要注意的事項(xiàng)（佩戴口罩前，以及脫下口罩前后都必須洗手）：
1、要讓口罩緊貼面部：
（1）口罩有顏色的一面向外，有金屬片的一邊向上；
（2） 系緊固定口罩的繩子，或把口罩的橡皮筋繞在耳朵上，使口罩緊貼面部；
（3）口罩應(yīng)完全覆蓋口鼻和下巴；
（4） 把口罩上的金屬片沿鼻梁兩側(cè)按緊，使口罩緊貼面部。
2、佩戴口罩后，避免觸摸口罩，以防降低保護(hù)作用；若必須觸摸口罩，在觸摸前后都要徹底洗手。
3、脫下口罩時(shí)，應(yīng)盡量避免觸摸口罩向外部分，因?yàn)檫@部分可能已沾染病菌。
4、脫下口罩后，放入膠帶或紙袋內(nèi)包好，再放入有蓋的垃圾桶內(nèi)棄置。
5、外科口罩應(yīng)最少每天更換，口罩如有破損或弄污，應(yīng)立即更換。
豬流感常見(jiàn)問(wèn)題解答
1、食用豬肉能否感染？
現(xiàn)在監(jiān)測(cè)到的病毒是禽流感、人流感和豬流感病毒基因片段的混合體，所有的患者都沒(méi)有和生豬的接觸史，而且在生豬當(dāng)中也沒(méi)有分離出這種新型的變異病毒。A（H1N1）型流感病毒害怕高溫，豬肉加熱至71攝氏度，就能殺死豬流感病毒
2、甲型H1N1流感（豬流感）病毒能否在人際間傳染？
目前已證實(shí)有甲型H1N1流感（豬流感）病毒在人際間傳染的病例，其傳染途徑與季節(jié)性流感類似，通常是通過(guò)感染者咳嗽和打噴嚏等。
3、此次甲型H1N1流感（豬流感）疫情有何特點(diǎn)？
一是此次疫情由新的豬流感病毒變異株引起，人群普遍易感，已引起跨國(guó)、跨洲傳播。二是出現(xiàn)了人傳人病例。三是目前墨西哥出現(xiàn)了較多的重癥和死亡病例。四是流感病人在發(fā)病前一天已可排毒，有些人感染后不發(fā)病，但仍然具有傳染性，隱性傳染比例相當(dāng)高。
4、甲型H1N1流感（豬流感）有哪些癥狀？
甲型H1N1流感（豬流感）的癥狀與其他流感癥狀類似，如高熱、咳嗽、乏力、厭食等。另有報(bào)道說(shuō)，此次美國(guó)發(fā)現(xiàn)病例的主要表現(xiàn)為突然發(fā)熱、咳嗽、肌肉痛和疲倦，其中一些患者還出現(xiàn)腹瀉和嘔吐；墨西哥發(fā)現(xiàn)病例還出現(xiàn)眼睛發(fā)紅、頭痛和流涕等癥狀。
5、我國(guó)為何稱“甲型H1N1流感（豬流感）”？
世衛(wèi)組織宣布從4月30日起，開(kāi)始使用“A（H1N1）型流感”而非“豬流感”來(lái)指代當(dāng)前疫情。按國(guó)內(nèi)中文表述的慣例稱為“甲型H1N1流感（豬流感）”。
6、墨西哥甲型H1N1流感（豬流感）與美國(guó)甲型H1N1流感（豬流感）是否相同？
墨西哥甲型H1N1流感（豬流感）病毒與美國(guó)都是A／H1N1型，是一種新型變異病毒，是人類流感病毒、北美洲禽流感病毒，以及北美洲、歐洲和亞洲豬流感病毒的混合體。
7、有無(wú)抗甲型H1N1流感（豬流感）疫苗？
目前只有用于豬的抗豬流感疫苗，還沒(méi)有專門用于人類的。就目前情況看，普通的抗流感疫苗對(duì)人類抵抗甲型H1N1流感（豬流感）沒(méi)有明顯效果。
8、有何預(yù)防措施？
流感病毒主要通過(guò)空氣和接觸傳播，因此咳嗽或者打噴嚏時(shí)應(yīng)該掩住口、鼻；應(yīng)勤洗手，還可經(jīng)常用酒精為日常用品消毒。此外，少在人多的地方“扎堆兒”也是降低感染概率的一個(gè)有效方法。一旦發(fā)現(xiàn)染病，患者應(yīng)盡量避免外出，以防將病毒傳染他人。
9、治療人類感染甲型H1N1流感（豬流感）有無(wú)特效藥？
根據(jù)目前專家掌握的情況，這種新型的甲型H1N1流感（豬流感）病毒對(duì)神經(jīng)氨酸酶抑制劑類的藥物是敏感的，臨床治療有效
目前甲型H1N1流感（豬流感）尚無(wú)特效治療藥物，關(guān)鍵是要加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，如保溫、避免賊風(fēng)侵襲：提供充足潔凈的飲水；注意營(yíng)養(yǎng)平衡，補(bǔ)充維生素、微量元索等，提高豬體的抵抗力；必要時(shí)可用中草藥進(jìn)行輔助治療

中國(guó)哪個(gè)省沒(méi)有出現(xiàn)過(guò)非典?

