中藥復(fù)方研究的虛擬空間

中藥復(fù)方研究的虛擬空間

中藥復(fù)方是一復(fù)雜的分子體系，在制劑過(guò)程中藥物之間的不同組分也隨著復(fù)雜的物理和化學(xué)變化，可能形成各種復(fù)合物，從而導(dǎo)致中藥及復(fù)方具有多靶酶、多靶點(diǎn)、多環(huán)節(jié)作用的特點(diǎn)。隨著信息時(shí)代的到來(lái)，計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)在藥物設(shè)計(jì)研究中得到廣泛的應(yīng)用，因此不妨將計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)移植于中藥復(fù)方的研究領(lǐng)域，將中藥配伍規(guī)律和作用機(jī)制的研究載入一個(gè)虛擬的世界，可能為探討中藥防治疾病的現(xiàn)代科學(xué)依據(jù)拓展一個(gè)嶄新的空間。

為藥物設(shè)計(jì)開(kāi)辟虛擬空間

計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)依據(jù)對(duì)分子理化性質(zhì)如分子極性、所帶電荷、水溶性和分配系數(shù)等參數(shù)的計(jì)算分析，可以在計(jì)算機(jī)上方便快捷地建造、分析和修改分子結(jié)構(gòu)并利用三維技術(shù)實(shí)時(shí)顯示其立體結(jié)構(gòu)，計(jì)算分子能量和立體化學(xué)性質(zhì)及物理化學(xué)性質(zhì)，推算出各種低能構(gòu)象，進(jìn)行構(gòu)象分析并與酶模型相結(jié)合，對(duì)藥物分子進(jìn)行定量設(shè)計(jì)，并利用系統(tǒng)軟件對(duì)候選物結(jié)構(gòu)進(jìn)行優(yōu)化，由此推斷其活性構(gòu)象，設(shè)計(jì)新的藥物分子。計(jì)算機(jī)系統(tǒng)根據(jù)軟藥原理對(duì)先導(dǎo)化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造，獲得候選化合物，通過(guò)系統(tǒng)軟件對(duì)分子的理化參數(shù)進(jìn)行分析，確立篩選依據(jù)，獲得安全有效的藥物分子。

有望闡明中藥復(fù)方作用機(jī)制

中藥復(fù)方是由多味中藥配伍在一起，共同起到各單味藥所不能起到的作用。中藥復(fù)方配伍的化學(xué)成分不是各單味藥化學(xué)成分的簡(jiǎn)單相加，其療效也不是各單味藥的簡(jiǎn)單疊加，復(fù)方通過(guò)藥物成分間發(fā)生協(xié)同、制約或改性等作用來(lái)達(dá)到減毒增效的目的。闡明復(fù)方配伍的化學(xué)物質(zhì)成分以及多靶點(diǎn)效應(yīng)機(jī)制，是突破中藥研發(fā)現(xiàn)狀的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一，也是解決中藥與國(guó)際醫(yī)藥發(fā)展趨勢(shì)接軌問(wèn)題的必經(jīng)之路。隨著x射線衍射以及核磁共振等技術(shù)的發(fā)展，越來(lái)越多的生物大分子的三維結(jié)構(gòu)被測(cè)定出來(lái)，使基于受體結(jié)構(gòu)的計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)具現(xiàn)實(shí)意義，分子對(duì)接方法可謂其中的重中之重。分子對(duì)接法是基于受體大分子三維結(jié)構(gòu)來(lái)尋找先導(dǎo)化合物的重要方法，就是兩個(gè)或多個(gè)分子之間通過(guò)幾何匹配和能量匹配而相互識(shí)別的過(guò)程，也是計(jì)算機(jī)輔助藥物分子設(shè)計(jì)中最為重要的方法之一，為中藥研究提供了新思路和新方法。

在機(jī)體內(nèi)藥物分子與受體充分接近，在必要的部位相互契合、相互作用后，可通過(guò)適當(dāng)?shù)臉?gòu)象調(diào)整，得到一個(gè)穩(wěn)定的復(fù)合物構(gòu)象，這是藥物分子產(chǎn)生藥效反應(yīng)的重要過(guò)程。生物大分子和藥物小分子的各種表面性質(zhì)，可用分子對(duì)接法來(lái)計(jì)算。對(duì)接計(jì)算時(shí)，將配體分子放到受體活性位點(diǎn)，然后按照幾何互補(bǔ)、能量互補(bǔ)以及化學(xué)環(huán)境互補(bǔ)的原則來(lái)實(shí)時(shí)評(píng)價(jià)配體與受體相互作用的好壞，并找到兩個(gè)分子之間最佳的結(jié)合模式。通過(guò)分子對(duì)接法確定復(fù)合物中兩個(gè)分子正確的相對(duì)位置和取向，研究?jī)蓚€(gè)分子的構(gòu)象特別是底物構(gòu)象在形成復(fù)合物過(guò)程中的變化，是確定藥物作用機(jī)制、設(shè)計(jì)新藥的基礎(chǔ)。由于中藥復(fù)方的有效成分多為小分子物質(zhì)，因此借助計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)的分子對(duì)接法可闡明中藥復(fù)方作用機(jī)制，這可能是連接傳統(tǒng)中藥學(xué)與現(xiàn)代科學(xué)的紐帶。

