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      默沙東抗病毒新藥letermovir用于高危骨髓移植受者預(yù)防巨細胞病毒(CMV)感染III期臨床獲得成功

      佚名 2023-08-12 17:21:32

      2016年10月21日訊 美國制藥巨頭默沙東(Merck & Co)近日宣布抗病毒藥物letermovir(MK-8228)在關(guān)鍵性III期臨床研究達到了主要終點。該研究是一項全球性、多中心、隨機、安慰劑對照研究,在巨細胞病毒(CMV)血清反應(yīng)陽性的異基因造血干細胞移植(allo-HSCT)成人受者(18歲及以上)中開展,調(diào)查了letermovir預(yù)防臨床意義的巨細胞病毒感染的療效和安全性。該研究的數(shù)據(jù)將提交至未來召開的醫(yī)學(xué)會議。

      目前,在臨床上,高危異基因造血干細胞移植受者群體中對預(yù)防CMV感染方面存在著巨大的未獲滿足的醫(yī)療需求,letermovir有望為這一群體提供一種重要的治療選擇。

      該項研究中,患者在移植后開始接受letermovir治療,每日給藥一次,或作為口服片劑或靜脈注射制劑,給藥劑量為:同時接受環(huán)孢素A的移植受者每日給藥letermovir 240毫克,而未接受環(huán)孢素A的移植受者每日給藥letermovir 480毫克。給藥時間最早從HSCT移植的當天開始,最晚不超過移植后28天,持續(xù)給藥至移植后大約100天(14周)。主要預(yù)后指標為移植后24周內(nèi)出現(xiàn)臨床意義的巨細胞病毒感染的患者比例。

      關(guān)于letermovir:

      letermovir是一種實驗性抗病毒藥物,每日給藥一次,目前正開發(fā)用于預(yù)防巨細胞病毒(CMV)感染。該藥屬于一類新的非核苷類CMV抑制劑(3,4-二氫喹唑啉),通過靶向病毒終止酶(terminase)復(fù)合物抑制病毒的復(fù)制。

      之前,美國食品和藥物管理局(FDA)、歐洲藥品管理局(EMA)及日本勞動衛(wèi)生福利部(MHLW)均已授予letermovir孤兒藥地位,用于高危群體預(yù)防巨細胞病毒感染及疾病。此外,F(xiàn)DA也已授予letermovir快車道地位。

      根據(jù)2012年簽訂的協(xié)議,默沙東通過旗下子公司從AiCuris GmbH公司收購了letermovir的全球開發(fā)及商業(yè)化權(quán)利。

      關(guān)于巨細胞病毒(CMV)感染:

      巨細胞病毒(CMV)在人類中廣泛流傳,在免疫不全或免疫缺陷的情況下(如移植受者),可能導(dǎo)致嚴重危及生命的感染。CMV感染的特征是發(fā)熱、白細胞減少(leukopenia,白細胞計數(shù)非常低)和血小板減少(thrombocytopenia,血小板數(shù)量非常低),同時伴有或不伴有器官功能障礙。在高危移植受者中,目前采取2種主要的策略用于預(yù)防巨細胞病毒感染:(1)用抗CMV藥物進行預(yù)防性治療(prophylaxis),(2)監(jiān)測并先發(fā)治療(pre-emptive therapy,又稱搶先治療)。

      巨細胞病毒(CMV-IgGII) 結(jié)果是142 IU/ml 參考值<12

      巨細胞病毒(CMV)是一種皰疹病毒,分布廣泛。 CMV感染可引起泌尿生殖系統(tǒng),中樞神經(jīng)系統(tǒng),肝,肺和血液循環(huán)系統(tǒng)病變,可能是惡性腫瘤的發(fā)生有關(guān)。新報告的艾滋病,巨細胞病毒感染可能有關(guān)。常通過性交傳播。因此列為性傳播疾病。
      更廣泛的人群中,巨細胞病毒感染可引起全身各器官組織病變,胎兒,嬰兒造成嚴重損害,甚至死亡,可能與宮頸癌等惡性腫瘤的發(fā)病率。因此,了解CMV積極預(yù)防巨細胞病毒感染是非常重要的。

      [病理]
      CMV [病原體]
      唾液中的病毒屬于皰疹病毒亞科,是一種病毒,人類皰疹病毒組。 ,由分子量約150X106線性雙鏈DNA。其最大的由162個殼微粒(病毒殼粒)正二十面體構(gòu)成。典型的皰疹病毒結(jié)構(gòu)。形式的單純皰疹病毒和水痘 - 帶狀皰疹病毒非常相似,難以區(qū)分。
      CMV只有在組織培養(yǎng)的人成纖維細胞的增殖,但不能在其他動物細胞的生長,增殖速度很慢,而且其復(fù)制周期為36-48小時時間超過8個小時的皰疹病毒復(fù)制周期的。初步分離需要超過一個月的特殊細胞,細胞成為公園的擴展,一個巨大的細胞和細胞核,核的“光環(huán)”圍繞大型嗜酸性包涵體。在生物體內(nèi)的靶細胞是上皮細胞。廣泛的交叉反應(yīng)之間的各種人類巨細胞病毒株。的
      CMV高達2小時的20%乙醚在生存。 pH值<5,或放置在56℃30分鐘,或5分鐘的紫外線照射可以是足夠滅活。巨細胞病毒感染的抗凍結(jié)和解凍,或存儲在-20℃或-50℃的不穩(wěn)定,10%的家用漂白劑使其感染顯著減少。的
      CMV感染其特征在于典型的細胞質(zhì)和核的夾雜物,也被稱為巨細胞病毒的巨細胞。在人體組織中肥大細胞,引起巨細胞包涵體病。

      發(fā)病機制中的原發(fā)感染,巨細胞病毒,在宿主細胞中無限期存在成潛伏狀態(tài)。提示尸檢肺,肝,胰腺,唾液腺,中樞神經(jīng)系統(tǒng)及腸也可能是病毒潛伏的地方可能涉及的各種組織和器官。先天性感染的嚴重程度,和缺乏沉淀的抗體和T細胞響應(yīng)于巨細胞病毒有關(guān)的能力。兒童和成人外周血中巨細胞病毒感染,抑制活化的細胞毒性T淋巴細胞表型,如果主機T-細胞功能受損,潛伏的病毒可能會復(fù)活,并導(dǎo)致各種綜合征。組織移植巨細胞病毒激活引起的疾病條件的慢性刺激。一些有實力的T細胞免疫抑制劑如抗胸腺細胞球蛋白,臨床CMV綜合征的高發(fā)期。此外,CMV可以使用的功能的輔助因子,使?jié)摲腥景滩《镜幕罨?

      感染的患者和他們的急性感染性疾病的人感染源的來源。已發(fā)現(xiàn)在血液,唾液,眼淚,尿液,精液,糞便,子宮頸和陰道分泌物,乳汁和其他的巨細胞病毒。傳輸?shù)娜橹?,唾液和尿液,可持續(xù)數(shù)星期至數(shù)年。

      易感人群
      巨細胞病毒在世界各地,人們有廣泛的易感性。人是巨細胞病毒的唯一宿主。
      血清學(xué)調(diào)查:40-100%的成年巨細胞病毒抗體流行的季節(jié)性趨勢。
      感染率在不同的國家和不同的經(jīng)濟狀況有所不同。在亞洲和非洲,90%的人口受感染,其中大多數(shù)是在一個年輕的年齡,抗體,感染年齡較早,而西方國家的感染后期發(fā)生的。調(diào)查還顯示,經(jīng)濟收入群體,低收入人群感染率較高。這位70歲的人群抗體陽性率超過20歲的人群中。女性易患年齡20-30歲的男性,年齡50-60歲,年齡在35歲后,男人和女人之間的抗體陽性率基本上是相同的。雖然身體已經(jīng)產(chǎn)生循環(huán)抗體,但病毒仍能夠持續(xù)或間歇性的排除,因此,是造成慢性或隱性感染。
      大多數(shù)人一輩子巨細胞病毒感染,但主要是無癥狀的隱性感染。成人巨細胞病毒感染和免疫功能密切相關(guān)。病毒往往會持續(xù)一生,在潛伏感染的形式,只有當宿主的免疫狀態(tài)失去平衡,如器官和骨髓移植,癌癥,數(shù)學(xué),妊娠和免疫抑制劑的應(yīng)用等,潛伏的病毒復(fù)活。潛伏的病毒的復(fù)活和無癥狀攜帶者可能會導(dǎo)致病毒的傳播。接受器官移植和免疫抑制治療的結(jié)果,往往器官,并進入血液中潛伏的病毒,或免疫激活潛伏的病毒和巨細胞病毒感染的艾滋病患者的發(fā)病率很高的發(fā)病率。

      巨細胞病毒傳輸途徑的傳播途徑:
      (1)先天性感染:妊娠(宮內(nèi)感染),巨細胞病毒可通過胎盤傳播給胎兒。
      (2)獲得性感染(圍產(chǎn)期感染):分娩時,如宮頸分泌物中病毒可通過產(chǎn)道傳播給新生兒。
      (3)產(chǎn)后乳汁分泌病毒,母乳喂養(yǎng)可直接傳染給嬰兒。
      (4)長期接觸,排毒,唾液,尿液,眼淚可以傳播。
      (5)同源性CMV感染可通過輸血,器官移植傳播。的同源性巨細胞病毒感染是一個嚴重的輸血和器官移植,多次輸血或原發(fā)和復(fù)發(fā)感染的危險性增加的大量輸血,輸入含白細胞血液,器官或骨髓移植后巨細胞病毒感染的風(fēng)險較高的風(fēng)險也很高。性傳播
      (6):由于該病毒往往是存在于泌尿生殖道分泌物,精液或?qū)m頸分泌物通過性交可直接蔓延。
      由于從精液,宮頸分泌物,眼淚,糞便(口腔性欲,吻肛)感染。巨細胞病毒感染途徑(中環(huán))表表1

      母親到胎兒,新生兒,兒童,成人

      陰道感染,接觸感染

      (唾液,尿)

      輸血
      肝炎
      呼吸道感染隱性感染

      肝炎

      呼吸道感染
      >

      →成熟不好的孩子體重增加慢免疫抑制劑引起的肺炎和
      胃腸道黏膜
      肝炎病毒血癥
      ┌→無創(chuàng)
      │ BR />└→感染 - →尿糖陽性的健康新生兒傳染性單核細胞增多癥傳染性單核細胞增多癥病毒在