中國(guó)大陸共有7個(gè)省級(jí)單位沒(méi)有報(bào)告非典病例，分別是：黑龍江、海南、貴州、云南、青海、西藏、新疆。

SARS事件于2002年在中國(guó)廣東順德首發(fā)。擴(kuò)散至東南亞乃至全球，直至2003年中期疫情才被逐漸消滅的一次全球性傳染病疫潮。在此期間發(fā)生了一系列事件：引起社會(huì)恐慌，包括醫(yī)務(wù)人員在內(nèi)的多名患者死亡，世界各國(guó)對(duì)該病的處理，疾病的命名，病原微生物的發(fā)現(xiàn)及命名，聯(lián)合國(guó)、世界衛(wèi)生組織及媒體的關(guān)注等等。

擴(kuò)展資料：

SARS高峰時(shí)期，中國(guó)各級(jí)黨政機(jī)關(guān)顯示了驚人的動(dòng)員力量，深入到農(nóng)村基層社區(qū)。這時(shí)以村為單位的傳統(tǒng)社會(huì)力量發(fā)揮了作用：所有外村人員不得進(jìn)村，本村在外打工返鄉(xiāng)人員也被擋在村外，直到觀察期滿才能回村。

SARS期間，中共中央總書(shū)記、國(guó)家主席胡錦濤到四川農(nóng)村視察防疫執(zhí)行情況，因?yàn)橹醒胝顡?dān)心在廣東一帶打工的四川等內(nèi)地省份農(nóng)民工返鄉(xiāng)傳播疫情。因?yàn)榉婪洞胧┑昧?，四川的疫情沒(méi)有廣東和北方的北京、山西、內(nèi)蒙古嚴(yán)重。

-SARS事件

SARS 的病原體？

“當(dāng)某一不明病因的流行病侵襲人類時(shí)，人們對(duì)它的反應(yīng)顯示了人類對(duì)未知事物的恐
懼”（The terror of the unknown is seldom better displayed than by the response of an epidemic,particularly when the epidemic strikes without apparent cause）[1]。1977 年愛(ài)德華?凱斯曾用這句話來(lái)描述當(dāng)時(shí)公眾對(duì)新出現(xiàn)的軍團(tuán)病的恐慌心理，現(xiàn)在我們同樣面臨著一場(chǎng)不明病原體的新型非典型肺炎—嚴(yán)重急性呼吸系統(tǒng)綜合征（SARS），這句話似乎同樣適用于對(duì)當(dāng)前人們心理的描述。不可否認(rèn)，一部分公眾對(duì)這場(chǎng)新的流行疾病存在恐慌心理，這種恐慌部分原因是出于對(duì)新疾病的不完全了解，對(duì)于這種疾病的病原體、傳播方式、致病機(jī)理、發(fā)病經(jīng)過(guò)、診斷治療預(yù)防等仍然缺乏進(jìn)一步的認(rèn)識(shí)。不過(guò)，幸運(yùn)的是人類采取了積極的應(yīng)對(duì)措施，WHO組織國(guó)際實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)聯(lián)合展開(kāi)對(duì)SARS 的研究，相關(guān)研究機(jī)構(gòu)在不到兩個(gè)月時(shí)間內(nèi)即找到了病原體并破譯了其基因組序列，初步揭開(kāi)了SARS 的神秘面紗。目前，專家們已經(jīng)取得了一定的進(jìn)展，研究發(fā)現(xiàn)SARS 疾病同一種新型冠狀病毒有關(guān)，而這種新病毒以前沒(méi)有在人體或動(dòng)物體內(nèi)發(fā)現(xiàn)過(guò)，這一發(fā)現(xiàn)為下一步的工作奠定了堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)，專家將繼續(xù)揭開(kāi)這種疾病的更多的未知之處。研究人員通過(guò)全球性的協(xié)作，借助于互聯(lián)網(wǎng)絡(luò)和多種研究手段，在短短兩個(gè)月時(shí)間內(nèi)就鑒定出病原體。而在20 多年前，研究人員尋找HIV 病毒時(shí)用了兩年多時(shí)間，隨后又花費(fèi)幾年時(shí)間才獲得其核苷酸序列。與之相比，對(duì)尋找SARS 病原體的快速反應(yīng)令人印象深刻。如果我們大致回顧發(fā)現(xiàn)病原體的過(guò)程，或許可以得到新的經(jīng)驗(yàn)，為進(jìn)一步的研究提供基礎(chǔ)，為未來(lái)可能爆發(fā)的另一場(chǎng)流行病提供經(jīng)驗(yàn)。