在中藥新藥研發(fā)中的意義

用計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)的分子對(duì)接法研究中藥化學(xué)成分與靶酶的相互作用，分析中藥多靶點(diǎn)機(jī)制更直觀、明確，可使復(fù)方從單味藥組方進(jìn)入活性物質(zhì)配伍研究的新層面。雖然這只是計(jì)算機(jī)模擬技術(shù)，但卻具有很強(qiáng)的理論性和科學(xué)性。利用計(jì)算機(jī)模擬方法探討中藥的作用機(jī)制，不僅可以彌補(bǔ)動(dòng)物藥理實(shí)驗(yàn)方法的缺陷，也減少了人力和物力的投入，更重要的是在中藥新藥研究領(lǐng)域，建立了全新的理念和先進(jìn)的研究手段，有望使中藥現(xiàn)代化真正跨入一個(gè)寬廣的良性發(fā)展的軌道。

中藥藥理的研究?jī)?nèi)容

中藥藥理學(xué)研究主要包括主要藥效學(xué)研究和一般藥理學(xué)研究。 中藥新藥主要藥效學(xué)研究應(yīng)遵循中醫(yī)藥理論，運(yùn)用現(xiàn)代科學(xué)方法，制定具有中醫(yī)藥特色的試驗(yàn)計(jì)劃，根據(jù)新藥的功能主治，選用或建立與中醫(yī)“證”或“病”相符或相近的動(dòng)物模型和試驗(yàn)方法，對(duì)新藥的有效性做出科學(xué)的評(píng)價(jià)。主要藥效學(xué)研究包括下面幾個(gè)方面。
中藥藥理學(xué) （1）主要藥效學(xué)研究設(shè)計(jì)依據(jù)和要求
中藥具有成分復(fù)雜，藥理作用廣泛的特點(diǎn)，在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)應(yīng)根據(jù)新藥主治（病或證），參考其功能，選擇能夠反映其療效本質(zhì)的主要藥效進(jìn)行重點(diǎn)研究；間接證實(shí)其藥效的輔助試驗(yàn)可酌情選作，要分清主次。如主治風(fēng)濕痹證（類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎）的新藥，應(yīng)以免疫性關(guān)節(jié)腫、細(xì)胞免疫和鎮(zhèn)痛作用為主要試驗(yàn)，特別是免疫性關(guān)節(jié)炎為重中之重。如新藥對(duì)二型膠原(常用不完全性佐劑代替)性關(guān)節(jié)炎的繼發(fā)腫脹沒(méi)有抑制作用，其他試驗(yàn)結(jié)果再明顯也是沒(méi)有用的。此外、主要藥效試驗(yàn)應(yīng)從多方面進(jìn)行論證，至少應(yīng)選用兩種或兩種以上模型加以證實(shí)，且以整體試驗(yàn)為主。要求實(shí)驗(yàn)方法可靠、技術(shù)先進(jìn)、操作規(guī)范、結(jié)果可信。
（2）選擇實(shí)驗(yàn)方法
藥理實(shí)驗(yàn)方法主要分為在體試驗(yàn)和體外試驗(yàn)兩大類。兩者互相補(bǔ)充，可以從不同角度，不同深度研究中藥新藥藥效。兩種方法各有所長(zhǎng)。
體外試驗(yàn)包括離體器官、組織、細(xì)胞、酶、受體、細(xì)胞內(nèi)信息及基因等實(shí)驗(yàn)。其可以按要求嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件，具有重復(fù)性好，用藥量少、節(jié)省動(dòng)物等優(yōu)點(diǎn)，且可排出體內(nèi)神經(jīng)體液等各種復(fù)雜因素的干擾，可進(jìn)行直接觀察，獲得準(zhǔn)確結(jié)果。所得結(jié)果較易分析。在1、5、7類中藥新藥的研制中，因含雜質(zhì)較少，可以配合一定的體外試驗(yàn)。但在進(jìn)行體外試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)充分估計(jì)到中藥粗制劑中雜質(zhì)和理化性質(zhì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，如藥液的酸堿度、各種電解質(zhì)和鞣質(zhì)等的干擾，所得結(jié)果常常不能反映臨床療效。例如在試管內(nèi)抗菌作用較強(qiáng)的中藥，常常在體內(nèi)不一定表現(xiàn)出強(qiáng)大的抗菌作用；某些中藥含有大量鉀離子、鈣離子，其粗制劑在麥?zhǔn)显〔壑斜憩F(xiàn)出對(duì)離體平滑肌、心肌有明顯的藥理活性，但口服后不一定產(chǎn)生相應(yīng)作用。
