雙參通冠方血清藥理研究有新發(fā)現(xiàn)

日前，中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院科研人員，以中藥有效組分配伍方劑雙參通冠方不同灌胃劑量、藥后不同取血時(shí)間所得的“藥物血清”為受試藥物，進(jìn)行缺氧復(fù)氧實(shí)驗(yàn)，摸索出了在中藥血清藥理研究中，作用強(qiáng)度與體內(nèi)給藥量效、時(shí)效的關(guān)系，使中藥含藥血清藥理研究向規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化方向更進(jìn)一步。

中藥血清藥理學(xué)研究方法是以含藥血清在體外的藥理效應(yīng)來(lái)反映藥物在機(jī)體內(nèi)的作用，它與含藥血清中的藥物濃度直接相關(guān)。中藥含藥血清藥理研究的規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化依賴于其方法學(xué)研究的不斷發(fā)展。近年來(lái)，在中藥含藥血清藥理研究方法上進(jìn)行了較為系統(tǒng)的研究，其中，藥物血清的時(shí)效、量效關(guān)系是研究的重要部分。

科研人員以有效組分配伍方劑雙參通冠方（人參、丹參、延胡索）不同灌胃劑量、藥后不同取血時(shí)間所得的藥物血清為受試藥物，進(jìn)行缺氧復(fù)氧實(shí)驗(yàn)，并在復(fù)氧同時(shí)給予不同雙參通冠方藥物血清處理，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后取培養(yǎng)上清檢測(cè)乳酸脫氫酶（LDH）值，以LDH釋放抑制率為指標(biāo)，觀察含藥血清藥理作用強(qiáng)度與體內(nèi)給藥的量效、時(shí)效關(guān)系。

雙參通冠方藥物血清的時(shí)效、量效關(guān)系研究結(jié)果表明，45毫克·千克-1/90分鐘、45毫克·千克-1/120分鐘、90毫克·千克-1/30分鐘、90毫克·千克-1/90分鐘、180毫克·千克-1/60分鐘、180毫克·千克-1/90分鐘、360毫克·千克-1/90分鐘的藥物血清抑制缺氧復(fù)氧心肌LDH釋放作用最佳，與空白血清相比具統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P

在對(duì)含藥血清的量效關(guān)系研究中，研究人員認(rèn)為，如果把含藥血清作為一種藥物來(lái)看待，那么，藥量的大小主要取決于兩個(gè)方面:一是動(dòng)物的給藥量，在一定范圍內(nèi)，動(dòng)物給藥劑量越多，進(jìn)入血循環(huán)的藥物就越多，血藥濃度就高，因而所取含藥血清的體外藥理效應(yīng)就越強(qiáng)；二是培養(yǎng)體系或反應(yīng)體系中的含藥血清濃度(體積比)，血清濃度愈高則藥量愈大。含藥血清的量效是由動(dòng)物給藥量和血清濃度共同決定的，由于培養(yǎng)體系中血清濃度的增減是十分有限的(血清濃度過(guò)高會(huì)對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用，在研究含藥血清抑制細(xì)胞增殖或促細(xì)胞凋亡作用時(shí)，有可能得出假陽(yáng)性結(jié)果)，所以，相對(duì)固定含藥血清濃度，通過(guò)改變動(dòng)物給藥量來(lái)調(diào)整藥物血清的含藥量，是一種較為現(xiàn)實(shí)的辦法。