研究進(jìn)展

1.1 SARS 病原體的確認(rèn)
2003 年3 月15 日，WHO 組織國(guó)際研究網(wǎng)絡(luò)，相繼有11 個(gè)國(guó)家的實(shí)驗(yàn)室參加，我國(guó)于
4 月初加入。研究網(wǎng)絡(luò)的進(jìn)展過(guò)程大致如下。
3 月18 日，德國(guó)通過(guò)電鏡從咽拭子標(biāo)本中觀察到副粘病毒，同時(shí)香港中文大學(xué)獲得副粘病毒的基因擴(kuò)增產(chǎn)物，并在網(wǎng)絡(luò)上公布電鏡圖片和基因序列。
3 月19 日，新加坡從病人呼吸道標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)副粘病毒顆粒并獲得較微弱的病毒基因擴(kuò)增產(chǎn)物（根據(jù)香港中文大學(xué)提供的引物）。國(guó)際上首先發(fā)現(xiàn)副粘病毒的荷蘭鹿特丹實(shí)驗(yàn)室獲得有關(guān)病人的標(biāo)本。
3 月20 日，國(guó)際上有4 個(gè)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)始進(jìn)行副粘病毒檢測(cè)。荷蘭鹿特丹實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)到副粘病毒，但是副粘病毒基因擴(kuò)增為陰性，該實(shí)驗(yàn)室將檢測(cè)試劑送到新加坡和香港，加拿大實(shí)驗(yàn)室將雙份血清送到鹿特丹。
3 月21 日，香港中文大學(xué)科學(xué)家用猴腎細(xì)胞培養(yǎng)方法獲得病毒分離物，隨即研制了相應(yīng)血清學(xué)診斷試劑。許多家實(shí)驗(yàn)室的研究結(jié)果顯示此次病原體與下列病原體無(wú)關(guān)：甲、乙型流感病毒，呼吸道合胞病毒，副流感病毒1、2、3 型，腺病毒，鼻病毒，腸道病毒，人間質(zhì)肺炎病毒，肺炎支原體，肺炎衣原體；同時(shí)電鏡觀察到病毒顆粒為50-60nm，血清實(shí)驗(yàn)證明加入病人血清可以抑制細(xì)胞病變而對(duì)照血清無(wú)效。
3 月21 日，鹿特丹實(shí)驗(yàn)室發(fā)現(xiàn)在德國(guó)的3 個(gè)新加坡病人呼吸道標(biāo)本的HMPV 病毒PCR
檢測(cè)為陰性。并且，兩個(gè)可疑病例的呼吸道標(biāo)本接種Vero 細(xì)胞和猴腎細(xì)胞均發(fā)現(xiàn)病變。也是在這一天，英國(guó)科學(xué)家檢測(cè)該兩病人標(biāo)本中的H3N2 流感病毒；中國(guó)病毒專家洪濤宣布衣原體是引起SARS 的主要病原體，但不排除衣原體和冠狀病毒同時(shí)作用。
3 月21 日，軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所祝慶余、秦鄂德研究員等通過(guò)多方面的研究，成功從SARS 患者尸解標(biāo)本中分離出冠狀病毒樣病毒，推斷可能是SARS 的病原體，并將這一重要結(jié)果向解放軍總后勤部衛(wèi)生部和國(guó)家衛(wèi)生部進(jìn)行了書(shū)面匯報(bào)。
3 月22 日，香港病毒實(shí)驗(yàn)室電鏡發(fā)現(xiàn)冠狀病毒樣顆粒（70nm），美國(guó)從泰國(guó)病人標(biāo)本得到的細(xì)胞病變產(chǎn)物中發(fā)現(xiàn)冠狀病毒樣顆粒（70-100nm），但同一份標(biāo)本獲得HMPV 病毒PCR陽(yáng)性結(jié)果。與此同時(shí)，加拿大、法國(guó)、新加坡等地開(kāi)始使用PCR 和電鏡方法檢測(cè)副粘病毒和HMPV 病毒。加拿大發(fā)現(xiàn)20nm 的病毒顆粒并且發(fā)布HMPV 病毒的基因進(jìn)化樹(shù)。
3 月23 日，香港病毒實(shí)驗(yàn)室在8 份標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)2 份冠狀病毒RNA 陽(yáng)性。美國(guó)報(bào)道在香
港標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)冠狀病毒，同時(shí)建立免疫熒光檢測(cè)病人血清的方法，并將冠狀病毒的基因擴(kuò)增引物在網(wǎng)絡(luò)上公布。在新加坡和香港開(kāi)始用鼻咽拭子樣本感染支氣管的方式進(jìn)行靈長(zhǎng)類動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。加拿大和法國(guó)分別以電鏡觀察和PCR 技術(shù)檢測(cè)到冠狀病毒。德國(guó)、日本、新加坡從Vero 細(xì)胞中分離到病毒。英國(guó)實(shí)驗(yàn)室在可疑病例呼吸道和尿標(biāo)本中檢測(cè)到雞肺炎病毒序列。
3 月24-26 日，德國(guó)、香港的實(shí)驗(yàn)室分別以電鏡觀察和PCR 技術(shù)檢測(cè)到冠狀病毒，德國(guó)
實(shí)驗(yàn)室獲得病毒序列，證實(shí)新病毒的氨基酸序列與已知冠狀病毒的多聚酶氨基酸序列相符，德國(guó)、荷蘭、香港等地實(shí)驗(yàn)室獲得更多的基因擴(kuò)增序列，并在網(wǎng)絡(luò)上公布新病毒的基因進(jìn)化樹(shù)。
3 月27-31 日，繼續(xù)進(jìn)行以猴子為實(shí)驗(yàn)對(duì)象的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。香港和美國(guó)實(shí)驗(yàn)室分別證實(shí)正
常人血清與新分離病毒為陰性反應(yīng)。與此同時(shí)，有更多的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)到冠狀病毒：日本從新加坡標(biāo)本中獲得陽(yáng)性結(jié)果；香港檢測(cè)了50 份病人血清，其中27 份冠狀病毒抗體升高，同時(shí)人們還從10 份病人糞便樣本中發(fā)現(xiàn)5 份為病毒檢測(cè)陽(yáng)性，并且發(fā)現(xiàn)發(fā)病后6-16 天病人糞便中可以檢測(cè)到病毒基因；加拿大在病人標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)人類副粘病毒。