      傳染性單核細胞增多癥樣疾病→病毒尿中紅細胞增多癥,肝功能障礙
      短暫的血小板 />減少隱性感染輸血

      不明原因的發(fā)熱無癥狀感染

      →全身性巨細胞包涵體病


      ,或精神發(fā)育遲滯的跡象生存

      [免疫學(xué)雜志
      巨細胞病毒感染可引起機體的免疫功能,尤其是細胞免疫功能下降。 CMV感染具有顯著影響的胸腺和脾細胞,單核吞噬細胞,NK細胞和CTL細胞的功能。

      實驗室的胸腺,脾臟急性CMV感染的新生豚鼠,抑制,胸腺,T細胞的數(shù)量減少成年小鼠巨細胞病毒感染,88%的胸腺巨細胞病毒的檢測。
      巨細胞病毒感染脾功能受影響,脾淋巴細胞增殖活性降低ConA刺激脾細胞產(chǎn)生IL-2顯著減少。
      <br免疫細胞巨細胞病毒感染引起的免疫抑制細胞內(nèi)病毒的復(fù)制有關(guān)。 CMV復(fù)制,其特征在于,所述單核吞噬細胞與巨細胞病毒感染的細胞,最容易具有重要的調(diào)節(jié)功能和單核吞噬細胞,T細胞,B細胞和一些尚未確定的單核細胞中的淋巴細胞在免疫反應(yīng)中的效應(yīng)子功能。巨細胞病毒感染可引起多種淋巴細胞免疫功能受損。的
      巨細胞病毒感染的急性單核細胞增多癥。外周血淋巴細胞的有絲分裂增殖反應(yīng),巨細胞病毒抗原和HSV抗原減弱,誘導(dǎo)干擾素的水平,CD4/CD8比值下降至1.7±0.7 0.2 +0.2降低T細胞活性。改變一些持續(xù)相當長的時間,10個月后的疾病,大多數(shù)患者T細胞亞群比例還沒有完全恢復(fù)正常。
      巨細胞病毒感染的免疫抑制作用是由大單核細胞感染病毒和CD8細胞功能障礙。單核吞噬細胞在抗CMV免疫中起著舉足輕重的作用,不僅可以直接吞服,防病毒,更重要的是可以處理的免疫反應(yīng),目前的抗原,細胞因子的分泌,調(diào)節(jié)和擴展。當CMV感染,單核吞噬細胞功能的影響,巨細胞病毒感染引起的巨噬細胞的吞噬作用降低細胞內(nèi)氧自由基減少,F(xiàn)C受體,補體受體表達的改變,和的抗原呈遞功能低級農(nóng)產(chǎn)品IL-1也減少了減少IL- 1和IL-2反應(yīng)。 Moses等胸腺細胞增殖測定中,IL-1活性降低,IL-1產(chǎn)生的減少可以導(dǎo)致在TH / TS細胞比例失衡。
      NK細胞拮抗作用的巨細胞病毒擴散。 NK細胞積極參與在整個過程中的抗巨細胞病毒感染的NK活力高,但不一定有一種保護性反應(yīng),但活動性感染的證據(jù)。 NK細胞不能防止出現(xiàn)原發(fā)性巨細胞病毒感染,但一旦感染了在場的,NK細胞,巨細胞病毒感染的早期,限制擴散,使感染的限制。 NK細胞,CTL細胞是抗CMV的重要效應(yīng)細胞。在CMV復(fù)制早期,感染性病毒體的產(chǎn)生之前,他們可以切割被感染的細胞,使細胞之間的病毒流產(chǎn)的蔓延。在小鼠模型中,病毒的影響3-5天,由NK細胞介導(dǎo)的??抗病毒效應(yīng)由IFN增強NK細胞活性。 6-21天,脾,外周血細胞殺傷活性的CTL。 NK細胞,CTL細胞活性的高低決定了巨細胞病毒感染的敏感性及感染恢復(fù)易于身體。巨細胞病毒感染的細胞,NK細胞和CTL細胞的活性也受到嚴重影響。此外,特定的細胞免疫防止CMV感染復(fù)發(fā)作用。是檢測巨細胞病毒感染的腎移植受者的T細胞反應(yīng)的發(fā)生,發(fā)現(xiàn)有20個14巨細胞病毒細胞毒性反應(yīng),6個細胞毒性反應(yīng)者有嚴重的臨床后果。因此,一個特定的T細胞存在,有防止CMV感染復(fù)發(fā)。

      身體減少由巨細胞病毒感染,巨細胞病毒感染的毒力,有可能是多種的抗體的抗體。牛奶,宮頸分泌物,唾液,雖然特異性抗體,包括中和抗體。但仍可檢測出巨細胞病毒抗體并不能阻止病毒的傳播。不能阻止的宮內(nèi)胎兒從母體被動獲得的抗體,傳播的感染的產(chǎn)道或牛奶。有研究表明,在小鼠腹腔或靜脈注射致命CMV攻擊前,0.2毫升高滴度的抗CMV球蛋白,可完全保護動物死亡。 CMV等,然后次要攻擊,動物仍全部存活,表明抗體減少巨細胞病毒毒力的作用。

      孕婦感染巨細胞病毒會發(fā)生什么?
      孕婦巨細胞病毒感染,病毒可以通過胎盤感染胎兒,引起胎兒先天性感染,流產(chǎn)和死胎。
      出生的嬰兒先天性感染可無癥狀,但也有嚴重者可累及多器官,甚至導(dǎo)致死亡。癥狀可見肝脾腫大,黃疸,瘀點或特發(fā)性血小板減少性紫癜,脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜炎,小頭畸形。所有的孩子都將有不同程度的聽力,視力減退,意識,運動障礙,智力低下和其他活著。通過產(chǎn)道或在出生后的哺乳感染,是后天感染,一般癥狀輕微,預(yù)后良好,肝功能異常和個人。

      [臨床表現(xiàn)]
      巨細胞病毒感染的癥狀是什么?
      健康成人巨細胞病毒感染多無明顯臨床癥狀,部分患者可有傳染性單核細胞增多癥,性能,發(fā)熱,乏力,咽喉痛,淋巴結(jié)腫大,肌肉疼痛,多發(fā)性神經(jīng)炎,外周血異型淋巴細胞,脾腫大的癥狀。
      孕期宮內(nèi)感染給胎兒,易發(fā)生自發(fā)性流產(chǎn)和死胎或早產(chǎn)可能會損壞。新生兒癥狀可見肝脾腫大,黃疸,肝炎,血小板減少性紫癜,溶血性貧血,神經(jīng)系統(tǒng)的退行性變,小頭畸形,智力低下,視力,聽力障礙。
      新生兒感染可無全身癥狀,有的僅表現(xiàn)為呼吸障礙的癥狀,有的肝功能異常。沒有神經(jīng)系統(tǒng)的損害。

      巨細胞病毒感染的自然史是一個非常復(fù)雜的,排毒原發(fā)感染后,往往幾個星期,幾個月,甚至幾年,然后到潛在感染。經(jīng)常復(fù)發(fā)感染,再解毒。即使多年后原發(fā)感染后,潛伏的病毒再活化,再感染時可有不同抗原性病毒株。巨細胞病毒感染的臨床表現(xiàn)的個體的免疫功能和與年齡有關(guān)。示于表2,無論是從垂直傳輸,并行傳輸或醫(yī)源性感染的癥狀和體征是多種多樣的。
      表2CMV感染性疾病的臨床過程和疾病的類型(Baerlocher)
      嚴重的類型:黃疸,貧血,肝脾腫大,血小板減少,感染的新生兒(先天性)
      減少性紫癜,違反中央神經(jīng)系統(tǒng),肺炎,心肌炎)
      B。溫和型:假死,心臟肥大,高膽紅素血癥
      2。出生后無癥狀期,哺乳期的CMV再感染(先天/后天?)
      A.全身
      B。呼吸系(百日咳樣)C類型。肝脾腫大
      。胃腸型腎型?
      3。后天型
      一。型流感
      B。單核細胞增多癥型呼吸型
      D。胃腸型戊型肝炎

      F。由于特殊的醫(yī)療防御能力低
      克。無癥狀型?
      的4.1,2,3長期后果關(guān)于收購巨細胞病毒感染,常見于輸血在臨床組織細胞增生癥的單核細胞后,由于免疫功能紊亂,精神,運動遲緩
      血管,視網(wǎng)膜炎癥,肺炎和胃腸道感染。多數(shù)網(wǎng)格 - 巴氏綜合癥的患者。

      [診斷]
      巨細胞病毒感染的臨床表現(xiàn)不能確診的,必須依靠實驗室是指一個病毒分離從臨床標本(或特異性抗體4倍以上的增加或持續(xù)的抗體效價),以明確診斷。
      病毒隔離

      最好的唾液,尿液,生殖道分泌物,乳汁,和白血細胞,接種到人體成纖維細胞的繁殖和分離,細胞病變效應(yīng)(CPE可以觀察到的巨細胞固定和HE染色)出現(xiàn)在數(shù)天或數(shù)周后,核內(nèi)包涵體,核周暈和嗜酸性粒細胞胞漿內(nèi)夾雜物,很象“貓頭鷹眼”(貓頭鷹的眼睛)也可以使用單克隆或多克隆抗體染色等方法檢查。

      兩個最常用的是補體的血清抗體檢測

      綜合測試(CF),間接免疫熒光法(IIF),免疫酶試驗(EIA),間接血凝檢測CMV-IgG和IgM抗體的試驗(IHA)和放射免疫分析法(RIA)。當單份血清樣品,以確定巨細胞病毒感染的歷史,你應(yīng)該立即離開的血清樣本,和間隔2周,4周,8周,然后離開結(jié)合病毒分離的血清樣品,可用于診斷為原發(fā)性感染。

      DNA探針

      已被廣泛的CMV的32P標記的探針,一些標本,混合比病毒分離是更敏感的方法的靈敏度最高的檢測中使用。

      聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)

      (一)標本收集和處理

      采集標本,包括病人的血,尿,腺體組織。由全血制備的血沉棕黃層(血沉棕黃外套),可以存儲在-80℃;尿標本,可以儲存于液氮中。冷凍保存的標本應(yīng)避免反復(fù)凍融。

      尿標本2500r/min離心10分鐘,以除去細胞碎片,并收集上清液。預(yù)處理尿液中含有PCR抑制劑,如所要求的聚乙二醇(PEG6000):50? L尿上清液與50? L的20%PEG6000和25? L-2摩爾/ L的NaCl,混合,在冰浴中6小時; 15000r/min離心30分鐘沉淀收集。 6400r/min離心3分鐘;盡可能抽吸除去上清液,將沉淀物懸浮于蒸餾水中。該懸浮液可直接用于PCR擴增,擴增應(yīng)該是在100℃下進行加熱10分鐘的快速設(shè)置冰浴冷卻。