中藥藥理的最新進(jìn)展

常用單味中藥藥理研究是中藥藥理研究的重要內(nèi)容。仍以對(duì)整體動(dòng)物藥理效應(yīng)觀察及對(duì)器官、組織、細(xì)胞的影響等為主，現(xiàn)代生物技術(shù)如分子生物學(xué)研究方法 也受到廣泛關(guān)注和應(yīng)用。研究的藥味相對(duì)集中，以補(bǔ)益藥、活血化瘀藥居多，不少常用中藥的新藥理作用機(jī)理被揭示。
冬蟲(chóng)夏草 研究發(fā)現(xiàn)黃芪對(duì)自然衰老大鼠腦皮質(zhì)、海馬、紋狀體3個(gè)腦區(qū)降低的M膽堿受體和M1亞型受體密度有顯著的上調(diào)作用，并可調(diào)節(jié)老年大鼠血漿環(huán)核苷酸含量；衰老大鼠心肌β受體密度及T3、T4、皮質(zhì)醇含量均降低，黃芪、人參、枸杞子可升高之；對(duì)肝硬化大鼠存在的下丘腦血管加壓素系統(tǒng)異常有改善作用；可以明顯提高腎病綜合征大鼠血漿白蛋白水平，改善腎小球?yàn)V過(guò)率和尿鈉排泄；對(duì)環(huán)磷酰胺所致免疫功能抑制小鼠細(xì)胞毒活性有顯著增強(qiáng)作用，并可能 通過(guò)調(diào)控巨噬細(xì)胞C1q的分泌功能來(lái)增強(qiáng)免疫和抗腫瘤作用；還發(fā)現(xiàn)黃芪煎劑及含黃芪小鼠血清均對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖、混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)反應(yīng)及IL-2的產(chǎn)生有促進(jìn)作用。冬蟲(chóng)夏草水提液能降低正常心肌細(xì)胞內(nèi)Ca2+ 的濃度，減輕缺氧再給氧時(shí)細(xì)胞內(nèi)Ca2+超載現(xiàn)象，并明顯減輕缺氧再給氧時(shí)細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化。紅參在預(yù)防高血壓性視網(wǎng)膜動(dòng)脈硬化起重要作用，能使內(nèi)皮細(xì)胞膜的光整性、細(xì)胞器的結(jié)構(gòu)及內(nèi)皮細(xì)胞分泌各種血管舒縮 物質(zhì)保持正常，抑制平滑肌細(xì)胞的異常增生，還有擴(kuò)張血管、減少外周阻力及調(diào)節(jié)血壓的作用。生地黃可明顯抑制皮質(zhì)酮致“陰虛”模型小鼠巨噬細(xì)胞Ia抗原的高水平表達(dá)，降低其提呈抗原能力，從而表現(xiàn)出一定的免疫抑制作用。丹參注射液可明顯降低缺血再灌注引起的大鼠腦水腫，減少腦皮層及海馬組織丙二醛含量，提高過(guò)氧化氫酶、超氧化物歧化酶活性和還原型谷胱甘肽、三磷酸腺苷的含量。 復(fù)方是中醫(yī)用藥的主要形式，以中醫(yī)藥理論為指導(dǎo)，運(yùn)用現(xiàn)代科學(xué)手段，對(duì)古方和現(xiàn)代經(jīng)驗(yàn)方進(jìn)行多指標(biāo)的系統(tǒng)藥理研究，可以在更深的層次揭示方劑的治療原理，有效地指導(dǎo)臨床用藥和中藥新產(chǎn)品研創(chuàng)。中藥復(fù)方在藥效學(xué)、藥代動(dòng)力學(xué)和分子藥理研究等方面取得了較好的進(jìn)展。