體內(nèi)試驗(yàn)也稱在體試驗(yàn)，其比較接近于臨床狀態(tài)，適于綜合性研究，所得結(jié)果較為可信，可以直接反映臨床療效。中醫(yī)藥學(xué)以整體思想體系為基礎(chǔ)，重視宏觀調(diào)控。中藥具有多成分多靶點(diǎn)的特點(diǎn)，整體試驗(yàn)?zāi)茌^全面的反映藥物的作用。特別是中藥新藥2類藥材、6類復(fù)方制劑大多屬粗制劑，更應(yīng)強(qiáng)調(diào)以體內(nèi)試驗(yàn)為主。要證實(shí)新藥具有某種藥理作用必須通過(guò)體內(nèi)試驗(yàn)證明有效。體外試驗(yàn)僅起輔助作用。具體試驗(yàn)方法請(qǐng)參考相關(guān)方法學(xué)書(shū)籍。近年來(lái)開(kāi)展的中藥血清藥理試驗(yàn)方法是一種新的體外試驗(yàn)方法，其將受試藥物經(jīng)口給與動(dòng)物后，取其血清作為藥源加入體外反應(yīng)系統(tǒng)中研究其藥理作用。此種方法盡管目前仍存在很多問(wèn)題，尚待解決，但對(duì)中藥粗制劑的體外試驗(yàn)具有重要價(jià)值。嚴(yán)格說(shuō)來(lái)，采用血清藥理試驗(yàn)方法，給藥方案需要進(jìn)行大量的預(yù)試驗(yàn)，才能找出最佳給藥方案。給藥方案包括給藥劑量，每天給藥次數(shù)，連續(xù)給藥時(shí)間，給藥后采血時(shí)間以及血清中所含相關(guān)活性物質(zhì)的滅活條件。李氏根據(jù)近些年來(lái)所掌握中藥有效成分大量藥代動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)，提出通法如下：將受試藥物每天給藥兩次，連續(xù)給藥3天，末次給藥后1小時(shí)采血；給藥劑量為臨床等效劑量。按此通法方案進(jìn)行，理論上中藥或其復(fù)方所含80%以上的成分于給藥后1小時(shí)處于達(dá)到或接近峰值。血清中活性物質(zhì)對(duì)所含藥物作用有干擾，如何排出干擾是一項(xiàng)十分復(fù)雜的問(wèn)題。一般排出酶活性及補(bǔ)體干擾，常采用56℃條件下放置30min，這是最簡(jiǎn)便的方法。但不能列為通法。因?yàn)楦蓴_因素不同，排出干擾的條件差異會(huì)很大。
（3）選擇動(dòng)物模型和指標(biāo)
研究藥物的作用僅僅在正常動(dòng)物身上進(jìn)行還不夠，還需要制備各種動(dòng)物病理模型，因?yàn)椴±砟Ｐ湍M疾病狀態(tài)，比正常機(jī)體更接近病人的機(jī)能狀態(tài)，有些藥理作用在正常動(dòng)物身上觀察不到，如抗胃粘膜損傷藥，抗菌、抗病毒藥，抗惡性腫瘤藥，解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎藥等均必須在相應(yīng)的病理模型上才能觀察到相應(yīng)的作用。因此，病理模型在新藥研究中占有重要地位。病理模型的選擇應(yīng)首選符合中醫(yī)臨床證或病的動(dòng)物模型。如研究補(bǔ)虛藥對(duì)免疫功能的影響，應(yīng)首選免疫功能低下的虛癥模型，按照中醫(yī)辯證施治原則“虛則補(bǔ)之”，凡是正氣虛衰病人，才有免疫功能低下表現(xiàn)，用補(bǔ)益藥可使其免疫功能增強(qiáng)。進(jìn)一步根據(jù)藥物類型，選擇相應(yīng)病理模型。如治療脾虛癥的新藥，宜選用脾虛癥的動(dòng)物模型，治療血虛證的新藥，應(yīng)選擇血虛證的動(dòng)物模型。但目前制造完全模擬中醫(yī)病或證的病理模型尚有困難?，F(xiàn)有模型與臨床證候相距甚遠(yuǎn)，故研究中藥新藥也常常采用一般化學(xué)藥物所常用的病理模型，如高血壓、糖尿病、中風(fēng)、冠心病、肝炎、肝硬化等病理模型。觀察指標(biāo)應(yīng)選用特異性強(qiáng)、敏感性高、重現(xiàn)性好、客觀、定量或半定量的指標(biāo)進(jìn)行觀察。如在治療冠心病心絞痛的中藥新藥進(jìn)行療效研究時(shí)，制備心肌缺血模型時(shí)，可供選擇的方法很多，其中以阻斷小型豬或犬冠狀動(dòng)脈所致的局限性心肌缺血模型與臨床更為相似，較為合理，且可定位、定量、定性、較準(zhǔn)確地評(píng)價(jià)藥效，可作為首選的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?br>（4）對(duì)不同類別新藥的藥效學(xué)研究要求 藥理實(shí)驗(yàn)中藥新藥第1-5類、6類及7類的主要藥效研究，應(yīng)從多方面證實(shí)其主要藥效，以及較重要的輔助治療作用。其中1類和5類和7類新藥，含雜質(zhì)較少，應(yīng)在更高的技術(shù)水平上，通過(guò)體內(nèi)、體外多種試驗(yàn)方法論證其藥效。6傳統(tǒng)中藥復(fù)方及11類已有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的中成藥制劑，可免做主要藥效學(xué)試驗(yàn)。
（5）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