4 月1-8 日，在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中用副粘病毒和間質(zhì)肺炎病毒共同感染的猴子出現(xiàn)臨床癥狀。
美國(guó)研究人員用ELISA 方法從發(fā)病20 天的病人血中檢測(cè)到抗體。香港研究人員用免疫熒光方法從發(fā)病10 天的病人血清中檢測(cè)到IgM 抗體。小白鼠實(shí)驗(yàn)開(kāi)始啟動(dòng)。更多實(shí)驗(yàn)室在Vero培養(yǎng)細(xì)胞中分離到冠狀病毒，又有一些血清學(xué)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，SARS 疾病為副粘病毒和冠狀病毒復(fù)合感染。荷蘭、德國(guó)、香港和美國(guó)相繼發(fā)現(xiàn)冠狀病毒的新序列，德國(guó)科學(xué)家在標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)衣原體。
4 月9 日，中國(guó)疾病預(yù)防控制中心和軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所在軍事醫(yī)學(xué)科
學(xué)院舉行了有關(guān)SARS 病原體研究座談會(huì)，雙方有關(guān)專家分別介紹了衣原體和冠狀病毒方面的研究進(jìn)展。
4 月10 日下午，著名病毒學(xué)專家、中國(guó)工程院院士洪濤在舉行的“非典型肺炎防治知識(shí)介紹會(huì)”上向中外數(shù)十家媒體宣布：“對(duì)非典型肺炎病原體的研究目前初見(jiàn)成效，已找到兩種主要病原體--衣原體和冠狀病毒樣病毒”。
4 月10 日，據(jù)新華社報(bào)道，中國(guó)疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所李德新教授、畢勝利教授、段淑敏主任和許文波教授等科技人員，在非典型肺炎的病原學(xué)研究上取得重大突破，成功分離到數(shù)株冠狀病毒，克隆了所分離到的冠狀病毒部分基因。他們?cè)谌烙诜堑湫头窝撞∪说姆螛?biāo)本和其中一例的脾標(biāo)本進(jìn)行了冠狀病毒檢測(cè)，并從這些標(biāo)本中提純并擴(kuò)增出冠狀病毒基因，經(jīng)過(guò)核苷酸序列測(cè)定證實(shí)所擴(kuò)增基因?yàn)楣跔畈《镜腞NA 聚合酶基因，從而在世界上首次用分子生物學(xué)手段證實(shí)了病人器官內(nèi)存在冠狀病毒。他們把新病毒和其他冠狀病毒的基因序列進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)存在于非典型肺炎病人體內(nèi)的冠狀病毒為一種變異冠狀病毒。用這些標(biāo)本進(jìn)行多種細(xì)胞培養(yǎng)，成功分離到新冠狀病毒，病毒在培養(yǎng)細(xì)胞中數(shù)次傳代，均穩(wěn)定出現(xiàn)細(xì)胞病變，對(duì)該病毒的基因檢測(cè)持續(xù)陽(yáng)性。從國(guó)內(nèi)非典型肺炎病人咽拭子中分離到三株冠狀病毒，這些病毒的核苷酸序列和從病人臟器中分離到的冠狀病毒核苷酸序列相同。目前獲得的研究結(jié)果，在很大程度上表明冠狀病毒可能是引起非典型肺炎的病原體。
4 月11 日，新華社公布了軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所祝慶余、秦鄂德兩位研究員的發(fā)現(xiàn)。2 月底，該研究所從一例SARS 患者尸解標(biāo)本中分離并辨認(rèn)出冠狀病毒。截止到3 月21 日，通過(guò)血清學(xué)、免疫學(xué)、分子生物學(xué)等方面的研究，獲得了關(guān)于冠狀病毒的進(jìn)一步證明。4 月9 日，對(duì)分離出的4 株冠狀病毒進(jìn)行了序列測(cè)定。4 月16 日公布了這些結(jié)果。
4 月12 日，加拿大溫哥華不列顛哥倫比亞癌癥研究所Holt 博士及其研究組公布了SARS
嫌疑病原體的基因組序列。
4 月14 日，美國(guó)亞特蘭大CDC 的Anderson 博士研究小組也完成了基因組測(cè)序并在網(wǎng)上
公布，兩個(gè)研究小組的測(cè)序結(jié)果基本一致。
4 月16 日，WHO 負(fù)責(zé)傳染病的執(zhí)行干事戴維?海曼宣布，經(jīng)過(guò)全球科研人員通力合作，正式確認(rèn)一種變異冠狀病毒引起SARS。
4 月17 日，WHO 在日內(nèi)瓦召開(kāi)的新聞發(fā)布會(huì)宣布：完成病原體確定的最后一步工作，
即“科赫推定”中的第四步。由荷蘭Erasmus 大學(xué)Albert Osterhaus 博士領(lǐng)導(dǎo)的研究小組成功地用新冠狀病毒使實(shí)驗(yàn)用猴子染病，進(jìn)而該研究小組從被感染猴子體內(nèi)分離出該病毒并進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)。表明全球科學(xué)家在一個(gè)月的通力合作后，初步確定了SARS 的病原體[2-9]。
4 月22 日，中國(guó)公布“非典”元兇冠狀病毒圖[3][7][10] 。
1.2 SARS 病毒基因組解碼進(jìn)展
1.2.1 加拿大史密斯基因科學(xué)中心
4 月12 日，加拿大科學(xué)家破解SARS 疑似病原體的基因，朝開(kāi)發(fā)SARS 診斷方法以及研
發(fā)SARS 疫苗、藥物邁出第一步。
位于溫哥華的史密斯基因科學(xué)中心投入全球?qū)筍ARS 的行列。中心主任馬拉說(shuō)，基因
編碼是科學(xué)家研發(fā)診斷檢驗(yàn)方法所需的基本資料。史密斯基因科學(xué)中心破解此基因編碼之后，立即在國(guó)際網(wǎng)絡(luò)上公布（http://www.bcgsc.bc.ca）以提供給世界各地其它科學(xué)家使用。