      (b)編制的模板DNA

      1。血液標本制備模板DNA

      A:中加入NaCl使血清終濃度的葡萄糖150mmol / L; 10? l本血清在70℃45秒,直接進行PCR擴增。

      方法B:制備的血沉棕黃層(BCP):(1)的BCP,收取沉淀用PBS洗滌兩次。 ②加入500? ?6mol / L的鹽酸胍同質(zhì)化。 ③加入30? ?10mmol / L的EDTA,10 mmol / L氯化鈉,30? L20%十二烷基肌氨酸鈉和5? ,?蛋白酶K(10mg/ml時),混合,60℃反應(yīng)1h。 ④加入1130? L乙醇沉淀1小時,-20℃。 ⑤通過離心收集沉淀的DNA。 ⑥進行洗滌兩次,用70%的乙醇中,并最后將沉淀物懸浮于10毫摩爾/ L的Tris-HCl,1mmol / L的EDTA少量。 4℃?zhèn)溆谩?
      2。冰凍組織標本制備模板DNA:①低溫恒溫器機切5到10嗎?米冰凍組織塊放置在1.5ml塑料管。 (2)配制緩沖液中加入10%福爾馬林溶液。 ③10分鐘1?2分鐘,輕輕倒出上清液,離心分離后,用乙醇沉淀,洗滌2次。 ④干燥,在室溫10?60分鐘。 ⑤加入提取緩沖液(100mmol / L的Tris-鹽酸,4毫摩爾/ L的EDTA,pH為8.0,400 G /毫升的蛋白酶K),從而使剛剛淹沒的沉淀物(約50至100·L)的沉淀搗碎。福爾馬林固定,石蠟包埋組織經(jīng)脫蠟和干燥,請點擊這里。 ⑥37℃放置在液體中。 ⑦放置在沸水中7分鐘滅活蛋白酶K⑧通過離心收集上清液,取1?10的? L可以進行PCR擴增。

      3。尿液標本制備模板DNA:①100? L尿上清液用100?升6 mol / L的異硫氰酸胍,7?升2mol / L的NaCl和20? L玻璃粉末懸浮液(DNA PREP,日本旭硝子公司,日本東京)混合。 (2)在室溫下攪拌10min,以6400r/min離心2分鐘,收集沉淀物。 ③的沉淀物用50%乙醇洗滌,10mmo / L的Tris-HCl,pH7.4的50毫摩爾/ L的NaCl,洗一次,6400r/min離心1分鐘。 ④同樣的沉淀物用水洗滌2次,并收集沉淀物。 ⑤加入50? L的蒸餾水在55℃,15分鐘。 ⑥15000r/min離心2分鐘,收集上清液(包括巨細胞病毒DNA),進行PCR擴增,此加熱該懸浮液,在100℃下10分鐘,并在冰浴中迅速冷卻。的

      (三)引物和探針

      引,及探針的設(shè)計是根據(jù)公布的巨細胞病毒立即早期蛋白基因的啟動子區(qū)域的四個外外顯子序列的開始,晚期抗原gp64基因和磷酸化蛋白pp71基因序列。中常用的引物和探針的表3中列出。

      (4)PCR擴增步驟

      1.10×反應(yīng)緩沖液:100毫摩爾/ L的Tris-鹽酸,pH為8.4,500毫摩爾/ L的KCl,25毫摩爾/ L的氯化鎂,2毫克/ ml的明膠。

      的Taq DNA聚合酶:5U /?升。

      10×dNTP濃度:4種的dNTP的各種2.0 mmol / L的。

      底漆:100pmol的/ L.
      2。常規(guī)PCR擴增

      10×反應(yīng)緩沖液反應(yīng)混合物(50 L)?大號

      10×dNTP的嗎? ?

      模板DNA的5?升

      Taq DNA聚合酶0.2?升(IU)

      每種引物,0.5?升

      蒸餾水3.8?升

      加1?2滴礦物油。

      反應(yīng)混合物加熱到94℃5分鐘,然后30秒,在95°C,55°C 40年代,在72°C 60秒,35至40個擴增循環(huán)。

      表3 CMV PCR擴增用引物和探針
      引物

      探針
      序列(5'→3')位置
      片斷

      大小

      IE1CCACCCGTGGTGCCAGCTCC
      早期基因
      159(BP)

      IE2
      CCCGCTCCTCCTGAGCACCC

      IE3(探頭)
      CT??GGTGTCACCCCCAGAGTCCCCTGTACCCGCGACTATCC

      LA1
      CCGCAACCTGGTGCCCATGG
      晚GP64 139

      LA2 CGTTTGGGTTGCGCAGCGGG

      LA3(探頭)
      TTCTTCTGGGACGCCAACGACATCTACCGCATCTTCGCCG外顯子1/> 139

      IE1b
      GGAATCCGCGTTCCAATGCA

      IE1a
      AGATCGCCTGGAGACGCCAT

      /> IE2a
      ATGGAGTCCTCTGCCAAGAG
      早期的外顯子2
      72

      IE2b
      CCGTGGCACCTTGGAGGAAG

      IE3a
      > GTGACCAAGGCCACGACGTT
      外顯子3月初
      167

      IE3b
      TCTGCCAGGACATCTTTCTC

      IE4a
      ACAGATTAAGGTTCGAGTGC
      外顯子4月初
      179

      IE4b
      CAATACACTTCATCTCCTCG

      IE4c
      TTACCAAGAACTCAGCCTTC
      早期基因第4外顯子
      > 158

      IE4d
      GTGCGTGAGCACCTTGTCTC

      IE4eTATACCCAGACGGAAGAGAAATTCA
      早期基因第4外顯子
      426

      IE4f
      ATAAGCCATAATCTCATCAGGGGAG

      PP1A
      TAGCGCGCATACATCCCGAGTACAT <BR / PP71基因
      316

      Pp1b
      ATGACGTTGCTCCGTGGAAAGAGACC
      Pp71

      3。的套筒式(嵌套)PCR擴增:①的反應(yīng)混合物中相同的組合物(2),只有的引物IE2a和IE4b(包括整個外顯子3的721B),每個100pmol。在94℃60秒,150秒,52℃72℃480S,擴增20循環(huán)。 ②取2? L的擴增產(chǎn)物,引物各加100pmol的IE3a和IE3b額外的試劑。然后,在94℃60秒,150秒,52℃72℃180秒,擴增20循環(huán)。

      (e)產(chǎn)品標識

      放大分析的產(chǎn)品可以是固相雜交和液相雜交試驗(膜)。

      1。固相雜交:

      ①預(yù)雜交3×SSPE,5×登哈特,0.5%SDS和25%甲酰胺的解決方案。膜的擴增產(chǎn)物在42℃預(yù)雜交30?60分鐘。 ②加入標記的探針(10cpm / G,2ng/ml),混合30?60分鐘。 ③0.2×SSPE .01%SDS在室溫下洗滌??膜3次,5分鐘/次,洗,在60℃,10分鐘/次,然后在室溫下洗滌??一次??以上,5min /次。 ④放射自顯影。
      2。液相雜交和凝膠電泳:

      ①取1/10體積的擴增產(chǎn)物在0.5?1.0pmol在探頭混合。 ②加入最終濃度為葡萄糖150mmol / L的NaCl,10毫摩爾/ L,鈉,磷酸和1mmol / L EDTA溶液,使總體積為20? ?③95℃10分鐘,然后在56°C為60分鐘。 ④離心10秒被添加的樣品緩沖液中,在8%的聚丙烯酰胺凝膠上進行電泳。 ⑤電泳完成后,用溴化乙錠染色,然后將其暴露于X-射線膠片放射自顯影。

      HCMV DNA分子的堿基序列還沒有被發(fā)現(xiàn)。雖然它的DNA的限制性內(nèi)切酶片段長度多形性,但其基因??組中的離散性的是不清楚??纱_定使用一個單一的引物對,進行PCR擴增,90%的人巨細胞病毒的野生型菌株;而使用不同HCMV序列的兩套以上的引物,可以檢測到幾乎所有的病毒株。因此,在這種情況下,通過PCR用引物位于不同區(qū)域的基因組中的兩個或多于兩個的雙。

      HCMV模板DNA制備過程中,有時會產(chǎn)生一些小的DNA片段,PCR反應(yīng)往往會導(dǎo)致一定程度的底部產(chǎn)品,從而影響測定結(jié)果。在這種情況下可以嵌套PCR法,其基本原理是使目標DNA的擴增是分為兩個步驟:首先,使用一對引物用于擴增靶DNA,包括長的DNA片段,然后取少量使用引物擴增產(chǎn)物的目標DNA只那么第二放大。通過控制每個步驟,擴增循環(huán)數(shù),以防止小的DNA片段所造成的假陽性。此方法也可避免假陰性結(jié)果。

      PCR檢測HCMV標本具有高靈敏度的。相當于幾十個病毒DNA分子或1?5PFU這從HCMV感染的組織培養(yǎng)上清液中的病毒的DNA序列可以被檢測到??梢詸z測到擴增產(chǎn)物的Southern雜交分析的尿液樣本到1pgHCMV DNA序列的水平;利用這個系統(tǒng),僅在4×104個細胞的病毒基因組,可以檢測到與非放射性的寡核苷酸探針,增加了2×103倍相比,斑點雜交。

      PCR技術(shù)檢測HCMV感染的臨床應(yīng)用價值,因為前的臨床癥狀的出現(xiàn)或感染的血清學(xué)證據(jù)的體液中病毒DNA,HCMV感染的早期指標可以用作。 HCMV感染通過胎盤,產(chǎn)道感染傳播,受感染的新生兒死亡率較高,因此利用PCR的早期診斷和及時治療,產(chǎn)前和產(chǎn)后護理也很重要。的關(guān)系,也可以使用這種方法,是否為HCMV與許多嚴重的疾病器官或組織移植供體的識別。此外,PCR檢測的穩(wěn)定性的指標,但也有半定量分析,并因此可以被用來作為一種手段的評價的各種抗病毒療效。

      [治療]
      發(fā)現(xiàn)在懷孕早期原發(fā)性巨細胞病毒感染,盡快盡可能終止妊娠。妊娠后期感染,應(yīng)進一步檢查胎兒畸形,并采取相應(yīng)的治療措施。抗病毒治療的臨床癥狀或先天性巨細胞病毒病。如阿糖胞苷,磺胺類配糖體,如干擾素,但效果還有待進一步觀察。的
      治療巨細胞病毒感染,并且可以適用于各種的抗病毒制劑如GCV,抗巨細胞病毒的免疫球蛋白制劑,干擾素和轉(zhuǎn)移因子。但這些藥物不會從根本上解決問題,往往停藥后反彈,這種病毒潛伏的病毒可作為艾滋病的原因之一,與來自不同國家的學(xué)者都致力于控制其感染。美國學(xué)者最近開發(fā)出兩種活疫苗,在第一次測試后相當有效的。一種是由AD169病毒株,另從鎮(zhèn),菌株制成,已經(jīng)清楚地表明抗巨細胞病毒的功效胃腸外給藥后巨細胞病毒抗體增加,從而增強機體免疫功能。