a) 應(yīng)根據(jù)各種試驗(yàn)的具體要求，合理選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，對(duì)其種屬、品系、性別、年齡、體重、健康狀態(tài)、飼養(yǎng)條件及動(dòng)物來(lái)源，合格證號(hào)，均應(yīng)按試驗(yàn)要求嚴(yán)格選擇，并詳細(xì)記錄。
b) 選用與人體的結(jié)構(gòu)、機(jī)能、代謝、疾病特點(diǎn)相近似的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。如研究催吐藥宜選用鴿子、犬、貓等動(dòng)物，它們對(duì)嘔吐反應(yīng)敏感；不宜選用家兔和鼠類，因后者無(wú)嘔吐中樞或無(wú)嘔吐反應(yīng)；再如進(jìn)行降壓藥研究時(shí)，宜選用犬、貓和大鼠，它們對(duì)降壓藥反應(yīng)較敏感，與人類接近；不宜選用家兔，因家兔血壓不穩(wěn)定，對(duì)有些藥物不敏感。
c) 選用遺傳背景明確，指標(biāo)穩(wěn)定且顯著，解剖、生理特點(diǎn)符合實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊蟮膶?shí)驗(yàn)動(dòng)物。
d) 宜選用2—3種動(dòng)物進(jìn)行藥效試驗(yàn)，動(dòng)物模型與臨床有區(qū)別，特別是中醫(yī)證的模型與臨床差異更大，因此“動(dòng)物點(diǎn)頭”臨床不一定療效就好。人與動(dòng)物既有共性又有差異。如在不同種屬動(dòng)物身上均作出與臨床療效相似的結(jié)果，可信度就大。故在進(jìn)行藥效研究時(shí)不要只選用一種動(dòng)物，用2—3種動(dòng)物的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可信度更大。
e) 此外，還應(yīng)考慮實(shí)驗(yàn)動(dòng)物品種、品系、質(zhì)量，受試動(dòng)物是否易得，是否經(jīng)濟(jì)、是否容易飼養(yǎng)和管理。
（6）受試藥物對(duì)受試藥物的要求應(yīng)注意下列問(wèn)題：
a) 受試中藥藥材應(yīng)經(jīng)過(guò)生藥專家鑒定，確定品種、產(chǎn)地、藥用部位和采收季節(jié)。飲片炮制方法要固定。
b) 中藥制劑生產(chǎn)工藝條件要經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的選擇，選用最佳工藝條件，制劑應(yīng)合格，穩(wěn)定性好，質(zhì)量可控，劑型和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)與臨床用藥基本相同。藥效試驗(yàn)可選用不含賦形劑的中藥提取物。
c) 6類中藥復(fù)方制劑處方必須固定，處方組成藥味必須符合法定標(biāo)準(zhǔn)，且組方符合中醫(yī)藥理論，對(duì)中西藥合方或方中含天然藥材者，應(yīng)進(jìn)行組方分析。
d) 此外，中藥新藥制劑應(yīng)符合衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，制劑來(lái)源、批號(hào)最好一致。
（7）對(duì)照組
a) 正常對(duì)照組，又稱“空白對(duì)照組”或“陰性對(duì)照組”，指在正常條件下進(jìn)行觀察和對(duì)照。正常對(duì)照組必須與給藥組進(jìn)行相同的處理，如常用溶劑灌胃，用生理鹽水注射。正常對(duì)照組設(shè)置目的，可用來(lái)觀察造模是否成功；在藥物作用下觀察給藥組指標(biāo)是否恢復(fù)正常。
b) 陽(yáng)性藥對(duì)照組，陽(yáng)性藥對(duì)照組可選用藥典收載的，正式批準(zhǔn)生產(chǎn)的中藥或西藥，如.是中藥則需注明批準(zhǔn)文號(hào)，功能主治。西藥可按試驗(yàn)的目的要求選用經(jīng)典的，公認(rèn)的藥物，如抗炎試驗(yàn)常選用皮質(zhì)激素類制劑或解熱鎮(zhèn)痛藥；鎮(zhèn)痛則選用顱痛定、阿斯匹林、嗎啡等。中藥應(yīng)選用與受試新藥主治、功效、給藥途徑基本一致的，每個(gè)實(shí)驗(yàn)可選用1-2個(gè)陽(yáng)性對(duì)照藥；每種陽(yáng)性藥可選用1-2個(gè)不同劑量。陽(yáng)性對(duì)照藥設(shè)置的目的，一是比較新藥的作用特點(diǎn)，作用強(qiáng)度，起效快慢；二是驗(yàn)證所用方法和指標(biāo)的可靠性，準(zhǔn)確性，為此陽(yáng)性藥必須作出陽(yáng)性結(jié)果，否則有理由懷疑所選方法和指標(biāo)的可信度。