1.2.2 香港大學(xué)
港大微生物學(xué)系主任袁國(guó)勇表示，港大醫(yī)學(xué)院完成引發(fā)SARS的冠狀病毒基因序列測(cè)定，確定是一種全新病毒，懷疑是由動(dòng)物傳播到人，至于是什么動(dòng)物，則有待研究。袁國(guó)勇認(rèn)為，這項(xiàng)發(fā)現(xiàn)有助于改善目前的快速測(cè)試方法。此前，香港中文大學(xué)的研究人員已于13 日晚將他們破解的新型冠狀病毒部分基因序列交給世界衛(wèi)生組織的“SARS”工作小組。

1.2.3 美國(guó)疾病預(yù)防控制中心
美國(guó)疾病預(yù)防控制中心4 月14 日宣稱，已經(jīng)完成了對(duì)被認(rèn)為是引起SARS 全球流行的
新冠狀病毒基因組的測(cè)序。其基因測(cè)序結(jié)果與加拿大一個(gè)實(shí)驗(yàn)室的測(cè)序結(jié)果基本一樣。對(duì)兩家機(jī)構(gòu)的測(cè)序結(jié)果比較后，發(fā)現(xiàn)其中的區(qū)別在于他們的測(cè)序結(jié)果有15 個(gè)額外的核苷酸，而這將是繼續(xù)開(kāi)展測(cè)序工作的重大開(kāi)端。測(cè)序結(jié)果是在10 名科學(xué)家及許多技術(shù)人員的共同努力下，工作了12 天后得出的。研究人員將其中一例SARS 患者的咽喉分泌物，在非洲綠猴腎細(xì)胞中進(jìn)行傳代細(xì)胞培養(yǎng)，對(duì)引起該疾病的冠狀病毒的核酸序列提純后擴(kuò)增測(cè)序。新的基因序列共有29,727 個(gè)核苷，在典型的冠狀病毒家族核糖核酸界值之內(nèi)，冠狀病毒家族成員一般有29,000 至31,000 個(gè)核苷。美國(guó)疾病預(yù)防控制中心主任Julie Gerberding 博士談到，確定一種新型病毒的基因序列對(duì)于疾病的治療和預(yù)防都是十分重要的。利用有關(guān)基因序列的信息，可以開(kāi)始進(jìn)行有關(guān)抗病毒藥物的實(shí)驗(yàn)室研究工作，可以作為研制疫苗的基礎(chǔ)，也可以發(fā)展診斷性測(cè)試以便早期發(fā)現(xiàn)病例。美國(guó)和加拿大的研究結(jié)果幾乎相同，這一點(diǎn)十分重要，表明病毒可能有共同的來(lái)源，因?yàn)檫@些樣品是從在不同國(guó)家受到感染的不同的個(gè)體中采集的。但美國(guó)疾病預(yù)防控制中心的官員強(qiáng)調(diào)，對(duì)于病毒的分析工作還遠(yuǎn)遠(yuǎn)沒(méi)有完成，冠狀病毒能夠
快速變異，研究人員需要將由細(xì)胞培養(yǎng)分離到的病毒與從SARS 患者的患病組織中所獲得的病毒加以比較，所開(kāi)展的基因測(cè)序工作將會(huì)加快比較工作的進(jìn)行。