      [預(yù)防]
      巨細胞病毒對人類的巨大危險,所以我們應(yīng)積極預(yù)防其發(fā)生。
      (1)鍛煉身體的健身意識。提高機體的免疫功能和抗病能力,尤其是婦女的生育年齡,以減少巨細胞病毒對胎兒的嚴重危害。
      (2)我們需要保護懷孕或患有慢性消耗性疾病,免疫功能低下的病人,讓他們遠離感染源。
      (3)要注意環(huán)境衛(wèi)生,飲食和健康。
      (4)牛奶中的巨細胞病毒陽性不應(yīng)該進行母乳喂養(yǎng)。
      (5)免疫預(yù)防。尚在研究和探索。

      你的結(jié)果是正常的請放心

      巨細胞病毒病簡介

      目錄1拼音2英文參考3概述4疾病名稱5英文名稱6巨細胞病毒病的別名7分類8ICD號9流行病學(xué) 9.1傳染源9.2傳播途徑9.3易感人群 10巨細胞病毒病的病因11發(fā)病機制12巨細胞病毒病的臨床表現(xiàn) 12.1新生兒巨細胞病毒感染12.2成人的巨細胞病毒感染12.3宮內(nèi)感染12.4后天感染 13巨細胞病毒病的并發(fā)癥14實驗室檢查15輔助檢查16巨細胞病毒病的診斷17鑒別診斷18巨細胞病毒病的治療19預(yù)后20巨細胞病毒病的預(yù)防21相關(guān)藥品附:1巨細胞病毒病相關(guān)藥物 1拼音 jù xì bāo bìng dú bìng

      2英文參考 cytomegaloviral disease

      3概述 巨細胞病毒(cytomegalovirus,CMV)感染目前已日益受到重視;因受染細胞呈巨細胞化,胞質(zhì)、胞核內(nèi)可見包涵體,故又名巨細胞包涵體?。╟ytomegalic inclusion disease,CID)。受染后病毒可局限于涎腺,有的則導(dǎo)致全身性感染。巨細胞病毒(CMV)感染大多呈亞臨床型,顯性感染者則有多樣化的臨床表現(xiàn),嚴重者可致死。由于巨細胞病毒可經(jīng)宮內(nèi)感染造成死胎、流產(chǎn)、早產(chǎn),也可導(dǎo)致先天畸形,故巨細胞病毒病的防治工作影響到優(yōu)生優(yōu)育和人口質(zhì)量。人群普遍易感,年齡越小,易感性越高,臨床表現(xiàn)也越重。

      4疾病名稱 巨細胞病毒病

      5英文名稱 cytomegaloviral disease

      6巨細胞病毒病的別名 cytomegalic inclusion disease;cytomegalovirus;cytomegalovirus infection;巨大細胞包涵體病;巨細胞包涵體病;巨細胞病毒感染;巨細胞性包涵體??;細胞肥大包涵體病

      7分類 1.皮膚科 > 病毒性皮膚病 > 皰疹病毒性皮膚病

      2.感染內(nèi)科 > 病毒性感染

      8ICD號 B25

      9流行病學(xué)

      9.1傳染源

      巨細胞病毒(CMV)存在于無癥狀帶毒者或患者的血液、唾液、尿液、宮頸分泌物、乳汁、 *** 、淚液及糞便等排泌物中,可間歇性或長期排毒達數(shù)月或數(shù)年之久,成為本病的傳染源。

      9.2傳播途徑

      母嬰垂直傳播是巨細胞病毒病感染的重要途徑。病毒通過帶毒孕婦產(chǎn)道、哺乳、飛沫或密切接觸的方式在圍產(chǎn)期傳播給新生兒,也可直接通過胎盤導(dǎo)致宮內(nèi)傳播,感染率大約為10%。

      巨細胞病毒(CMV)感染的水平傳播主要通過與患者的密切接觸而發(fā)生,也可能經(jīng) *** 傳播,因此被世界衛(wèi)生組織列入性傳播疾病范疇。病毒可存在于患者器官上皮細胞、血管內(nèi)皮細胞,以及白細胞內(nèi);故接受器官移植、輸入污染血制品也是感染的途徑之一。

      9.3易感人群

      人群普遍易感,年齡越小,易感性越高,臨床表現(xiàn)也越重,年長兒及成人則大多數(shù)為隱性感染。人群中血清巨細胞病毒(CMV)抗體的檢出率隨年齡增加而增高,育齡婦女中20%~50%為陽性,60歲以上成人大多為陽性。生活在低收入水平、居住擁擠地區(qū)的兒童,巨細胞病毒(CMV)抗體陽性檢出率幾乎可達百分之百。

      巨細胞病毒(CMV)感染后多數(shù)人可產(chǎn)生抗體,并持續(xù)存在,但其僅有不完全的免疫保護作用;因此,血清抗體陽性者仍可能存在有潛伏感染,呈長期帶毒狀態(tài),并可在一定情況下被激活;甚或遭受二次感染。

      10巨細胞病毒病的病因 巨細胞病毒(CMV)歸屬于人皰疹病毒科β亞科,具有明顯的宿主種屬特異性,是人皰疹病毒科中最大、結(jié)構(gòu)也最復(fù)雜的病毒;巨細胞病毒(CMV)呈球形,直徑約為300nm,由雙層含脂糖蛋白外膜所包被;其基因組為230kb的線性雙鏈DNA分子,含有約200種蛋白質(zhì)的編碼基因。巨細胞病毒(CMV)對外界抵抗力差,65℃加熱30min、紫外線照射5min、乙醚等均可使之滅活,亦不耐酸。巨細胞病毒(CMV)只有一個血清型,常用ADl69作為代表株進行血清學(xué)檢測試驗。

      11發(fā)病機制 巨細胞病毒可廣泛存在于受染患者全身各器官組織內(nèi),感染可直接導(dǎo)致受染宿主細胞損傷;此外,還可能通過免疫病理機制產(chǎn)生致病效應(yīng)。

      巨細胞病毒主要侵犯上皮細胞。全身各主要臟器(肺、肝、腦、腎、脾、心、腸),腺體(涎腺、性腺),及神經(jīng)系統(tǒng)等均可受累。受染細胞變性,體積增大呈巨細胞化,然后崩解,導(dǎo)致局部壞死和炎癥。腦組織壞死后可以發(fā)生肉芽腫和鈣化。受染細胞發(fā)生巨細胞樣變后具有以下特點:細胞體積顯著腫大,達10~40 μm;胞核也變大,胞質(zhì)則顯得相對較少,胞質(zhì)及胞核內(nèi)均可出現(xiàn)包涵體。胞核內(nèi)可見嗜酸性包涵體,呈紅色,周圍繞以透亮?xí)灜h(huán),與核膜分開,使其整個外觀狀似貓頭鷹眼。

      12巨細胞病毒病的臨床表現(xiàn)

      12.1新生兒巨細胞病毒感染

      新生兒的巨細胞病毒(CMV)感染主要來自宮體內(nèi)感染,或在分娩時或服汁中接觸感染,大多數(shù)不表現(xiàn)癥狀。發(fā)育不良體弱嬰兒表現(xiàn)為巨細胞病毒(CMV)單核細胞增多綜合征,表現(xiàn)斑疹、肝脾和淋巴結(jié)腫大、黃疸、皮內(nèi)出血、溶血性貧血、脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜炎和不同程度的神經(jīng)系統(tǒng)受損癥狀,如聽力喪失、小頭畸形、視神經(jīng)萎縮等。患兒體內(nèi)長期排毒,使之成為人群中巨細胞病毒(CMV)接觸感染的重要根源。

      12.2成人的巨細胞病毒感染

      成人巨細胞病毒感染多發(fā)生于有免疫缺陷或免疫抑制者,尤其見于因器官移植、接受免疫抑制劑治療者,或有造血系統(tǒng)和淋巴網(wǎng)狀系統(tǒng)的惡性腫瘤及多次輸血的病人。30歲女性最易感染。臨床通常表現(xiàn)為單核細胞增多樣綜合征,如持續(xù)發(fā)熱、單核細胞增多的血象改變、肝功異常,個別患者四肢遠端可出現(xiàn)麻疹樣紅樣紅斑,持續(xù)數(shù)小時至數(shù)天。巨細胞病毒(CMV)性肺炎是死亡的首要原因,病死率高達90%。

      巨細胞病毒(CMV)感染是AIDS患者發(fā)病和死亡的原因之一,AIDS中巨細胞病毒(CMV)感染普遍存在,巨細胞病毒(CMV)可激活HIV,而HIV常伴隨巨細胞病毒(CMV)的再活化,二者相互影響,主要累及中樞神經(jīng)系統(tǒng)、胃腸道及肺部,常引起視網(wǎng)膜炎。

      12.3宮內(nèi)感染

      系孕婦體內(nèi)的巨細胞病毒(CMV)通過胎盤使胎兒在宮內(nèi)受染,是人巨細胞病毒病感染的重要途徑之一。受染胎兒90%為隱性感染,僅10%表現(xiàn)為臨床感染,但有時后果較為嚴重,尤其當感染發(fā)生在妊娠頭4個月內(nèi)時,更易造成胎兒損害。例如,部分受染胎兒呈現(xiàn)發(fā)育遲緩,出生時體重不足,或呈各種形式的先天畸形,如小頭畸形、肢體畸形、先天性心臟病、斜眼、失明等,或在出生后短期內(nèi)出現(xiàn)黃疸、肝脾腫大、肺炎、心肌炎、出血傾向、嗜睡、昏迷、抽搐等多系統(tǒng)器官損害,可于數(shù)星期內(nèi)死亡。

      巨細胞病毒(CMV)宮內(nèi)感染也可造成死胎、流產(chǎn)、早產(chǎn)。在一組3810的新生兒流行病學(xué)調(diào)查中,臍血標本的抗CMVIgM的陽性檢出率為1.5%;而在該組40例死產(chǎn)、死胎的臍血標本中,抗CMVIgM的陽性檢出率則高達32.5%。