c) 模型對(duì)照組 除不用藥以外，其他處理與給藥組相同。如前所述，為證實(shí)藥物的作用常需建立病和證的動(dòng)物模型；如，欲觀察清熱藥、解表藥的解熱作用，必須制備大鼠或家兔的發(fā)熱模型。欲觀察活血藥的作用必須制備各種血瘀證的模型。在相應(yīng)的動(dòng)物模型身上觀察藥物作用，才能真正反映臨床療效。
如上所述，通常一個(gè)藥效實(shí)驗(yàn)需設(shè)5-6個(gè)實(shí)驗(yàn)組，每組通常含10-14只動(dòng)物（指大鼠或小鼠）。在進(jìn)行分組時(shí)必須注意動(dòng)物體重、性別的隨機(jī)性。在需要分批進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)要注意各組動(dòng)物之間的平行操作。主要藥效實(shí)驗(yàn)常常需要重復(fù)。如抗腫瘤藥物，其祛邪作用要求重復(fù)三批，降血糖實(shí)驗(yàn)也要求重復(fù)。主要藥效重復(fù)性差，則該藥開(kāi)發(fā)沒(méi)有前途。
（8） 給藥劑量和給藥途徑
中藥藥理學(xué) 因?yàn)橹兴幮滤帍?fù)方制劑有效成份含量低，口服生物利用度低，不易作出量效關(guān)系。根據(jù)技術(shù)要求各類新藥主要藥效試驗(yàn)至少應(yīng)設(shè)三個(gè)劑量組。犬與猴等大動(dòng)物可設(shè)2個(gè)劑量組，但每組動(dòng)物數(shù)不少于6只，純度比較高的1、5、7類中藥新藥應(yīng)盡量作出量—效和時(shí)—效關(guān)系。
a) 劑量設(shè)計(jì)：合理的劑量設(shè)計(jì)在藥效設(shè)計(jì)中占有重要的地位。在材料合格，模型和方法可靠的前提下，試驗(yàn)結(jié)果好壞在很大程度上取決于劑量設(shè)計(jì)是否合理。
b) 給藥時(shí)間：主要參考臨床用藥療程，鎮(zhèn)痛藥，退熱藥，治療感冒的藥物，有的療程短，不超過(guò)3～5天，給藥時(shí)間宜短，最好一次給藥即見(jiàn)療效。補(bǔ)益藥，防治老年病的藥物，給藥時(shí)間宜長(zhǎng)。因中藥作用緩慢、溫和，常在造模同時(shí)開(kāi)始用藥。如用D-半乳糖皮下注射制備模擬衰老的大鼠或小鼠模型，造模和給藥常在42天-50天左右。
（9） 給藥容量和給藥方式
a) 給藥容量：應(yīng)適宜，容量過(guò)小容易產(chǎn)生誤差；過(guò)大，動(dòng)物難于耐受。一般最大給藥容量參考如下：小鼠禁食不禁水12-16h，一次灌胃不超過(guò)0.4ml/10g體重；皮下(Sc)、腹腔(ip)和靜脈注射(iv)不超過(guò)0.5ml/只。大鼠禁食不禁水12-16h，一次用量一般為1-2ml/100g體重，最大不宜超過(guò)5ml/只；腹腔注射1.5ml/只；皮下和靜脈注射不超過(guò)1ml/只；肌內(nèi)注射0.4ml/只。兔和貓最大用量：灌胃20ml/次，皮下、肌內(nèi)注射2ml/次，腹腔5ml/次，靜脈10ml/次。
b) 給藥方式：分預(yù)防給藥、治療給藥，或防治結(jié)合性給藥。預(yù)防給藥常先給藥幾天，使藥物在體內(nèi)達(dá)到有效濃度后再進(jìn)行試驗(yàn)，觀察藥物的預(yù)防作用；治療給藥先制作動(dòng)物模型，然后給藥，觀察藥物的治療作用，這種方式更符合臨床。但對(duì)起效緩慢、作用溫和、持續(xù)時(shí)間短暫的中藥新藥，治療給藥，常難以獲得預(yù)期結(jié)果，只能采用預(yù)防給藥的方法。有些實(shí)驗(yàn)也常采用預(yù)防和治療相結(jié)合的方式，如體內(nèi)抗感染實(shí)驗(yàn)，即先給藥幾日后，接種感染原后，再繼續(xù)給藥幾日，觀察中藥新藥的抗感染作用。
（10） 實(shí)驗(yàn)結(jié)果的表達(dá)和統(tǒng)計(jì)分析
無(wú)論定量或定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果，均要求列表表達(dá)。此與研究論文有別，論文可以用圖表達(dá)，不用表。但新藥藥效研究資料必須有表，用具體統(tǒng)計(jì)所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)列表說(shuō)明，如認(rèn)為數(shù)據(jù)表不足以表達(dá)清楚，可以附加圖進(jìn)一步說(shuō)明。常用統(tǒng)計(jì)方法如下：
a) 定量資料：又稱量反應(yīng)資料，這種反應(yīng)可用數(shù)量差異表示，如血壓、尿量、體溫、血液生化測(cè)定值等。組間比較多采用t檢驗(yàn)方法統(tǒng)計(jì)分析。
b) 定性資料：又稱質(zhì)反應(yīng)資料，機(jī)體對(duì)藥物的反應(yīng)只有“有” 或“無(wú)” 兩種，如死或不死，驚厥出現(xiàn)或不出現(xiàn)等，試驗(yàn)結(jié)果常用百分率表示。統(tǒng)計(jì)分析可采用“卡方”檢驗(yàn)。