1.2.4 中國(guó)科學(xué)院北京基因組研究所與軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所
中國(guó)科學(xué)院北京基因組研究所與軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所通力合作，于2003年4 月16 日完成了對(duì)分離自不同SARS 病例的四株冠狀病毒的基因組解碼工作。結(jié)果顯示，這一病毒的長(zhǎng)度約為3 萬(wàn)個(gè)堿基對(duì)，與加拿大、美國(guó)報(bào)告的序列基本一致，屬于一種新型冠狀病毒，這一成果僅比加拿大科學(xué)家宣布破譯冠狀病毒基因的時(shí)間晚兩天。冠狀病毒全基因組序列的成功測(cè)定，為追蹤冠狀病毒的來(lái)源，研制非典型性肺炎的診斷制劑、疫苗和治療藥物奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)，使我國(guó)的非典型肺炎防治工作向前邁出重要一步[2][3][4][5][8][10]。

2 研究人員分離并鑒定病原體
在這場(chǎng)全球相關(guān)實(shí)驗(yàn)室聯(lián)合尋找病原體的行動(dòng)中，香港研究人員率先取得了突破，他們以傳統(tǒng)的病毒培養(yǎng)、血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)以及現(xiàn)代分子遺傳學(xué)方法，鑒定了50 例SARS 患者體內(nèi)的病原體—一種新冠狀病毒。另外，對(duì)對(duì)照組樣本的分析進(jìn)一步支持了他們關(guān)于病原體的論點(diǎn)：在40 例來(lái)自患有其它呼吸疾病患者的呼吸道樣本中，沒(méi)有檢測(cè)到一份樣本含有新冠狀病毒的RNA；對(duì)來(lái)自血液捐獻(xiàn)者的200 份血清樣本中，沒(méi)有一份含有這種病毒的抗體。
這些發(fā)現(xiàn)同時(shí)支持了另兩家研究機(jī)構(gòu)所提出的觀點(diǎn)，美國(guó)疾病控制和預(yù)防中心（CDC）和加拿大多倫多的相關(guān)研究機(jī)構(gòu)同樣在SARS 患者體內(nèi)分離到了這種新型冠狀病毒，并認(rèn)為該病毒與SARS 爆發(fā)有聯(lián)系。德國(guó)研究人員在最初的三例患者體內(nèi)發(fā)現(xiàn)新型冠狀病毒，并且進(jìn)一步收集了來(lái)自越南河內(nèi)的患者樣本進(jìn)行檢驗(yàn)分析，結(jié)果也支持該結(jié)論。
2.1 國(guó)際實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)的研究結(jié)果
2.1.1 中國(guó)香港
香港大學(xué)微生物學(xué)系教授Peiris 領(lǐng)導(dǎo)的研究小組對(duì)香港的患者進(jìn)行了研究以尋找病原
體。
該小組選擇了香港三家急救醫(yī)院收治的50 例符合WHO 修改定義的SARS 患者，收集
了所有患者的咽拭樣本和血清樣本，選擇了部分患者分別收集嚴(yán)重期和康復(fù)期的血清和排泄
物樣本。另外，他們?nèi)〉靡焕颊叻谓M織樣本，進(jìn)行了病毒培養(yǎng)分離、反轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）
、常規(guī)的組織放射自顯影和電鏡觀察。用其他病人的咽拭樣本、排泄物和血清樣本的微生物
檢測(cè)結(jié)果作為對(duì)照。
研究人員最初進(jìn)行了常規(guī)的血液檢查、生化檢查以及微生物檢查，對(duì)血液樣本、咽拭樣
本分別進(jìn)行了細(xì)菌培養(yǎng)和血清學(xué)檢測(cè)，對(duì)咽拭樣本進(jìn)行快速熒光抗原檢測(cè)，以確定病原體是
否為常見(jiàn)呼吸道感染病毒，并且用多種細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)以分離病原體；用臨床樣本直接進(jìn)行
RT-PCR，以檢測(cè)是否為A 型流感病毒和人副粘病毒感染。另外，對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞采用了ELISA
方法以檢測(cè)是否存在衣原體。
研究的突破在于從兩名患者的樣本中分別觀察到了冠狀病毒樣顆粒。樣本之一來(lái)源于一
名53 歲男性患者，在他的咽拭樣本、肺活組織切片等樣本中檢測(cè)到冠狀病毒RNA，患者本
身冠狀病毒抗體滴度顯著升高（1/200~1/1600）。另一樣本取自一名42 歲女性患者，PCR 檢
測(cè)對(duì)冠狀病毒呈陽(yáng)性，她本身的血清抗體有變化（1/150~1/1600）。
研究人員分別對(duì)兩個(gè)樣本進(jìn)行培養(yǎng)細(xì)胞接種，2-4 天后出現(xiàn)圓形折光的病變細(xì)胞，表明
有病原體分離，分離到的病原體不和識(shí)別常見(jiàn)病毒的試劑板反應(yīng)。對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)的提出物進(jìn)行
42
高速離心，隨即進(jìn)行了電鏡負(fù)染色觀察，發(fā)現(xiàn)形態(tài)不規(guī)則的包膜病毒，直徑約80-90nm，表
面特征與冠狀病毒相似。對(duì)被感染細(xì)胞超薄切片進(jìn)行電鏡觀察，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜表面均
存在類似病毒顆粒，并且從兩名患者體內(nèi)分離出的病毒大小和形態(tài)特征很相似。
為獲得新分離病毒的基因序列信息，研究人員進(jìn)行了隨機(jī)RT-PCR，克隆測(cè)序了病毒感
染細(xì)胞的特征染色體帶，在GenBank 中進(jìn)行了同源序列比較，在被檢測(cè)的30 個(gè)克隆中發(fā)現(xiàn)
了一個(gè)未知序列。對(duì)這段DNA 序列進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)與冠狀病毒存在低同源性，但由其推出
的氨基酸序列與冠狀病毒科的牛冠狀病毒和鼠肺炎病毒RNA 聚合酶存在高同源性（57%），
蛋白序列的系統(tǒng)發(fā)育學(xué)研究顯示新病毒與冠狀病毒Group2 高度相關(guān)。對(duì)病毒血清學(xué)反應(yīng)采
用了間接免疫熒光檢測(cè)，結(jié)果顯示在32 例患者嚴(yán)重期和康復(fù)期的血清對(duì)比中，均出現(xiàn)血清
轉(zhuǎn)化，存在冠狀病毒的抗體滴度增長(zhǎng)的現(xiàn)象。
研究小組還對(duì)人副粘病毒進(jìn)行了RT-PCR 和血清抗體滴度檢測(cè)，結(jié)果顯示陰性，也未
檢測(cè)到其它病原體。因此，研究小組認(rèn)為分離到的冠狀病毒就是SARS 的病原體或一個(gè)必需
的因子，不過(guò)，是否有其它的微生物或非微生物輔助因子起作用，則有待觀察[11][12]。
2.1.2 德國(guó)
最初SARS 爆發(fā)于亞洲，由于洲際旅行該疾病從亞洲傳播到其它大洲。鑒于SARS 疾病
