白癜風(fēng)噬菌體抗體庫構(gòu)建成功(鄧寧的學(xué)術(shù)簡介)

白癜風(fēng)噬菌體抗體庫構(gòu)建成功

近日，第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院皮膚科劉玲碩士等在完成的一項(xiàng)國家自然科學(xué)基金資助課題中，采用細(xì)胞內(nèi)PCR擴(kuò)增抗體基因的方法，成功構(gòu)建一庫容量為3×106白癜風(fēng)的噬菌體抗體庫。該抗體庫的建立，為進(jìn)一步研究自身抗體在白癜風(fēng)發(fā)生發(fā)展過程中的作用及其治療提供了嶄新的思路。

據(jù)介紹，白癜風(fēng)是一種常見的皮膚色素脫失性疾病。近年來有研究表明，白癜風(fēng)與自身免疫密切相關(guān)，其患者體內(nèi)存在抗黑素細(xì)胞膜自身抗體，導(dǎo)致黑素細(xì)胞破壞，引起自身損傷。然而，對(duì)于“自身抗體在疾病發(fā)生發(fā)展中究竟是始動(dòng)因素還是繼發(fā)反應(yīng)”這一問題一直存在爭議。

為探討自身抗體機(jī)制的新思路，劉玲等研究人員采用細(xì)胞內(nèi)PCR擴(kuò)增的方法，選擇100例（男48例，女52例，平均年齡21歲，平均病程兩個(gè)月）進(jìn)展期白癜風(fēng)患者血樣，通過PCR1反轉(zhuǎn)錄、擴(kuò)增輕鏈和重鏈可變區(qū)基因、Cre重組酶介導(dǎo)、單個(gè)細(xì)胞內(nèi)輕重連接獲取體內(nèi)原始配對(duì)信息，以及經(jīng)振蕩篩選等系列技術(shù)處理后，成功地構(gòu)建出一庫容量為3×106的白癜風(fēng)噬菌體抗體庫。

該抗體庫經(jīng)抗體表達(dá)、特異性檢測及吸附篩選等檢驗(yàn)，結(jié)果顯示：細(xì)胞內(nèi)PCR擴(kuò)增ScFv基因，目的條帶為800bp，與預(yù)期大小相符；取20個(gè)單菌落提取質(zhì)粒進(jìn)行凝膠電泳，19個(gè)可見800bp目的條帶，重組率達(dá)95%。通過4輪“親和吸附-洗脫-擴(kuò)增”篩選，特異性噬菌體抗體回收率增加約67倍，并獲得1株特異性針對(duì)黑素細(xì)胞膜抗原的抗體。提示抗體庫具有重組率高、特異性強(qiáng)、親和力好、抗體基因信息準(zhǔn)確等特點(diǎn)。

研究人員認(rèn)為，細(xì)胞內(nèi)PCR技術(shù)，是一種全新的擴(kuò)增抗體可變區(qū)基因方法，它在同一個(gè)載體上的輕鏈與重鏈的配對(duì)，不是人工隨機(jī)組合，而是在體內(nèi)的原始配對(duì)，從人免疫細(xì)胞中擴(kuò)增體內(nèi)親本配對(duì)的單鏈抗體可變區(qū)基因，克隆到噬菌體載體，同時(shí)利用完整細(xì)胞篩選特異性針對(duì)黑素細(xì)胞膜抗原的自身抗體，從而得到編碼疾病相關(guān)抗體基因的準(zhǔn)確信息。采用該技術(shù)能從分子水平上闡述自身抗體的產(chǎn)生機(jī)制、編碼基因規(guī)律及基因突變特點(diǎn)。