      12.4后天感染

      巨細胞病毒(CMV)的后天感染多呈隱性感染或癥狀輕微,但少數(shù)患者臨床表現(xiàn)較為嚴重。圍生期感染的新生兒患者(其中部分可能系在宮內(nèi)受染)可呈遷延性肺炎;兒童及成人患者可發(fā)生巨細胞病毒性肝炎(癥狀體征類似于一般病毒性肝炎)。有的患者可表現(xiàn)為畏寒、發(fā)熱、咽痛、頭痛、身痛、血中出現(xiàn)變異淋巴細胞,可高達10%~20%,其臨床表現(xiàn)頗似于EB病毒感染所致的傳染性單核細胞增多癥,但嗜異性凝集試驗呈陰性,可資鑒別。據(jù)統(tǒng)計,在傳染性單核細胞增多癥患者中,大約8%系因巨細胞病毒(CMV)感染所致。

      對機體處于免疫抑制狀態(tài)的患者,巨細胞病毒(CMV)感染可導(dǎo)致嚴重的臨床表現(xiàn)。由于器官移植術(shù)受者常須接受免疫抑制處理,故巨細胞病毒(CMV)感染是器官移植術(shù)后嚴重并發(fā)癥的主要病因之一,如肝炎、潰瘍性胃腸道炎、肺炎等;有的可導(dǎo)致術(shù)后死亡,或被迫摘除已移植的器官。此類患者的巨細胞病毒(CMV)感染主要來源于供者(供體器官及移植手術(shù)所需的大量輸血中均可能潛伏有CMV感染),但亦可能系因患者原有巨細胞病毒(CMV)隱伏感染的激活,不過后者的病情可能較前者為輕。人巨細胞病毒病也常見于HIV(人類免疫缺陷病毒)感染者。HIV感染發(fā)病成為艾滋病患者后,則易形成全身播散性巨細胞病毒(CMV)感染,系艾滋病患者的一個重要死因。

      13巨細胞病毒病的并發(fā)癥 巨細胞病毒(CMV)宮內(nèi)感染是導(dǎo)致流產(chǎn)及先天性殘障兒的一個重要病因。在出生時外觀狀似正常的宮內(nèi)受染新生兒中,約5%~10%于生后數(shù)年內(nèi)將不同程度地出現(xiàn)聾啞、智力愚鈍、行為異常、運動失調(diào)等軀體或精神發(fā)育障礙。鑒于弓形蟲?。╰oxopla *** osis,即“T”)、其他病原體(others,即“O”)、風(fēng)疹病毒(rubella virus,即“R”)、巨細胞病毒(cytomegalovirus,即“C”)、單純皰疹病毒(herpes simplex virus,即“H”)均可經(jīng)宮內(nèi)感染導(dǎo)致類似的危害,因而一起被統(tǒng)稱為“TORCH綜合征”,是生殖保健醫(yī)學(xué)目前所面臨的重要課題之一。

      此外,已有研究表明,巨細胞病毒(CMV)感染可能有致癌作用,還可能是發(fā)生冠狀動脈狹窄癥的病因之一。

      14實驗室檢查 較重的巨細胞病毒病患者可有白細胞數(shù)增高,血中出現(xiàn)變異淋巴細胞;嬰幼兒患者常伴貧血、血小板數(shù)減少;累及肝臟導(dǎo)致巨細胞病毒(CMV)肝炎的患者出現(xiàn)肝功能異常。

      利用PCR技術(shù)進行巨細胞病毒(CMV)基因檢測,可提供病毒在患者體內(nèi)存在的直接證據(jù);其靈敏度很高,可在數(shù)小時內(nèi)做出檢測報告,已成為臨床診斷巨細胞病毒(CMV)感染或帶毒狀態(tài)的重要手段;但須在經(jīng)過技術(shù)認證合格的實驗醫(yī)學(xué)實驗室內(nèi)進行,并在操作過程中應(yīng)注意避免污染,嚴格控制反應(yīng)條件,以排除PCR技術(shù)可能導(dǎo)致的假陽性反應(yīng)。

      采集患者尿液、唾液、血液或活檢組織標本接種人二倍體成纖維細胞進行體外培養(yǎng)、分離病毒可確診巨細胞病毒病;不過,巨細胞病毒(CMV)生長緩慢,接種后4~6周始能觀察到培養(yǎng)細胞病變,不能用需要復(fù)雜的設(shè)備條件,故臨床上仍難以普遍推廣應(yīng)用。

      細胞涂片病理學(xué)檢查或活組織病理學(xué)檢查均可望查見特征性的巨細胞樣變細胞及胞核內(nèi)嗜酸性包涵體,有助于巨細胞病毒病的診斷,但其檢出率并不高,且不能僅以此作為確診的依據(jù)。若采用細胞免疫組織化學(xué)技術(shù)進行CMV抗原的檢測,可以提高陽性檢出率,而且能據(jù)此確診。

      15輔助檢查 可使用免疫電鏡做病毒鑒定。

      16巨細胞病毒病的診斷 凡新生兒、嬰幼兒患間質(zhì)性肺炎,或患肝炎伴單核細胞增多,出現(xiàn)變異淋巴細胞,尤其伴有先天畸形的新生兒,應(yīng)考慮巨細胞病毒病。成人接受輸血、器官移植,或免疫抑制治療后出現(xiàn)單核細胞增多,出現(xiàn)變異淋巴細胞,發(fā)熱、皮疹、肝脾腫大者,亦應(yīng)考慮巨細胞病毒(CMV)。

      外周血抗CMV IGM陽性表明新近存在巨細胞病毒(CMV)感染,對于嬰幼兒患者可診斷巨細胞病毒病。由于孕婦外周血IgM型抗體不能通過胎盤屏障,所以若新生兒臍血抗CMV IgM檢測陽性則可診斷CMV宮內(nèi)感染(采集臍血標本時應(yīng)注意避免母血污染)。嬰幼兒外周血僅單一抗CMV IgG檢測陽性者,應(yīng)連續(xù)隨訪6~12個月,觀察其滴度是否有顯著意義的升高。由于成人人群中巨細胞病毒(CMV)抗體檢出率很高,故檢測巨細胞病毒(CMV)抗體用于成人患者診斷巨細胞病毒病的意義有限。

      用PCR技術(shù)檢測患者標本中的巨細胞病毒基因有助于確診巨細胞病毒??;可早在出生后頭3周,就能從新生兒的尿液或唾液標本中檢測出巨細胞病毒(CMV)的存在,為巨細胞病毒(CMV)的宮內(nèi)感染提供依據(jù)。

      近年有報道,對于腎移植手術(shù)的陽性供者和受者,利用高靈敏度的試劑盒定量檢測其血清巨細胞病毒(CMV)抗原滴度,可有助于決定是否進行抗病毒治療。

      17鑒別診斷 巨細胞病毒病患者嗜異性凝集試驗呈陰性,可與EB病毒所致的傳染性單核細胞增多癥相鑒別。鑒別診斷時尚應(yīng)注意與病毒性肝炎以及其他病因所致的肝大、黃疸等相區(qū)別。對于先天性畸形,或死胎、流產(chǎn)、早產(chǎn)等所謂“TORCH綜合征”的患者,則應(yīng)與導(dǎo)致此類疾患的其他病因即弓形蟲病、風(fēng)疹病毒感染、單純皰疹病毒感染,及其他可能的病原體感染(如梅毒螺旋體等)一一鑒別。

      18巨細胞病毒病的治療 更昔洛韋治療巨細胞病毒(CMV)引起的視網(wǎng)膜炎85%有效。臨床證實更昔洛韋和膦甲酸兩種藥治療同種移植受體和AIDS患者的CMV感染療效較好。

      巨細胞病毒病迄今尚無滿意的抗病毒治療藥物。阿昔洛韋對本病無效。更昔洛韋和膦甲酸鈉是兩種治療巨細胞病毒(CMV)感染的抗病毒藥物,已用于艾滋病患者、器官移植術(shù)后合并巨細胞病毒(CMV)感染患者的治療,或器官移植術(shù)后的預(yù)防性用藥,不過臨床使用后的效果尚未臻理想。

      更昔洛韋是阿昔洛韋的衍生物,實驗室觀察可抑制巨細胞病毒DNA的合成。臨床試用于巨細胞病毒病患者的劑量為:緩慢靜脈滴注更昔洛韋2.5mg/kg體重,1次/8h,或5mg/kg體重,1次/12h,共2~3周。經(jīng)初步觀察,此藥有一定近期療效,但停藥后病毒又可重新復(fù)制活躍,故需用藥維持數(shù)月,甚至數(shù)年;由于此藥有一定毒性,例如使白細胞、血小板數(shù)減少等,故而往往難以堅持長期使用。對阿昔洛韋過敏者亦禁用此藥。此外,臨床上已發(fā)現(xiàn)一些巨細胞病毒(CMV)毒株對更昔洛韋表現(xiàn)出不同程度的耐藥性;而且,此藥對巨細胞病毒性肺炎無效。

      膦甲酸鈉對巨細胞病毒DNA聚合酶和HIV病毒反轉(zhuǎn)錄酶均有抑制作用,故臨床試用于治療巨細胞病毒和HIV病毒合并感染的患者。

      19預(yù)后 一般成人或兒童患者發(fā)生巨細胞病毒(CMV)臨床感染后大多預(yù)后良好。對機體處于免疫抑制狀態(tài)的患者,例如器官移植術(shù)受者、艾滋病患者、接受化療或放療的晚期癌癥患者,巨細胞病毒(CMV)感染可導(dǎo)致嚴重的臨床表現(xiàn),或加速其死亡。巨細胞病毒(CMV)宮內(nèi)感染可導(dǎo)致流產(chǎn)或死產(chǎn)。

      20巨細胞病毒病的預(yù)防 對巨細胞病毒(CMV)抗體陽性的孕婦須加強圍生期醫(yī)學(xué)保健,必要時,抽取羊水進行巨細胞病毒(CMV)抗體的檢測,陽性者(尤其抗CMV IgM陽性)則提示已發(fā)生巨細胞病毒(CMV)宮內(nèi)感染。據(jù)調(diào)查表明,此類婦女再度妊娠后發(fā)生胎兒巨細胞病毒(CMV)宮內(nèi)感染的概率則減少,故可與患者夫婦討論本次妊娠是否考慮人工流產(chǎn)。尤其對本次宮內(nèi)感染發(fā)生的時間可能系在妊娠頭4個月內(nèi),且本次妊娠又屬該例婦女首次受孕者,具有巨細胞病毒(CMV)宮內(nèi)感染的較高風(fēng)險。人工流產(chǎn)可能有利于優(yōu)生優(yōu)育。但若患者夫婦因某種緣故不易受孕,本次妊娠屬珍貴兒,則不能貿(mào)然做出決斷,可輔以B超檢查胎兒協(xié)助決策。

      加強對器官移植(包括骨髓移植)供者的巨細胞病毒病篩選措施,包括對用于器官移植手術(shù)過程中所需血源的巨細胞病毒病篩選,均有助于預(yù)防巨細胞病毒病或潛伏性感染的發(fā)作,提高器官移植術(shù)的成功率。

      預(yù)防巨細胞病毒病的疫苗業(yè)已研制出來,尚在觀察試用中。

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      巨細胞病毒抗體(CMV-IgG)和巨細胞病毒抗體IgM(CMV-IgM)的檢測結(jié)果,望專業(yè)人士及團隊能幫忙解答,謝謝!