藥理實(shí)驗(yàn) 古方的藥理研究有數(shù)十首，其中桂枝湯、六味地黃湯、四君子湯、四物湯、大承氣湯、補(bǔ)中益氣湯、當(dāng)歸補(bǔ)血湯等研究較多。在古方研究中較多地探討了方劑的作用機(jī)制，給方劑的傳統(tǒng)功效描述賦予現(xiàn)代藥理學(xué)內(nèi)容。如桂枝湯可能通過(guò)影響興奮胃腸運(yùn)動(dòng)的胃泌素、胃動(dòng)素、P物質(zhì)以及抑制胃腸運(yùn)動(dòng)的生長(zhǎng)抑素、血管活性腸肽等在下丘腦和胃腸道中的含量來(lái)調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)；桂枝湯對(duì)與呼吸道感染有關(guān)的10株病毒致細(xì)胞病變均有不同程度的抑制作用，其含藥血清能抑制單純皰疹病毒等4株病毒對(duì)Hep-2細(xì)胞的增殖。當(dāng)歸補(bǔ)血湯含藥血清隨給藥劑量增加可使造血祖細(xì)胞集落數(shù)明顯增多。將六味地黃湯方視為一個(gè)整體，以活性評(píng)價(jià)為導(dǎo)向，從六味地黃湯中定向追蹤分離，獲得了具有調(diào)節(jié)免疫功能的活性部位，該部位對(duì)TH及TC的功能有調(diào)節(jié)作用。這些研究都在一定程度上說(shuō)明了方劑的作用原理。經(jīng)驗(yàn)方的藥理研究開(kāi)展得更為廣泛，其研究?jī)?nèi)容多結(jié)合新藥研究的有關(guān)要求，著重于藥效及安全性評(píng)價(jià)，不少方劑已經(jīng)或即將開(kāi)發(fā)為新藥。
配伍是中醫(yī)用藥的特點(diǎn)和優(yōu)勢(shì)所在，用藥理研究方法觀察方劑配伍與藥理效應(yīng)變化之間的關(guān)系，探討方劑的配伍規(guī)律，仍然是復(fù)方藥理研究的重要內(nèi)容。雖然還是以方劑藥味加減 、正交設(shè)計(jì)等方法為主，但在應(yīng)用中也有明顯提高，采用一些新方法來(lái)更好地分析方劑的配伍問(wèn)題。關(guān)于復(fù)方配伍規(guī)律的基礎(chǔ)研究99年納入國(guó)家自然科學(xué)基金重點(diǎn)研究 項(xiàng)目，強(qiáng)調(diào)運(yùn)用高新技術(shù)手段探討方劑的物質(zhì)基礎(chǔ)，綜合分析配伍-化學(xué)成分變化-藥理效應(yīng)三者之間的聯(lián)系，闡明配伍內(nèi)涵，成為新的探索方向。生脈散復(fù)方化學(xué)動(dòng)態(tài)變化與藥效關(guān) 系研究表明，各藥配伍后藥效的變化可能與產(chǎn)生新物質(zhì)有關(guān)。以方劑的物質(zhì)基礎(chǔ)研究為核心，注重方劑配伍理論與現(xiàn)代藥理交互作用理論結(jié)合，物質(zhì)基礎(chǔ)分析與藥理效應(yīng)觀察相結(jié)合，從組成方劑的單味藥、方劑的化學(xué)部分以及化學(xué)成分三個(gè)層次探討方劑的配伍與物質(zhì)基礎(chǔ)的變化的關(guān)系，在整體動(dòng)物、器官組織、細(xì)胞亞細(xì)胞及分子生物學(xué)四個(gè)水平上探討方劑的配伍、物質(zhì)基礎(chǔ)的變化與藥理效應(yīng)間的聯(lián)系，已成為復(fù)方配伍研究的基本思路。 中藥的品種、產(chǎn)地、采藥季節(jié)、貯藏條件及劑量、劑型、給藥途徑等，均對(duì)中藥作用的發(fā)揮有著顯著的影響。
（1）中藥基原（原植物、動(dòng)物和礦物）的影響
