?div id="m50uktp" class="box-center"> ；謴?fù)巨噬細胞極化平衡是緩解UC活動期過度炎癥反應(yīng)的有效策略。

香蜂草苷（didymin）作為枳實中提取的天然產(chǎn)物，可通過抑制NF-kB信號通路的活化從而緩解LPS誘導的炎癥反應(yīng)，減少前炎因子TNF-α和IL-6等的表達，被證實具有抗炎、抗腫瘤和抗氧化等多種生物活性。

科學問題

1）Didymin與巨噬細胞極化之間是否有聯(lián)系？

2）Didymin是否通過調(diào)節(jié)巨噬細胞極化來行使抗炎功能？

3）其發(fā)揮功能的分子機制是怎樣的？

實驗思路

1. 小分子化合物藥效評價：證明 Didymin 能明顯減輕急性、慢性潰瘍性結(jié)腸炎小鼠癥狀。

（1）DSS構(gòu)建UC小鼠模型，模型關(guān)鍵指標測定、評價，確定成功造模。

（ 2 ）組別設(shè)置、給藥

（ 3 ）藥效學評價

（ 4 ）藥物安全性評價

2. 小分子化合物調(diào)節(jié)巨噬細胞分化失衡的機制研究：證明 Didymin 能 UC 小鼠巨噬細胞 M1/M2 平衡。

（ 1 ） Didymin 對 UC 小鼠 M1/M2 失衡的逆轉(zhuǎn)。

①流式細胞術(shù)

②免疫熒光法

③RT-qPCR

（ 2 ） Didymin 參與 M1 → M2 極化的轉(zhuǎn)變，非 CD8+ 、 CD4+ T 細胞， CD19+ B 及 Th17 細胞。

① 流式細胞分析以排除CD8+、CD4+ T、CD19+ B細胞的影響；

②RT-qPCR分析Th17-associated transcription factor Rorc 和 Th17-associated factor Il17a 表達以排除Th17細胞產(chǎn)生的影響；

③體外巨噬細胞極化模型（macrophage polarization model in vitro）建立，在原代細胞上探索Didymin對巨噬細胞分化影響。

（3）Didymin 靶向 Hadhb 介導的 FAO 途徑調(diào)控 M1 → M2 分化，而非 PI3K/AKT, MAPK 、 NF-κB 信號通路和糖酵解（ glycolysis ）途徑。

① 給予信號通路抑制劑處理

②細胞代謝水平探究：前期文獻調(diào)研，獲得Warburg aerobic glycolysis參與M1極化→glycolysis 指標測定。

③繼續(xù)文獻調(diào)研，獲得FAO 和 OXPHOS增加，促使M2表型產(chǎn)生→FAO測定→篩選到介導FAO的潛在靶標—Hadhb→AAV-Hadhb shRNA干預(yù)， 細胞模型 基因干擾、 動物模型 基因干擾