      巨細胞病毒(CMV)是一種皰疹病毒,分布廣泛。 CMV感染可引起泌尿生殖系統(tǒng),中樞神經(jīng)系統(tǒng),肝,肺和血液循環(huán)系統(tǒng)病變,可能是惡性腫瘤的發(fā)生有關(guān)。新報告的艾滋病,巨細胞病毒感染可能有關(guān)。常通過性交傳播。因此列為性傳播疾病。
      更廣泛的人群中,巨細胞病毒感染可引起全身各器官組織病變,胎兒,嬰兒造成嚴重損害,甚至死亡,可能與宮頸癌等惡性腫瘤的發(fā)病率。因此,了解CMV積極預(yù)防巨細胞病毒感染是非常重要的。

      [病理]
      CMV [病原體]
      唾液中的病毒屬于皰疹病毒亞科,是一種病毒,人類皰疹病毒組。 ,由分子量約150X106線性雙鏈DNA。其最大的由162個殼微粒(病毒殼粒)正二十面體構(gòu)成。典型的皰疹病毒結(jié)構(gòu)。形式的單純皰疹病毒和水痘 - 帶狀皰疹病毒非常相似,難以區(qū)分。
      CMV只有在組織培養(yǎng)的人成纖維細胞的增殖,但不能在其他動物細胞的生長,增殖速度很慢,而且其復(fù)制周期為36-48小時時間超過8個小時的皰疹病毒復(fù)制周期的。初步分離需要超過一個月的特殊細胞,細胞成為公園的擴展,一個巨大的細胞和細胞核,核的“光環(huán)”圍繞大型嗜酸性包涵體。在生物體內(nèi)的靶細胞是上皮細胞。廣泛的交叉反應(yīng)之間的各種人類巨細胞病毒株。的
      CMV高達2小時的20%乙醚在生存。 pH值<5,或放置在56℃30分鐘,或5分鐘的紫外線照射可以是足夠滅活。巨細胞病毒感染的抗凍結(jié)和解凍,或存儲在-20℃或-50℃的不穩(wěn)定,10%的家用漂白劑使其感染顯著減少。的
      CMV感染其特征在于典型的細胞質(zhì)和核的夾雜物,也被稱為巨細胞病毒的巨細胞。在人體組織中肥大細胞,引起巨細胞包涵體病。

      發(fā)病機制中的原發(fā)感染,巨細胞病毒,在宿主細胞中無限期存在成潛伏狀態(tài)。提示尸檢肺,肝,胰腺,唾液腺,中樞神經(jīng)系統(tǒng)及腸也可能是病毒潛伏的地方可能涉及的各種組織和器官。先天性感染的嚴重程度,和缺乏沉淀的抗體和T細胞響應(yīng)于巨細胞病毒有關(guān)的能力。兒童和成人外周血中巨細胞病毒感染,抑制活化的細胞毒性T淋巴細胞表型,如果主機T-細胞功能受損,潛伏的病毒可能會復(fù)活,并導(dǎo)致各種綜合征。組織移植巨細胞病毒激活引起的疾病條件的慢性刺激。一些有實力的T細胞免疫抑制劑如抗胸腺細胞球蛋白,臨床CMV綜合征的高發(fā)期。此外,CMV可以使用的功能的輔助因子,使?jié)摲腥景滩《镜幕罨?

      感染的患者和他們的急性感染性疾病的人感染源的來源。已發(fā)現(xiàn)在血液,唾液,眼淚,尿液,精液,糞便,子宮頸和陰道分泌物,乳汁和其他的巨細胞病毒。傳輸?shù)娜橹?,唾液和尿液,可持續(xù)數(shù)星期至數(shù)年。

      易感人群
      巨細胞病毒在世界各地,人們有廣泛的易感性。人是巨細胞病毒的唯一宿主。
      血清學(xué)調(diào)查:40-100%的成年巨細胞病毒抗體流行的季節(jié)性趨勢。
      感染率在不同的國家和不同的經(jīng)濟狀況有所不同。在亞洲和非洲,90%的人口受感染,其中大多數(shù)是在一個年輕的年齡,抗體,感染年齡較早,而西方國家的感染后期發(fā)生的。調(diào)查還顯示,經(jīng)濟收入群體,低收入人群感染率較高。這位70歲的人群抗體陽性率超過20歲的人群中。女性易患年齡20-30歲的男性,年齡50-60歲,年齡在35歲后,男人和女人之間的抗體陽性率基本上是相同的。雖然身體已經(jīng)產(chǎn)生循環(huán)抗體,但病毒仍能夠持續(xù)或間歇性的排除,因此,是造成慢性或隱性感染。
      大多數(shù)人一輩子巨細胞病毒感染,但主要是無癥狀的隱性感染。成人巨細胞病毒感染和免疫功能密切相關(guān)。病毒往往會持續(xù)一生,在潛伏感染的形式,只有當宿主的免疫狀態(tài)失去平衡,如器官和骨髓移植,癌癥,數(shù)學(xué),妊娠和免疫抑制劑的應(yīng)用等,潛伏的病毒復(fù)活。潛伏的病毒的復(fù)活和無癥狀攜帶者可能會導(dǎo)致病毒的傳播。接受器官移植和免疫抑制治療的結(jié)果,往往器官,并進入血液中潛伏的病毒,或免疫激活潛伏的病毒和巨細胞病毒感染的艾滋病患者的發(fā)病率很高的發(fā)病率。

      巨細胞病毒傳輸途徑的傳播途徑:
      (1)先天性感染:妊娠(宮內(nèi)感染),巨細胞病毒可通過胎盤傳播給胎兒。
      (2)獲得性感染(圍產(chǎn)期感染):分娩時,如宮頸分泌物中病毒可通過產(chǎn)道傳播給新生兒。
      (3)產(chǎn)后乳汁分泌病毒,母乳喂養(yǎng)可直接傳染給嬰兒。
      (4)長期接觸,排毒,唾液,尿液,眼淚可以傳播。
      (5)同源性CMV感染可通過輸血,器官移植傳播。的同源性巨細胞病毒感染是一個嚴重的輸血和器官移植,多次輸血或原發(fā)和復(fù)發(fā)感染的危險性增加的大量輸血,輸入含白細胞血液,器官或骨髓移植后巨細胞病毒感染的風(fēng)險較高的風(fēng)險也很高。性傳播
      (6):由于該病毒往往是存在于泌尿生殖道分泌物,精液或?qū)m頸分泌物通過性交可直接蔓延。
      由于從精液,宮頸分泌物,眼淚,糞便(口腔性欲,吻肛)感染。巨細胞病毒感染途徑(中環(huán))表表1

      母親到胎兒,新生兒,兒童,成人

      陰道感染,接觸感染

      (唾液,尿)

      輸血
      肝炎
      呼吸道感染隱性感染

      肝炎

      呼吸道感染
      >

      →成熟不好的孩子體重增加慢免疫抑制劑引起的肺炎和
      胃腸道黏膜
      肝炎病毒血癥
      ┌→無創(chuàng)
      │ BR />└→感染 - →尿糖陽性的健康新生兒傳染性單核細胞增多癥傳染性單核細胞增多癥病毒在

      傳染性單核細胞增多癥樣疾病→病毒尿中紅細胞增多癥,肝功能障礙
      短暫的血小板 />減少隱性感染輸血

      不明原因的發(fā)熱無癥狀感染

      →全身性巨細胞包涵體病


      ,或精神發(fā)育遲滯的跡象生存

      [免疫學(xué)雜志
      巨細胞病毒感染可引起機體的免疫功能,尤其是細胞免疫功能下降。 CMV感染具有顯著影響的胸腺和脾細胞,單核吞噬細胞,NK細胞和CTL細胞的功能。

      實驗室的胸腺,脾臟急性CMV感染的新生豚鼠,抑制,胸腺,T細胞的數(shù)量減少成年小鼠巨細胞病毒感染,88%的胸腺巨細胞病毒的檢測。
      巨細胞病毒感染脾功能受影響,脾淋巴細胞增殖活性降低ConA刺激脾細胞產(chǎn)生IL-2顯著減少。
      <br免疫細胞巨細胞病毒感染引起的免疫抑制細胞內(nèi)病毒的復(fù)制有關(guān)。 CMV復(fù)制,其特征在于,所述單核吞噬細胞與巨細胞病毒感染的細胞,最容易具有重要的調(diào)節(jié)功能和單核吞噬細胞,T細胞,B細胞和一些尚未確定的單核細胞中的淋巴細胞在免疫反應(yīng)中的效應(yīng)子功能。巨細胞病毒感染可引起多種淋巴細胞免疫功能受損。的
      巨細胞病毒感染的急性單核細胞增多癥。外周血淋巴細胞的有絲分裂增殖反應(yīng),巨細胞病毒抗原和HSV抗原減弱,誘導(dǎo)干擾素的水平,CD4/CD8比值下降至1.7±0.7 0.2 +0.2降低T細胞活性。改變一些持續(xù)相當長的時間,10個月后的疾病,大多數(shù)患者T細胞亞群比例還沒有完全恢復(fù)正常。
      巨細胞病毒感染的免疫抑制作用是由大單核細胞感染病毒和CD8細胞功能障礙。單核吞噬細胞在抗CMV免疫中起著舉足輕重的作用,不僅可以直接吞服,防病毒,更重要的是可以處理的免疫反應(yīng),目前的抗原,細胞因子的分泌,調(diào)節(jié)和擴展。當CMV感染,單核吞噬細胞功能的影響,巨細胞病毒感染引起的巨噬細胞的吞噬作用降低細胞內(nèi)氧自由基減少,F(xiàn)C受體,補體受體表達的改變,和的抗原呈遞功能低級農(nóng)產(chǎn)品IL-1也減少了減少IL- 1和IL-2反應(yīng)。 Moses等胸腺細胞增殖測定中,IL-1活性降低,IL-1產(chǎn)生的減少可以導(dǎo)致在TH / TS細胞比例失衡。
      NK細胞拮抗作用的巨細胞病毒擴散。 NK細胞積極參與在整個過程中的抗巨細胞病毒感染的NK活力高,但不一定有一種保護性反應(yīng),但活動性感染的證據(jù)。 NK細胞不能防止出現(xiàn)原發(fā)性巨細胞病毒感染,但一旦感染了在場的,NK細胞,巨細胞病毒感染的早期,限制擴散,使感染的限制。 NK細胞,CTL細胞是抗CMV的重要效應(yīng)細胞。在CMV復(fù)制早期,感染性病毒體的產(chǎn)生之前,他們可以切割被感染的細胞,使細胞之間的病毒流產(chǎn)的蔓延。在小鼠模型中,病毒的影響3-5天,由NK細胞介導(dǎo)的??抗病毒效應(yīng)由IFN增強NK細胞活性。 6-21天,脾,外周血細胞殺傷活性的CTL。 NK細胞,CTL細胞活性的高低決定了巨細胞病毒感染的敏感性及感染恢復(fù)易于身體。巨細胞病毒感染的細胞,NK細胞和CTL細胞的活性也受到嚴重影響。此外,特定的細胞免疫防止CMV感染復(fù)發(fā)作用。是檢測巨細胞病毒感染的腎移植受者的T細胞反應(yīng)的發(fā)生,發(fā)現(xiàn)有20個14巨細胞病毒細胞毒性反應(yīng),6個細胞毒性反應(yīng)者有嚴重的臨床后果。因此,一個特定的T細胞存在,有防止CMV感染復(fù)發(fā)。