中藥材絕大多數(shù)是中國(guó)自產(chǎn)的，少數(shù)為移植或進(jìn)口的。在品種上，歷代本草著作中屢有增加。不少本草書(shū)指出了歷史上中藥品種的混亂情況。故對(duì)其進(jìn)行認(rèn)真的考證、分析、鑒定的工作，是十分重要的。例如，中國(guó)用的貫眾、獨(dú)活、厚樸等中藥，就來(lái)源于20多種不同種屬植物；同一中藥大青葉，各地用的藥材又有不同，有蓼科蓼蘭、十字花科松蘭、爵床科馬蘭、馬鞭草科大青等，藥用部分也有用葉及帶葉莖枝的不同。而且，同名異物的現(xiàn)象也很普遍。由于品種不清，其化學(xué)成分的含量和藥理作用均有差異。
（2）中藥產(chǎn)地及采集季節(jié)的影響
人參 a) 中藥產(chǎn)地：藥材產(chǎn)地對(duì)藥物質(zhì)量和療效有著直接關(guān)系，為歷代醫(yī)家所重視，自古即有“道地藥材”的講法。中藥之中大部分為植物藥，自然生長(zhǎng)環(huán)境具有一定的區(qū)域性，各地區(qū)的土壤、水質(zhì)、氣候、雨量等自然條件都能影響藥用植物生長(zhǎng)、開(kāi)花、結(jié)果等一系列生態(tài)過(guò)程，特別是土壤成分更能影響中藥內(nèi)在成分的質(zhì)和量?！?a href="/ddjy_99/221.html">神農(nóng)本草經(jīng)》記載的記載的“采造時(shí)月、生熟、土地所出、真?zhèn)巍㈥愋?，并各有法”和《新修本草》說(shuō)的：“離其本土，則質(zhì)同而效異；乖于采摘，乃物是而實(shí)非”。都很強(qiáng)調(diào)產(chǎn)地。產(chǎn)地不同，同一植物所含有效成分不完全相同，從而使藥理作用有別，臨床療效不穩(wěn)定。如長(zhǎng)白山的野山參，東北各省與朝鮮、日本的園參，不但含人參總皂甙的量不同，而不同皂甙單體的含量也不一樣。又如人參莖葉中皂甙含量在吉林省七個(gè)產(chǎn)地所得樣品，含量差別相當(dāng)懸殊。不同產(chǎn)地及不同加工方法，以人參提取物的得量也不同。
b) 采收季節(jié)：不同植物的根莖、葉、花、果、種子或全草都有一定的生長(zhǎng)和成熟期，故采藥時(shí)間的采收方式則隨著中藥的品種和入藥部位而有不同。中國(guó)幅員遼闊，從寒帶至亞熱帶，氣候差異很大，故采藥時(shí)間按照當(dāng)?shù)亓?xí)慣因地制宜，但要選擇藥用植物有交效萬(wàn)分含量最高時(shí)采收。有效成分的含量隨不同生長(zhǎng)季節(jié)及不同入藥部位而異，如人參中皂甙以八月后含量最高，麻黃中生物堿秋季含量最高，槐花在花蕾時(shí)蘆丁含量最高，青蒿中青蒿素的含量以七月中至八月中花蕾出現(xiàn)前為高峰，應(yīng)在開(kāi)花前采收，薄荷在部分植株開(kāi)始有花蕾時(shí)，揮發(fā)油含量大。古人采藥全憑經(jīng)驗(yàn)，《本草經(jīng)集注》序錄說(shuō)：“凡采藥時(shí)月…… 其根物以二月、八月采者，謂春初津液始萌，未沖枝葉，勢(shì)力淳濃故也；至秋枝葉干枯，津液歸流于下…… ”《本草蒙筌》說(shuō)：“實(shí)已熟，味純；葉采新，力倍?！币猿粑嗤┑慕笛獕鹤饔脼槔?，在五月開(kāi)花前采摘的葉，對(duì)動(dòng)物的降壓作用強(qiáng)，開(kāi)花后所采集的葉，降壓作用減弱。再以人參為例，季節(jié)變化對(duì)園參根中皂甙和糖分含量有顯著影響，故采收應(yīng)在6～9月，而不應(yīng)在冬季。
（3）藥用部位的影響：不同的藥用部位所含化學(xué)成分的質(zhì)和量都可能不同，所以其藥理作用也不同。曾有人比較研究了各地所產(chǎn)白參、紅參的不同部位的人參皂甙含量，發(fā)現(xiàn)有較大差異。又如麻黃生物堿的含量，以麻黃莖的髓部含量最高，麻黃節(jié)中含量較少，而根中則不含生物堿。