鄧寧的學(xué)術(shù)簡介

研究方向：教學(xué)方面：目前為止招收生物化學(xué)與分子生物學(xué)專業(yè) 免疫化學(xué)與分子免疫學(xué)方向博士和碩士研究生；免疫學(xué)專業(yè) 抗體技術(shù)及應(yīng)用方向碩士研究生。為本科生和研究生開設(shè)了細(xì)胞生物學(xué)，動(dòng)物細(xì)胞工程和抗體工程等課程。主持動(dòng)物細(xì)胞工程校級(jí)精品課程建設(shè)，指導(dǎo)郁穎等同學(xué)的“挑戰(zhàn)杯”作品獲廣東省第九屆“挑戰(zhàn)杯”大學(xué)生科技作品競賽三等獎(jiǎng)?？蒲蟹矫妫?主持了國家“863”項(xiàng)目、國家自然科學(xué)基金、教育部科學(xué)技術(shù)研究重點(diǎn)項(xiàng)目，廣東省自然科學(xué)基金和廣州市科技攻關(guān)重點(diǎn)項(xiàng)目等科研課題。申報(bào)國家發(fā)明專利6項(xiàng)，在國內(nèi)外學(xué)術(shù)期刊發(fā)表研究論文50 余篇。主要研究方向圍繞基因工程抗體與抗體藥物開發(fā)，腫瘤多肽疫苗，腫瘤干細(xì)胞等開展研究。開展了抗體庫的構(gòu)建、人源抗體的篩選；抗體親和力成熟和抗體的人源化改造；抗體的高效表達(dá)和純化技術(shù)平臺(tái)建立等。開展了bFGF單克隆抗體的抑制腫瘤作用研究，進(jìn)一步開展抗體藥物研究。開展了抑制腫瘤血管新生的多肽疫苗的研究等，建立了抑制腫瘤血管生長的細(xì)胞模型和小鼠動(dòng)物模型。探討了VEGF/bFGF多肽疫苗在腫瘤血管新生和抑制腫瘤生長轉(zhuǎn)移的作用等。主要論文：bFGF 與VEGF 抗原表位篩選及復(fù)合肽的表達(dá)鑒定.2010，26（8）:688-693bFGF單克隆抗體抑制小鼠Lewis肺癌轉(zhuǎn)移及血管新生. 《中國癌癥雜志》2010, 20(6): 401-405嵌合內(nèi)含子對(duì)抗bFGF抗體基因在293T細(xì)胞中表達(dá)的影響. 中國生物工程雜志　2010, 30 (3) : 9-14 血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子表位肽體外抗腫瘤作用研究. 中國免疫學(xué)雜志, 2010, 26(5):, 407-412bFGF 單抗與順鉑體外聯(lián)合抑制黑色素瘤B16 細(xì)胞增殖效應(yīng)的研究. 中華腫瘤防治雜志2010, 17 (1): 1-4 　VEGF189基因合成、原核表達(dá)及鑒定. 免疫學(xué)雜志, 2009, 25,(4):469-472重組VEGF2A189 發(fā)酵、純化及鑒定. 暨南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版).2009, 30(5):560-565蘇丹紅Ⅰ、Ⅲ和對(duì)位紅競爭ELISA檢測方法的初步建立, 食品科學(xué), ,2008年 8月，29（8）：523-525人bFGF 單克隆抗體的制備及MabF7 對(duì)黑色素瘤B16 的體外抗瘤效應(yīng)。中華腫瘤防治雜志，2008，15（1）：19-22bFGF人源性抗體Fab段基因克隆及其在大腸桿菌中的表達(dá)，免疫學(xué)雜志，2007，23(6): 598-601重組人bFGF單克隆抗體可變區(qū)基因克隆及單鏈抗體的構(gòu)建和表達(dá). 細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2007，23（12）：1150-1153（鄧寧通訊作者）bFGF反義硫代核苷酸增強(qiáng)人喉癌Hep2細(xì)胞的化療敏感性。中國腫瘤生物治療雜志，2007， 14（5）：461-465VEGF受體結(jié)合抑制肽的重組表達(dá)與活性分析，中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志，2007，27（3）：263人噬菌體抗體庫的構(gòu)建及人源性抗bFGF抗體的篩選，免疫學(xué)雜志，2006，22（4）：451-454 (鄧寧通訊作者)bFGF mRNA、bFGF及FGFR1與神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞惡性行為的相關(guān)性 ，中國免疫學(xué)雜志，2006，22（5）：440-444自身免疫性患者血清中抗bFGF自身抗體的檢測，細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2005， 21（5）：625-627人工合成VEGF表位模擬7肽的生物學(xué)功能研究, 細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2005，21（1）：37-38

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