      身體減少由巨細胞病毒感染,巨細胞病毒感染的毒力,有可能是多種的抗體的抗體。牛奶,宮頸分泌物,唾液,雖然特異性抗體,包括中和抗體。但仍可檢測出巨細胞病毒抗體并不能阻止病毒的傳播。不能阻止的宮內(nèi)胎兒從母體被動獲得的抗體,傳播的感染的產(chǎn)道或牛奶。有研究表明,在小鼠腹腔或靜脈注射致命CMV攻擊前,0.2毫升高滴度的抗CMV球蛋白,可完全保護動物死亡。 CMV等,然后次要攻擊,動物仍全部存活,表明抗體減少巨細胞病毒毒力的作用。

      孕婦感染巨細胞病毒會發(fā)生什么?
      孕婦巨細胞病毒感染,病毒可以通過胎盤感染胎兒,引起胎兒先天性感染,流產(chǎn)和死胎。
      出生的嬰兒先天性感染可無癥狀,但也有嚴重者可累及多器官,甚至導(dǎo)致死亡。癥狀可見肝脾腫大,黃疸,瘀點或特發(fā)性血小板減少性紫癜,脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜炎,小頭畸形。所有的孩子都將有不同程度的聽力,視力減退,意識,運動障礙,智力低下和其他活著。通過產(chǎn)道或在出生后的哺乳感染,是后天感染,一般癥狀輕微,預(yù)后良好,肝功能異常和個人。

      [臨床表現(xiàn)]
      巨細胞病毒感染的癥狀是什么?
      健康成人巨細胞病毒感染多無明顯臨床癥狀,部分患者可有傳染性單核細胞增多癥,性能,發(fā)熱,乏力,咽喉痛,淋巴結(jié)腫大,肌肉疼痛,多發(fā)性神經(jīng)炎,外周血異型淋巴細胞,脾腫大的癥狀。
      孕期宮內(nèi)感染給胎兒,易發(fā)生自發(fā)性流產(chǎn)和死胎或早產(chǎn)可能會損壞。新生兒癥狀可見肝脾腫大,黃疸,肝炎,血小板減少性紫癜,溶血性貧血,神經(jīng)系統(tǒng)的退行性變,小頭畸形,智力低下,視力,聽力障礙。
      新生兒感染可無全身癥狀,有的僅表現(xiàn)為呼吸障礙的癥狀,有的肝功能異常。沒有神經(jīng)系統(tǒng)的損害。

      巨細胞病毒感染的自然史是一個非常復(fù)雜的,排毒原發(fā)感染后,往往幾個星期,幾個月,甚至幾年,然后到潛在感染。經(jīng)常復(fù)發(fā)感染,再解毒。即使多年后原發(fā)感染后,潛伏的病毒再活化,再感染時可有不同抗原性病毒株。巨細胞病毒感染的臨床表現(xiàn)的個體的免疫功能和與年齡有關(guān)。示于表2,無論是從垂直傳輸,并行傳輸或醫(yī)源性感染的癥狀和體征是多種多樣的。
      表2CMV感染性疾病的臨床過程和疾病的類型(Baerlocher)
      嚴重的類型:黃疸,貧血,肝脾腫大,血小板減少,感染的新生兒(先天性)
      減少性紫癜,違反中央神經(jīng)系統(tǒng),肺炎,心肌炎)
      B。溫和型:假死,心臟肥大,高膽紅素血癥
      2。出生后無癥狀期,哺乳期的CMV再感染(先天/后天?)
      A.全身
      B。呼吸系(百日咳樣)C類型。肝脾腫大
      。胃腸型腎型?
      3。后天型
      一。型流感
      B。單核細胞增多癥型呼吸型
      D。胃腸型戊型肝炎

      F。由于特殊的醫(yī)療防御能力低
      克。無癥狀型?
      的4.1,2,3長期后果關(guān)于收購巨細胞病毒感染,常見于輸血在臨床組織細胞增生癥的單核細胞后,由于免疫功能紊亂,精神,運動遲緩
      血管,視網(wǎng)膜炎癥,肺炎和胃腸道感染。多數(shù)網(wǎng)格 - 巴氏綜合癥的患者。

      [診斷]
      巨細胞病毒感染的臨床表現(xiàn)不能確診的,必須依靠實驗室是指一個病毒分離從臨床標本(或特異性抗體4倍以上的增加或持續(xù)的抗體效價),以明確診斷。
      病毒隔離

      最好的唾液,尿液,生殖道分泌物,乳汁,和白血細胞,接種到人體成纖維細胞的繁殖和分離,細胞病變效應(yīng)(CPE可以觀察到的巨細胞固定和HE染色)出現(xiàn)在數(shù)天或數(shù)周后,核內(nèi)包涵體,核周暈和嗜酸性粒細胞胞漿內(nèi)夾雜物,很象“貓頭鷹眼”(貓頭鷹的眼睛)也可以使用單克隆或多克隆抗體染色等方法檢查。

      兩個最常用的是補體的血清抗體檢測

      綜合測試(CF),間接免疫熒光法(IIF),免疫酶試驗(EIA),間接血凝檢測CMV-IgG和IgM抗體的試驗(IHA)和放射免疫分析法(RIA)。當單份血清樣品,以確定巨細胞病毒感染的歷史,你應(yīng)該立即離開的血清樣本,和間隔2周,4周,8周,然后離開結(jié)合病毒分離的血清樣品,可用于診斷為原發(fā)性感染。

      DNA探針

      已被廣泛的CMV的32P標記的探針,一些標本,混合比病毒分離是更敏感的方法的靈敏度最高的檢測中使用。

      聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)

      (一)標本收集和處理

      采集標本,包括病人的血,尿,腺體組織。由全血制備的血沉棕黃層(血沉棕黃外套),可以存儲在-80℃;尿標本,可以儲存于液氮中。冷凍保存的標本應(yīng)避免反復(fù)凍融。

      尿標本2500r/min離心10分鐘,以除去細胞碎片,并收集上清液。預(yù)處理尿液中含有PCR抑制劑,如所要求的聚乙二醇(PEG6000):50? L尿上清液與50? L的20%PEG6000和25? L-2摩爾/ L的NaCl,混合,在冰浴中6小時; 15000r/min離心30分鐘沉淀收集。 6400r/min離心3分鐘;盡可能抽吸除去上清液,將沉淀物懸浮于蒸餾水中。該懸浮液可直接用于PCR擴增,擴增應(yīng)該是在100℃下進行加熱10分鐘的快速設(shè)置冰浴冷卻。

      (b)編制的模板DNA

      1。血液標本制備模板DNA

      A:中加入NaCl使血清終濃度的葡萄糖150mmol / L; 10? l本血清在70℃45秒,直接進行PCR擴增。

      方法B:制備的血沉棕黃層(BCP):(1)的BCP,收取沉淀用PBS洗滌兩次。 ②加入500? ?6mol / L的鹽酸胍同質(zhì)化。 ③加入30? ?10mmol / L的EDTA,10 mmol / L氯化鈉,30? L20%十二烷基肌氨酸鈉和5? ,?蛋白酶K(10mg/ml時),混合,60℃反應(yīng)1h。 ④加入1130? L乙醇沉淀1小時,-20℃。 ⑤通過離心收集沉淀的DNA。 ⑥進行洗滌兩次,用70%的乙醇中,并最后將沉淀物懸浮于10毫摩爾/ L的Tris-HCl,1mmol / L的EDTA少量。 4℃?zhèn)溆谩?
      2。冰凍組織標本制備模板DNA:①低溫恒溫器機切5到10嗎?米冰凍組織塊放置在1.5ml塑料管。 (2)配制緩沖液中加入10%福爾馬林溶液。 ③10分鐘1?2分鐘,輕輕倒出上清液,離心分離后,用乙醇沉淀,洗滌2次。 ④干燥,在室溫10?60分鐘。 ⑤加入提取緩沖液(100mmol / L的Tris-鹽酸,4毫摩爾/ L的EDTA,pH為8.0,400 G /毫升的蛋白酶K),從而使剛剛淹沒的沉淀物(約50至100·L)的沉淀搗碎。福爾馬林固定,石蠟包埋組織經(jīng)脫蠟和干燥,請點擊這里。 ⑥37℃放置在液體中。 ⑦放置在沸水中7分鐘滅活蛋白酶K⑧通過離心收集上清液,取1?10的? L可以進行PCR擴增。

      3。尿液標本制備模板DNA:①100? L尿上清液用100?升6 mol / L的異硫氰酸胍,7?升2mol / L的NaCl和20? L玻璃粉末懸浮液(DNA PREP,日本旭硝子公司,日本東京)混合。 (2)在室溫下攪拌10min,以6400r/min離心2分鐘,收集沉淀物。 ③的沉淀物用50%乙醇洗滌,10mmo / L的Tris-HCl,pH7.4的50毫摩爾/ L的NaCl,洗一次,6400r/min離心1分鐘。 ④同樣的沉淀物用水洗滌2次,并收集沉淀物。 ⑤加入50? L的蒸餾水在55℃,15分鐘。 ⑥15000r/min離心2分鐘,收集上清液(包括巨細胞病毒DNA),進行PCR擴增,此加熱該懸浮液,在100℃下10分鐘,并在冰浴中迅速冷卻。的

      (三)引物和探針

      引,及探針的設(shè)計是根據(jù)公布的巨細胞病毒立即早期蛋白基因的啟動子區(qū)域的四個外外顯子序列的開始,晚期抗原gp64基因和磷酸化蛋白pp71基因序列。中常用的引物和探針的表3中列出。

      (4)PCR擴增步驟

      1.10×反應(yīng)緩沖液:100毫摩爾/ L的Tris-鹽酸,pH為8.4,500毫摩爾/ L的KCl,25毫摩爾/ L的氯化鎂,2毫克/ ml的明膠。

      的Taq DNA聚合酶:5U /?升。

      10×dNTP濃度:4種的dNTP的各種2.0 mmol / L的。

      底漆:100pmol的/ L.
      2。常規(guī)PCR擴增

      10×反應(yīng)緩沖液反應(yīng)混合物(50 L)?大號

      10×dNTP的嗎? ?