（4）貯藏條件的影響：《本草蒙筌》說(shuō)：“凡藥貯藏，宜常提防，倘陰干曝干烘干未盡去濕，則蛀蝕霉垢朽爛，不免為殃。”貯藏不當(dāng)，要霉?fàn)€變質(zhì)、走油、蟲(chóng)蛀，會(huì)直接影響藥理作用和醫(yī)療質(zhì)量。所以要選擇適宜的堆放場(chǎng)所，加強(qiáng)倉(cāng)庫(kù)管理工作，注意特殊藥材的保管（如貴重藥材、芳香性及膠類藥材等），還要定期檢查，防治蟲(chóng)害。貯藏不當(dāng)，也可使含揮發(fā)油的藥材氧化、分解或自然揮發(fā)（如樟腦、冰片、麝香）而使藥效降低。有的成分會(huì)因存放時(shí)間長(zhǎng)，而被酶所分解等。
（5）炮制的影響：炮制前后，藥材的成分質(zhì)和量會(huì)有所變化，藥理作用和臨床療效可因之不同。《本草蒙筌》曾從臨床經(jīng)驗(yàn)指出：“酒制升提；姜制發(fā)散；入鹽走腎而軟堅(jiān)；用醋注肝而住痛；乳制潤(rùn)枯生血；蜜制甘緩益元……。”
小鼠中藥炮制從以下一些方面影響藥理作用：
①減毒，去毒。如半夏“生令人吐，熟令人下?！鄙胂膶?duì)胃粘膜有強(qiáng)大的刺激作用，故致嘔吐；姜半夏卻顯示鎮(zhèn)吐作用。
②增效，如杜仲含大量杜仲膠，生杜仲煎出的有效成分甚少；炮制后則膠質(zhì)破壞，故炒杜仲煎劑降低血壓較生者為強(qiáng)。
③改變藥材成分的組成，加強(qiáng)或突出某一作用。如生大黃主要有瀉下作用，炮制后的制大黃卻出現(xiàn)較強(qiáng)抗菌作用。
④改進(jìn)切制工藝，增加藥效。藥材炮制加工過(guò)程，可影響其內(nèi)在成分，直接關(guān)系到其藥理反應(yīng)的性質(zhì)和強(qiáng)度。
（6）劑型和制劑的影響：同一種中藥制成不同劑型，由于制造工藝和給藥途徑不同，往往影響藥物的吸收和血液濃度，直接關(guān)系到藥理作用的強(qiáng)弱?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》指出“藥性有宜丸者，宜散者，宜水煮者，宜酒漬者，宜膏煎者，亦有一物兼宜者，亦有不可入湯酒者，并隨藥性，不得違越。”說(shuō)明古人早已注意到劑型對(duì)藥效的影響：如枳實(shí)或者青皮煎劑口服，未見(jiàn)升高血壓記載，但制成注射劑靜脈注射，卻出現(xiàn)強(qiáng)大的升壓作用。
《本草經(jīng)集注》記載的“合藥分劑法則”，對(duì)藥衡、切制要求、劑型、制藥方法，直至用蠟用蜜等，都有一定規(guī)定?，F(xiàn)代制藥，要求更高，同一中藥或復(fù)方，即使劑量相等，劑型相同，但臥于各藥廠生產(chǎn)制劑的工藝不同，療效和毒性也往往有所區(qū)別。甚至同廠不同批號(hào)的產(chǎn)品，也不盡相同。為了保證不伺批號(hào)不同藥廠的同名產(chǎn)品有相同的療效，應(yīng)當(dāng)采取一定措施加強(qiáng)質(zhì)量控制。制劑均按《中華人民共和國(guó)藥典》規(guī)定或各省市衛(wèi)生局批準(zhǔn)的藥品標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。對(duì)指導(dǎo)中成藥制劑和統(tǒng)一產(chǎn)品的規(guī)格，起到良好作用。 機(jī)體因素也是影響藥理作用重要因素，它包括生理情況、病理狀態(tài)等。