c) 分級(jí)資料：也稱為有序的計(jì)量資料，例如，藥效的持續(xù)時(shí)間，病理程度按等級(jí)劃分的資料，臨床療效按等級(jí)分組資料(痊愈、顯效、好轉(zhuǎn)、無(wú)效等)這些資料不宜用上述方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。常采用秩和法及Ridit法等非參數(shù)統(tǒng)計(jì)分析方法。
統(tǒng)計(jì)結(jié)果列表說(shuō)明。數(shù)據(jù)表內(nèi)容通常包含實(shí)驗(yàn)分組、給藥劑量、每組動(dòng)物數(shù)、指標(biāo)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯著性標(biāo)示。最后要求試驗(yàn)負(fù)責(zé)人熟悉研究?jī)?nèi)容和結(jié)果，并按形式審查內(nèi)容整理資料，在書(shū)寫(xiě)資料中注意避免文字和數(shù)據(jù)錯(cuò)誤。 藥理學(xué)研究分為三類，即主要藥效學(xué)（Primary Pharmacodynamic）、次要藥效學(xué)（Secondary Pharmacodynamic）和安全性藥理學(xué)（Safety Pharmacology）。另外根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求可能需要對(duì)安全性藥理學(xué)進(jìn)行追加和/或補(bǔ)充的研究（Follow-up and Supplemental Safety Pharmacology Studies）。一般藥理學(xué)（general pharmacology）研究是指主要藥效學(xué)作用以為廣泛的藥理學(xué)研究，包括次要藥效學(xué)和安全性藥理學(xué)的研究范疇，研究新藥的主要藥效以外的對(duì)某些重要器官系統(tǒng)的藥理作用。其目的是通過(guò)一般藥理學(xué)研究，可以確定受試物非期望出現(xiàn)藥物效應(yīng)的情況，它可能關(guān)系到人的安全性；評(píng)價(jià)受試物在毒理學(xué)和/或臨床研究中觀察到的藥物不良反應(yīng)和/或病理生理作用；研究所觀察到的和/或推測(cè)的藥物不良反應(yīng)機(jī)制。
通過(guò)一般藥理學(xué)研究，可為長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì)提供參考，為臨床研究和安全用藥提供信息，為開(kāi)發(fā)新的適應(yīng)癥提供信息。僅1-5類、6和7類中藥新藥以及含有毒藥材的中藥復(fù)方需要進(jìn)行此方面的研究；其他類免報(bào)。一般藥理研究?jī)?nèi)容主要包括中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)。
（1）一般藥理學(xué)研究的基本原則
a) 試驗(yàn)管理：一般藥理學(xué)研究中的安全性藥理學(xué)一般應(yīng)遵照《藥物非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范》（GLP）執(zhí)行。
b) 試驗(yàn)設(shè)計(jì)：試驗(yàn)設(shè)計(jì)應(yīng)符合隨機(jī)、對(duì)照、重復(fù)的基本原則。
（2）一般藥理學(xué)研究的基本內(nèi)容
a) 受試物：一般藥理學(xué)研究的受試物應(yīng)能充分代表臨床試驗(yàn)受試物和上市藥品，因此受試物應(yīng)采用制備工藝穩(wěn)定、符合臨床試用質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的樣品，一般用中試樣品，并注明受試物的名稱、來(lái)源、批號(hào)、含量（或規(guī)格）、保存條件及配制方法等。如不采用中試樣品，應(yīng)有充分的理由。如果由于給藥容積或給藥方法限制，可采用原料藥（提取物）進(jìn)行試驗(yàn)。試驗(yàn)中所用溶媒或賦形劑應(yīng)標(biāo)明批號(hào)、規(guī)格、生產(chǎn)廠家。
b) 試驗(yàn)系統(tǒng)：為了獲得科學(xué)有效的一般藥理學(xué)信息，應(yīng)選擇最適合的動(dòng)物或其他試驗(yàn)系統(tǒng)。選擇試驗(yàn)系統(tǒng)的因素包括試驗(yàn)系統(tǒng)的藥效學(xué)反應(yīng)，受試物的藥代動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)，試驗(yàn)動(dòng)物的種屬、品系、性別和年齡，試驗(yàn)系統(tǒng)的敏感度、靈敏度和重復(fù)性，以及受試物的背景資料。應(yīng)說(shuō)明選擇特殊動(dòng)物/模型和試驗(yàn)系統(tǒng)的原因。