是一種新出現(xiàn)的病癥，人類對(duì)其病原體一無(wú)所知，最初的研究工作集中于對(duì)病原體的鑒定。
WHO 組織了國(guó)際實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)，集中各有關(guān)國(guó)家的研究力量以找出SARS 的病原體。德國(guó)研
究機(jī)構(gòu)作為該網(wǎng)絡(luò)的一份子，也對(duì)病原體的鑒定展開(kāi)了研究。
該研究小組最初選擇的樣本來(lái)自于同一家庭中的三個(gè)人：一名32 歲的男性患者、他的
妻子以及他的岳母。該男性為新加坡一名內(nèi)科醫(yī)生，曾治療過(guò)一名SARS 患者而被感染，繼
而他感染了他的妻子和岳母。三人因故由新加坡到美國(guó)，該醫(yī)生在美國(guó)期間出現(xiàn)癥狀，他告
知了他的新加坡同事，該同事向WHO 作了匯報(bào)，WHO 在三人返回新加坡的航班中轉(zhuǎn)站—
法蘭克福對(duì)他們進(jìn)行隔離。德國(guó)相關(guān)研究人員取得了他們的呼吸道樣本和血液樣本，隨后該
小組還獲得了來(lái)自亞洲的其他18 名可疑或可能SARS 病例的樣本，以及21 名接觸過(guò)SARS
患者但未被感染人員的樣本。
研究人員首先對(duì)上述3 例患者的樣本進(jìn)行了PCR 檢測(cè)，以鑒定是否存在肺炎雙球菌、
肺炎衣原體、人巨細(xì)胞病毒、副流感病毒、流感病毒、人副粘病毒、鼻病毒及人冠狀病毒
OC43 和229E 型等已知呼吸道病原體；對(duì)呼吸道樣本進(jìn)行抗原ELISA，以檢測(cè)是否存在肺
炎球菌、流感病毒及呼吸道合胞病毒，同時(shí)對(duì)血液樣本進(jìn)行了血清學(xué)檢測(cè)；另外，研究人員
對(duì)呼吸道樣本和血液樣本負(fù)染以進(jìn)行電鏡觀察，并將樣本進(jìn)行培養(yǎng)細(xì)胞接種。
研究人員用痰液樣本進(jìn)行了RNA 抽提，以隨機(jī)RT-PCR 技術(shù)分析，所設(shè)計(jì)的一些PCR
引物含有簡(jiǎn)并性位點(diǎn)，并且多數(shù)引物3’端為T 堿基，以便DNA 多聚酶在引物末端堿基不
完全匹配的情況下能夠生效。使用了BLAST 工具對(duì)克隆擴(kuò)增的產(chǎn)物進(jìn)行了同源性比較。
研究小組通過(guò)對(duì)三例患者的樣本進(jìn)行的多次檢測(cè)，針對(duì)已知呼吸道病原體的檢測(cè)結(jié)果
多為陰性，電鏡觀察呼吸道樣本時(shí)發(fā)現(xiàn)了稀少的副粘病毒樣顆粒，但隨后的數(shù)次針對(duì)副粘病
毒家族的PCR 檢測(cè)均顯示陰性。痰液樣本接種培養(yǎng)細(xì)胞6 天后，研究人員發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基中存
在病變細(xì)胞，隨即進(jìn)行了RNA 抽提，對(duì)提取的RNA 進(jìn)行RT-PCR，擴(kuò)增克隆出約20 個(gè)不
同的DNA 片段，對(duì)這些片段測(cè)序后以BLAST 進(jìn)行檢索，發(fā)現(xiàn)三個(gè)新的片段，新片段不與
數(shù)據(jù)庫(kù)中的序列匹配，但由新片段推出的氨基酸序列顯示了與冠狀病毒家族的同源性，表明
分離了一種新冠狀病毒。研究人員將新片段與美國(guó)疾病預(yù)防和控制中心（CDC）所測(cè)得的新
病毒核酸序列進(jìn)行了對(duì)比，發(fā)現(xiàn)存在同源性。在對(duì)這三例患者的血清樣本以及被感染的培養(yǎng)
細(xì)胞進(jìn)行了免疫熒光檢測(cè)，以確定是否存在抗體。在兩名患者的血清中檢測(cè)到IgG 抗體升高，
表明存在新冠狀病毒的血清反應(yīng)。
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為檢驗(yàn)新病毒是否同SARS 相聯(lián)系，研究人員進(jìn)一步收集了來(lái)自可能或可疑SARS 患者
及同SARS 患者有過(guò)接觸但未被感染人員的樣本（進(jìn)一步收集的樣本均來(lái)自越南河內(nèi)），對(duì)
這一批樣本進(jìn)行了巢式PCR 分析，結(jié)果在可能SARS 病例中發(fā)現(xiàn)病毒的比例是100%，在可
疑病例中是23%，但在健康接觸者中未發(fā)現(xiàn)病毒，這些數(shù)據(jù)或許可進(jìn)一步證明新冠狀病毒和
SARS 的聯(lián)系。
該研究小組還曾檢測(cè)到副粘病毒及肺炎球菌，但隨后的針對(duì)性PCR 實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陰性。在
幾例患者體內(nèi)發(fā)現(xiàn)了衣原體感染，但并沒(méi)有在其他SARS 患者體內(nèi)發(fā)現(xiàn)。因此研究人員還不
清楚這些病原體在SARS 疾病中是作為致病因子還是聯(lián)合致病因子[13]。
2.1.3 美國(guó)
美國(guó)疾病預(yù)防控制中心（CDC）是WHO 所組織的國(guó)際實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)的研究機(jī)構(gòu)之一，他
們也展開(kāi)了對(duì)SARS 病原體的鑒定工作。CDC 的樣本來(lái)自于越南、新加坡、泰國(guó)、加拿大
、中國(guó)香港、臺(tái)灣和美國(guó)等的SARS 患者，試圖從一系列已知的病原體中鑒定出引起此次
SARS 爆發(fā)的病源。
由于SARS 患者的臨床癥狀沒(méi)有特異性，最初的研究側(cè)重于對(duì)已知的呼吸道病原體的排
查，綜合使用了多種檢測(cè)方法。研究人員收集了包括血液、血清、鼻咽拭子、含嗽液和器官
組織在內(nèi)的多種樣本，在多種細(xì)胞中進(jìn)行了培養(yǎng)，并對(duì)乳鼠進(jìn)行了注射接種，以分離病原體；
觀察培養(yǎng)細(xì)胞和乳鼠，對(duì)出現(xiàn)病變的細(xì)胞或個(gè)體制備切片以進(jìn)行電鏡觀察；對(duì)血清樣本進(jìn)行
了血清學(xué)實(shí)驗(yàn)以檢測(cè)抗體；進(jìn)行了一般的和特殊的細(xì)菌培養(yǎng)，還利用了分子生物技術(shù)如PCR
、RT-PCR；對(duì)多種呼吸道病原體進(jìn)行了篩選，如耶爾森氏菌、支原體、衣原體、立克次體
、軍團(tuán)桿菌、流感病毒A、B 型，副流感病毒家族等。
研究的突破在于通過(guò)電鏡觀察到了冠狀病毒樣顆粒。以患者呼吸道樣本接種的培養(yǎng)細(xì)
胞出現(xiàn)了細(xì)胞病變，對(duì)出現(xiàn)病變的細(xì)胞制作超薄切片，進(jìn)行電鏡觀察，在病變細(xì)胞內(nèi)及細(xì)胞
膜發(fā)現(xiàn)了冠狀病毒樣顆粒：直徑約80-140nm，病毒表面有20-40nm 結(jié)構(gòu)復(fù)雜的突出物。利
用電鏡觀察患者支氣管沖洗液樣本，同樣發(fā)現(xiàn)了許多被感染細(xì)胞均存在冠狀病毒。