      模板DNA的5?升

      Taq DNA聚合酶0.2?升(IU)

      每種引物,0.5?升

      蒸餾水3.8?升

      加1?2滴礦物油。

      反應(yīng)混合物加熱到94℃5分鐘,然后30秒,在95°C,55°C 40年代,在72°C 60秒,35至40個擴增循環(huán)。

      表3 CMV PCR擴增用引物和探針
      引物

      探針
      序列(5'→3')位置
      片斷

      大小

      IE1CCACCCGTGGTGCCAGCTCC
      早期基因
      159(BP)

      IE2
      CCCGCTCCTCCTGAGCACCC

      IE3(探頭)
      CT??GGTGTCACCCCCAGAGTCCCCTGTACCCGCGACTATCC

      LA1
      CCGCAACCTGGTGCCCATGG
      晚GP64 139

      LA2 CGTTTGGGTTGCGCAGCGGG

      LA3(探頭)
      TTCTTCTGGGACGCCAACGACATCTACCGCATCTTCGCCG外顯子1/> 139

      IE1b
      GGAATCCGCGTTCCAATGCA

      IE1a
      AGATCGCCTGGAGACGCCAT

      /> IE2a
      ATGGAGTCCTCTGCCAAGAG
      早期的外顯子2
      72

      IE2b
      CCGTGGCACCTTGGAGGAAG

      IE3a
      > GTGACCAAGGCCACGACGTT
      外顯子3月初
      167

      IE3b
      TCTGCCAGGACATCTTTCTC

      IE4a
      ACAGATTAAGGTTCGAGTGC
      外顯子4月初
      179

      IE4b
      CAATACACTTCATCTCCTCG

      IE4c
      TTACCAAGAACTCAGCCTTC
      早期基因第4外顯子
      > 158

      IE4d
      GTGCGTGAGCACCTTGTCTC

      IE4eTATACCCAGACGGAAGAGAAATTCA
      早期基因第4外顯子
      426

      IE4f
      ATAAGCCATAATCTCATCAGGGGAG

      PP1A
      TAGCGCGCATACATCCCGAGTACAT <BR / PP71基因
      316

      Pp1b
      ATGACGTTGCTCCGTGGAAAGAGACC
      Pp71

      3。的套筒式(嵌套)PCR擴增:①的反應(yīng)混合物中相同的組合物(2),只有的引物IE2a和IE4b(包括整個外顯子3的721B),每個100pmol。在94℃60秒,150秒,52℃72℃480S,擴增20循環(huán)。 ②取2? L的擴增產(chǎn)物,引物各加100pmol的IE3a和IE3b額外的試劑。然后,在94℃60秒,150秒,52℃72℃180秒,擴增20循環(huán)。

      (e)產(chǎn)品標識

      放大分析的產(chǎn)品可以是固相雜交和液相雜交試驗(膜)。

      1。固相雜交:

      ①預(yù)雜交3×SSPE,5×登哈特,0.5%SDS和25%甲酰胺的解決方案。膜的擴增產(chǎn)物在42℃預(yù)雜交30?60分鐘。 ②加入標記的探針(10cpm / G,2ng/ml),混合30?60分鐘。 ③0.2×SSPE .01%SDS在室溫下洗滌??膜3次,5分鐘/次,洗,在60℃,10分鐘/次,然后在室溫下洗滌??一次??以上,5min /次。 ④放射自顯影。
      2。液相雜交和凝膠電泳:

      ①取1/10體積的擴增產(chǎn)物在0.5?1.0pmol在探頭混合。 ②加入最終濃度為葡萄糖150mmol / L的NaCl,10毫摩爾/ L,鈉,磷酸和1mmol / L EDTA溶液,使總體積為20? ?③95℃10分鐘,然后在56°C為60分鐘。 ④離心10秒被添加的樣品緩沖液中,在8%的聚丙烯酰胺凝膠上進行電泳。 ⑤電泳完成后,用溴化乙錠染色,然后將其暴露于X-射線膠片放射自顯影。

      HCMV DNA分子的堿基序列還沒有被發(fā)現(xiàn)。雖然它的DNA的限制性內(nèi)切酶片段長度多形性,但其基因??組中的離散性的是不清楚。可確定使用一個單一的引物對,進行PCR擴增,90%的人巨細胞病毒的野生型菌株;而使用不同HCMV序列的兩套以上的引物,可以檢測到幾乎所有的病毒株。因此,在這種情況下,通過PCR用引物位于不同區(qū)域的基因組中的兩個或多于兩個的雙。

      HCMV模板DNA制備過程中,有時會產(chǎn)生一些小的DNA片段,PCR反應(yīng)往往會導(dǎo)致一定程度的底部產(chǎn)品,從而影響測定結(jié)果。在這種情況下可以嵌套PCR法,其基本原理是使目標DNA的擴增是分為兩個步驟:首先,使用一對引物用于擴增靶DNA,包括長的DNA片段,然后取少量使用引物擴增產(chǎn)物的目標DNA只那么第二放大。通過控制每個步驟,擴增循環(huán)數(shù),以防止小的DNA片段所造成的假陽性。此方法也可避免假陰性結(jié)果。

      PCR檢測HCMV標本具有高靈敏度的。相當于幾十個病毒DNA分子或1?5PFU這從HCMV感染的組織培養(yǎng)上清液中的病毒的DNA序列可以被檢測到??梢詸z測到擴增產(chǎn)物的Southern雜交分析的尿液樣本到1pgHCMV DNA序列的水平;利用這個系統(tǒng),僅在4×104個細胞的病毒基因組,可以檢測到與非放射性的寡核苷酸探針,增加了2×103倍相比,斑點雜交。

      PCR技術(shù)檢測HCMV感染的臨床應(yīng)用價值,因為前的臨床癥狀的出現(xiàn)或感染的血清學(xué)證據(jù)的體液中病毒DNA,HCMV感染的早期指標可以用作。 HCMV感染通過胎盤,產(chǎn)道感染傳播,受感染的新生兒死亡率較高,因此利用PCR的早期診斷和及時治療,產(chǎn)前和產(chǎn)后護理也很重要。的關(guān)系,也可以使用這種方法,是否為HCMV與許多嚴重的疾病器官或組織移植供體的識別。此外,PCR檢測的穩(wěn)定性的指標,但也有半定量分析,并因此可以被用來作為一種手段的評價的各種抗病毒療效。

      [治療]
      發(fā)現(xiàn)在懷孕早期原發(fā)性巨細胞病毒感染,盡快盡可能終止妊娠。妊娠后期感染,應(yīng)進一步檢查胎兒畸形,并采取相應(yīng)的治療措施??共《局委煹呐R床癥狀或先天性巨細胞病毒病。如阿糖胞苷,磺胺類配糖體,如干擾素,但效果還有待進一步觀察。的
      治療巨細胞病毒感染,并且可以適用于各種的抗病毒制劑如GCV,抗巨細胞病毒的免疫球蛋白制劑,干擾素和轉(zhuǎn)移因子。但這些藥物不會從根本上解決問題,往往停藥后反彈,這種病毒潛伏的病毒可作為艾滋病的原因之一,與來自不同國家的學(xué)者都致力于控制其感染。美國學(xué)者最近開發(fā)出兩種活疫苗,在第一次測試后相當有效的。一種是由AD169病毒株,另從鎮(zhèn),菌株制成,已經(jīng)清楚地表明抗巨細胞病毒的功效胃腸外給藥后巨細胞病毒抗體增加,從而增強機體免疫功能。

      [預(yù)防]
      巨細胞病毒對人類的巨大危險,所以我們應(yīng)積極預(yù)防其發(fā)生。
      (1)鍛煉身體的健身意識。提高機體的免疫功能和抗病能力,尤其是婦女的生育年齡,以減少巨細胞病毒對胎兒的嚴重危害。
      (2)我們需要保護懷孕或患有慢性消耗性疾病,免疫功能低下的病人,讓他們遠離感染源。
      (3)要注意環(huán)境衛(wèi)生,飲食和健康。
      (4)牛奶中的巨細胞病毒陽性不應(yīng)該進行母乳喂養(yǎng)。
      (5)免疫預(yù)防。尚在研究和探索。

      差別很大的臨床癥狀,年齡,病人的身體狀況,感染途徑變化。
      要繼續(xù)......

      目前還沒有有效的治療巨細胞病毒感染。
      由于先天性巨細胞病毒感染和致癌作用,有學(xué)者認為的疫苗,以阻止CMV感染。由于技術(shù)上的限制,但也不能培養(yǎng),經(jīng)濟實用,你死了高昂的價格,有效的CMV疫苗的應(yīng)用程序被命名為市鎮(zhèn)減毒活疫苗。

      參考文獻:
      你知道潛伏巨細胞病毒感染致畸的罪魁禍首?的
      人類巨細胞病毒(CMV)是一種雙鏈DNA病毒,最大的動物病毒之一。人們只有人類巨細胞病毒感染對象。相比較弱,因為其他病毒,人巨細胞病毒的毒力,一般不侵入人體的器官和組織受到嚴重損傷,但在受精卵細胞相關(guān)基因的病毒基因的整合可能會阻止或影響復(fù)制和

      巨細胞病毒是什么??

      巨細胞病毒是一類比較常見的病毒,會引起眼睛的感染,現(xiàn)在來說巨細胞病毒引起眼睛的感染比較少。
      巨細胞病毒(Cytomegalovirus)是一種皰疹病毒組DNA病毒。亦稱細胞包涵體病毒。

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