① 常用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物常用小鼠、大鼠、犬等。常用清醒動(dòng)物進(jìn)行試驗(yàn)。小鼠、大鼠應(yīng)符合國(guó)家實(shí)驗(yàn)動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)Ⅱ級(jí)及其以上等級(jí)要求，犬應(yīng)符合國(guó)家實(shí)驗(yàn)動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)Ⅰ級(jí)及其以上等級(jí)要求。如果使用麻醉動(dòng)物，應(yīng)注意麻醉藥物和麻醉深度的選擇。
② 常用的離體試驗(yàn)系統(tǒng)：離體系統(tǒng)可用于支持性研究（如，研究受試物的活性特點(diǎn)，研究在體試驗(yàn)觀察到的藥理作用的發(fā)生機(jī)理）。常用離體試驗(yàn)系統(tǒng)主要包括：離體器官和組織、細(xì)胞、亞細(xì)胞器、受體、離子通道和酶等。
c) 樣本數(shù)和對(duì)照：為了對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行科學(xué)和有意義的解釋，一般藥理學(xué)試驗(yàn)動(dòng)物數(shù)和離體樣本數(shù)應(yīng)十分充分。每組小鼠和大鼠數(shù)一般不少于10只，犬一般不少于6只。試驗(yàn)設(shè)計(jì)應(yīng)考慮采用合理的空白、陰性對(duì)照，必要時(shí)還應(yīng)設(shè)陽(yáng)性對(duì)照。
d) 給藥途徑：給藥途徑與臨床擬用途徑一致。如采用不同的給藥途徑，應(yīng)說(shuō)明理由。
e) 劑量或濃度
藥物不良反應(yīng) 在體研究：在體的一般藥理學(xué)研究應(yīng)盡量確定不良作用的量效關(guān)系和時(shí)效關(guān)系（如：不良反應(yīng)的發(fā)作和反應(yīng)時(shí)間），至少應(yīng)設(shè)三個(gè)劑量組。低劑量組應(yīng)相當(dāng)于主要藥效學(xué)的有效劑量，高劑量應(yīng)高于主要藥效學(xué)的高劑量，以不產(chǎn)生嚴(yán)重毒性反應(yīng)為限。離體研究：離體研究應(yīng)盡量確定受試物的量效關(guān)系。受試物的上限濃度盡可能不影響試驗(yàn)系統(tǒng)的理化性質(zhì)和其他影響評(píng)價(jià)的特殊因素。
f) 給藥次數(shù)和測(cè)量時(shí)間：一般應(yīng)采用單次給藥。如果受試藥物的藥理作用僅在治療一段時(shí)間后才出現(xiàn)，或者多次給藥非臨床研究和臨床試驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)安全性問(wèn)題時(shí)，應(yīng)根據(jù)這些作用合理設(shè)計(jì)一般藥理學(xué)研究的給藥次數(shù)。應(yīng)根據(jù)受試物的藥效學(xué)和藥代動(dòng)力學(xué)特性，選擇檢測(cè)一般藥理學(xué)參數(shù)的時(shí)間點(diǎn)。
g) 觀察指標(biāo)：根據(jù)組織系統(tǒng)與生命功能的重要性，可選用相關(guān)組織系統(tǒng)進(jìn)行一般藥理學(xué)研究。一般藥理學(xué)研究的目的在于研究受試物對(duì)生命功能的影響。心血管系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)是維持生命的重要系統(tǒng)，臨床前一般藥理學(xué)試驗(yàn)必須完成對(duì)這些系統(tǒng)的一般觀察。當(dāng)其他非臨床試驗(yàn)及臨床試驗(yàn)中觀察到或推測(cè)到對(duì)人和動(dòng)物可能產(chǎn)生某些不良反應(yīng)時(shí)，應(yīng)進(jìn)一步追加對(duì)前面重要系統(tǒng)的深入研究或?qū)ζ渌M織系統(tǒng)的研究，并在申請(qǐng)生產(chǎn)許可之前完成。
h) 結(jié)果及分析：應(yīng)根據(jù)詳細(xì)的試驗(yàn)記錄，對(duì)結(jié)果進(jìn)行定量和定性統(tǒng)計(jì)分析，說(shuō)明具體的統(tǒng)計(jì)方法和選擇理由，同時(shí)應(yīng)注意對(duì)個(gè)體試驗(yàn)結(jié)果的評(píng)價(jià)。根據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果，分析受試物的一般藥理作用，結(jié)合其他的安全性試驗(yàn)、有效性試驗(yàn)及質(zhì)量可控性試驗(yàn)結(jié)果，權(quán)衡利弊，分析受試物的開(kāi)發(fā)前景。