研究人員對(duì)病變細(xì)胞進(jìn)行了RNA抽提和RT-PCR 以擴(kuò)增新病毒序列，引物根據(jù)GenBank
中的已知冠狀病毒的序列信息而設(shè)計(jì)。對(duì)擴(kuò)增后的純化產(chǎn)物進(jìn)行了測(cè)序分析，與已公布的冠
狀病毒序列進(jìn)行了比對(duì)，并利用生物信息學(xué)技術(shù)分析，得出該病毒的進(jìn)化樹(shù)。新病毒與其他
冠狀病毒的序列以及由序列推出的氨基酸序列進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)新病毒與冠狀病毒家族group2
有較高的同源性。但分析進(jìn)化樹(shù)顯示，這種病毒在遺傳學(xué)上與其它冠狀病毒均有不同，表明
分離的是一種新型冠狀病毒。對(duì)樣本進(jìn)行的血清學(xué)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，以感染細(xì)胞切片與處于恢復(fù)期
的SARS 疑似患者血清進(jìn)行反應(yīng)，來(lái)自香港、曼谷和美國(guó)的SARS 疑似患者血清呈特異性反
應(yīng)，呈現(xiàn)從陰性到陽(yáng)性轉(zhuǎn)變或在間接熒光抗體實(shí)驗(yàn)中反應(yīng)性增高；對(duì)同一批血清樣本進(jìn)行
ELISA 抗原檢驗(yàn)，恢復(fù)期樣本的的反應(yīng)呈高特異性，抗體滴度也逐漸升高。
經(jīng)過(guò)樣本接種培養(yǎng)細(xì)胞擴(kuò)增病原體，電鏡觀察發(fā)現(xiàn)病原體為冠狀病毒屬，分子生物學(xué)研
究進(jìn)一步確定新病毒的本質(zhì)特征，血清學(xué)實(shí)驗(yàn)確定了與疾病的聯(lián)系，因此研究人員認(rèn)為分離
到的新型冠狀病毒有可能是SARS 的病原體。不過(guò)該研究小組同時(shí)指出：患者病灶組織細(xì)胞
中新冠狀病毒抗原或病毒RNA 還未在病理過(guò)程中被直接檢測(cè)到。同時(shí)，還不能證實(shí)新病毒
存在于所有SARS 患者體內(nèi)，一些SARS 患者未檢出冠狀病毒，需要進(jìn)一步的相關(guān)研究[14][15]。
2.1.4 加拿大
加拿大國(guó)家微生物實(shí)驗(yàn)室以及相關(guān)研究機(jī)構(gòu)組織了SARS 研究小組，展開(kāi)了對(duì)SARS
疾病的研究。
研究人員經(jīng)過(guò)追蹤調(diào)查，證實(shí)該國(guó)最初的SARS 患者曾經(jīng)去過(guò)香港并在那里被感染，
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該患者返回加拿大并且將SARS 疾病傳播到該國(guó)。研究人員所取得的樣本即來(lái)自該患者（已
死亡）直接或間接傳染的9 名患者。研究人員對(duì)1 例尸檢組織樣本進(jìn)行了組織病理學(xué)檢查，
對(duì)全部9 例患者的樣本進(jìn)行了微生物學(xué)檢測(cè)。對(duì)尸檢組織樣本進(jìn)行了免疫組織化學(xué)檢驗(yàn)，以
檢測(cè)是否存在流感病毒A、B，呼吸道合胞病毒、腺病毒、漢坦病毒、麻疹病毒、腸病毒、
黃病毒等已知常見(jiàn)病毒，以及立克次體、肺炎支原體、肺炎衣原體、耶爾森氏菌等，所有檢
測(cè)結(jié)果均為陰性。對(duì)9 例患者的血液樣本、呼吸道樣本以及尿液樣本進(jìn)行了常規(guī)的細(xì)菌和真
菌檢測(cè)，并對(duì)這些樣本進(jìn)行了培養(yǎng)，結(jié)果顯示陰性，另外針對(duì)軍團(tuán)菌的專門檢測(cè)亦顯示陰性。
研究人員對(duì)呼吸道樣本進(jìn)行了常見(jiàn)細(xì)菌的分子生物學(xué)檢測(cè)，抽提了DNA，進(jìn)行了針對(duì)常見(jiàn)
肺炎菌，耶爾森氏菌及衣原體等微生物的RT-PCR，結(jié)果同樣顯示陰性。
研究人員還進(jìn)行了常見(jiàn)病毒的檢測(cè)，對(duì)9 例患者的所有呼吸道樣本和糞便樣本進(jìn)行了常
規(guī)的直接病毒檢測(cè)，包括電鏡觀察和直接熒光抗體檢測(cè)，沒(méi)有在樣本中發(fā)現(xiàn)流感病毒A、B，
副流感病毒1、2、3，腺病毒、呼吸道合胞病毒等。同樣，針對(duì)常見(jiàn)呼吸道病毒，研究人員
也進(jìn)行了病毒的分子生物學(xué)檢測(cè)，大多數(shù)的檢測(cè)結(jié)果顯示陰性，但對(duì)支氣管沖洗液樣本以及
咽拭樣本進(jìn)行的巢式RT-PCR 發(fā)現(xiàn)了人副粘液病毒，并且排除了實(shí)驗(yàn)室交叉感染的可能性。
另外，從以呼吸道樣本接種的培養(yǎng)細(xì)胞中分離了一種新型冠狀病毒，在9 例SARS 患者中5
例患者的樣本分離出了這種病毒，在4 例患者的樣本中分離到了副粘液病毒。至此，該研究
機(jī)構(gòu)、香港研究小組和美國(guó)CDC 研究人員均報(bào)道了在SARS 患者體內(nèi)分離到了新型冠狀病
毒。研究人員隨后對(duì)新病毒進(jìn)行RT-PCR，擴(kuò)增克隆了病毒的核苷酸序列，并對(duì)其進(jìn)行了測(cè)
序，以生物信息學(xué)技術(shù)對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行了分析：新病毒的序列和已知冠狀病毒的序列均不同，
但是由該序列推出的氨基酸序列與已知幾種冠狀病毒的氨基酸序列有較高同源性（78%），
新病毒的生物進(jìn)化樹(shù)分析顯示新病毒同已知的冠狀病毒家族（group1、group2 和group3）均
不十分接近。
基于已有的發(fā)現(xiàn)，研究人員得出結(jié)論，認(rèn)為所分離的人副粘病毒和新冠狀病毒可能都與
SARS 疾病相聯(lián)系，但還不清楚是兩者聯(lián)合作用，還是兩病毒分別單獨(dú)作用，甚或還有其它
未被檢測(cè)出的病毒在起作用，需要進(jìn)一步研究以證實(shí)[16]。
2.2 中國(guó)
中國(guó)疾病預(yù)防控制中心病毒預(yù)防控制所洪濤院士領(lǐng)導(dǎo)的研究小組就SARS 的病原體展
開(kāi)了研究，經(jīng)電鏡觀察到SARS 患者尸檢標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)了衣原體和冠狀病毒顆粒，并在《中華
醫(yī)學(xué)雜志》上發(fā)表了他們的研究文獻(xiàn)。
該研究小組選擇的樣本來(lái)自7 例因患SARS 死亡的患者，研究人員采集了死者的臟器
組織標(biāo)本，制作了電鏡標(biāo)本和病理標(biāo)本。7 名死者中4 例來(lái)自廣東，1 例來(lái)自山西，1 例來(lái)
自北京，1 例為死于成都的香港患者，具有一定代表性。為分離病原，將病人肺組織提取物
接種于293 細(xì)胞(人胚腎轉(zhuǎn)化細(xì)胞系)，并且對(duì)病人組織及其分離的病原進(jìn)行免疫學(xué)鑒定，采
取了間接免疫熒光和免疫組織化學(xué)

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