應(yīng)加強(qiáng)中藥新劑型基礎(chǔ)研究

中藥制劑.100md.com/" target=_blank>中藥制劑是中醫(yī)藥發(fā)揮重要作用以及將中醫(yī)藥推廣至全世界的直接載體。中藥新劑型有軟膠囊、滴丸、緩控釋制劑、巴布劑與經(jīng)皮吸收貼劑、靶向給藥制劑等。中國(guó)藥科大學(xué)藥學(xué)院院長(zhǎng)平其能教授日前在杭州召開(kāi)的“2006中國(guó)新醫(yī)藥博士論壇”上指出，中藥新劑型研究過(guò)程中。應(yīng)加強(qiáng)其基礎(chǔ)研究，發(fā)展符合中藥用藥特點(diǎn)，符合臨床治療特點(diǎn)的劑型，而不是盲目求新。

平其能認(rèn)為，現(xiàn)代劑型的特點(diǎn)應(yīng)符合安全、有效、穩(wěn)定、方便應(yīng)用的基本要求，而中藥新劑型又必須符合中藥用藥的特點(diǎn)，符合臨床治療的特點(diǎn)。合理地從藥材中提取適合現(xiàn)代劑型加工的有效組分和必要的輔助組分。減少無(wú)效和有害組分，根據(jù)得到的提取物的量及有效性選擇適宜的劑型。如研究發(fā)現(xiàn)，由大黃、黃連.100md.com/" target=_blank>黃連、黃芩.100md.com/" target=_blank>黃芩組成的古方“瀉心湯.100md.com" target="_blank" class="bl">瀉心湯”三味共煎，黃連中的小檗堿與大黃中的鞣質(zhì)類結(jié)合成沉淀物，在胃腸道中分解而發(fā)生功效；但如果制成注射劑，用水煎醇沉法，種沉淀物則被除去而減弱了其功效。平其能建議建立優(yōu)良的中藥“有效性”試驗(yàn)平臺(tái)，完善與之相關(guān)的提取工藝的合理性問(wèn)題。

平其能希望借鑒日本漢方顆粒劑研發(fā)的經(jīng)驗(yàn)，了解其物質(zhì)基礎(chǔ)和藥效學(xué)基礎(chǔ)，進(jìn)行合理的組合或裁減。如日本研究含丹參.100md.com/" target=_blank>丹參的心血管類方劑時(shí)，同時(shí)提取水溶性及脂溶性成分，保證其完整的有效作用。

此外，平其能認(rèn)為還須加強(qiáng)中藥制劑的生物藥劑學(xué)及藥代動(dòng)力學(xué)研究，特別要關(guān)注口服中藥制劑的胃腸吸收及代謝研究。平其能指出，一些中藥有效成分或有效部位溶解性差，腸道不穩(wěn)定或迅速代謝，分配系數(shù)不能滿足胃腸粘膜滲透需要，吸收機(jī)理不明確。如對(duì)蟾酥的主要成分華蟾毒精和羥基華蟾毒精的腸內(nèi)代謝研究表明，

華蟾毒精可由人腸道內(nèi)細(xì)菌代謝產(chǎn)生去乙?；A蟾毒精，而羥基華蟾毒精代謝生成去乙酰基羥基華蟾毒精，原藥具有抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)活性，而代謝產(chǎn)物無(wú)活性，此時(shí)則需要考慮其口服劑型及給藥途徑的設(shè)計(jì)。平其能還指出，劑型、工藝和給藥途徑的改變都將影響藥效學(xué)及藥動(dòng)學(xué)的改變。

對(duì)單一組分或有效部位明確的中藥提取物相對(duì)比較容易進(jìn)行以血藥濃度測(cè)定為基礎(chǔ)的生物藥和藥動(dòng)學(xué)研究，但就中藥復(fù)方而言，檢測(cè)成分的生物藥劑學(xué)及代謝動(dòng)力學(xué)的研究不一定能代表整體的體內(nèi)過(guò)程，這也是中藥復(fù)方劑型現(xiàn)代化的難點(diǎn)所在。但隨著現(xiàn)代分析儀器的迅速發(fā)展，平其能相信，中藥復(fù)方的藥動(dòng)學(xué)及藥代動(dòng)力學(xué)研究將曰益深入。

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