（1）生理情況的影響：體質(zhì)、年齡、性別、情志等，對(duì)藥物的作用發(fā)揮，影響甚大。中醫(yī)學(xué)很強(qiáng)調(diào)秉賦不同對(duì)藥效的影響。意指遺傳因素、身體素質(zhì)對(duì)抗病能力及藥物反應(yīng)，存在較大差異。臨床上也存在不同種族或不同個(gè)體，對(duì)某藥的治療劑量相差多倍的現(xiàn)象。這種存于種屬或種族間的不同，稱為種屬或種族差異；存在于個(gè)體之間的差異，叫做個(gè)體差異。年齡不同，對(duì)藥物的反應(yīng)也不同。少兒期與老年人對(duì)藥物的反應(yīng)與一般成年人有區(qū)別。 少兒期正在發(fā)育階段，許多器官、系統(tǒng)的發(fā)育尚未完善，老年人肝腎功能普遍減退，都會(huì)影響藥物的體內(nèi)代謝及排泄功能，故用量應(yīng)適當(dāng)減少。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為老年人體虛，對(duì)藥物的耐受力較弱，故用攻病法邪藥物時(shí)宜減量使用；幼兒稚陽(yáng)之體不能峻補(bǔ)，故小兒不宜用參、茸驟補(bǔ)。不同性別，對(duì)藥物的反應(yīng)也有明顯差異，婦女一方面因體重差異，一方面由于激素的影響，對(duì)某些藥物的敏感性頗有不同。如定坤丹、調(diào)經(jīng)丸、烏雞白鳳丸適用于婦科；而催吐藥、峻瀉藥則禁用于孕婦。情志、精神狀態(tài)對(duì)藥物的作用也有影響。所謂喜、怒、憂、思、悲、恐，驚等七情對(duì)藥物作用的發(fā)揮，顯有影響。
黃芩　 此外，藥物的個(gè)體差異，有量的和質(zhì)的兩種表現(xiàn)。既有藥理學(xué)上所謂高敏性、耐受性；也有極個(gè)別病人對(duì)某種藥物發(fā)生的過(guò)敏反應(yīng)。如口服人參糖漿，靜滴生脈液等，都有過(guò)敏反應(yīng)的報(bào)道。
（2）病理狀態(tài)的影響：病理狀態(tài)也可以影響藥物的作用，例如黃芩、穿心蓮等藥，對(duì)正常體溫并無(wú)降低作用，只有發(fā)熱病人用后，出現(xiàn)解熱作用。又如五苓散在實(shí)驗(yàn)中對(duì)犬和小鼠不出現(xiàn)利尿作用，但對(duì)臨床上患有水腫、小便不利的病人，則具有利尿作用。肝腎患病，功能減弱，可以影響藥物體內(nèi)的代謝過(guò)程，往往使藥物的作用時(shí)間延長(zhǎng)。還有人工發(fā)熱動(dòng)物模型所篩選出來(lái)的具有退熱作用的中藥，臨床用于病人不夠滿意，如穿心蓮；也有一些清熱藥對(duì)病人甚效，而實(shí)驗(yàn)結(jié)果并不一定理想，如白虎湯。這也說(shuō)明動(dòng)物模型與人的疾病之間，還存在某些差異。 環(huán)境對(duì)藥物的影響，也為眾所周知。例如地理?xiàng)l件、氣候寒暖、飲食起居、家庭環(huán)境、居住部位，都對(duì)人的健康有較大影響。人被環(huán)境影響精神不舒時(shí)，可直接影響藥物的治療效果。一般在四肢運(yùn)動(dòng)時(shí)，腹腔內(nèi)臟的血流量減少，這對(duì)一些腹部疾患的恢復(fù)是不利的。此外，在肺部炎癥時(shí)，如被迫過(guò)多勞動(dòng)，可使炎癥向周圍組織擴(kuò)散，病情惡化。
根據(jù)生物活動(dòng)表現(xiàn)的晝夜節(jié)律，體溫、腎上腺素、皮質(zhì)激素分泌等的晝夜波動(dòng)，常與外界環(huán)境的晝夜變化有關(guān)。藥物作用也常皇現(xiàn)此種晝夜節(jié)律，例如附子、烏頭，通過(guò)測(cè)定其所含烏頭堿量及參附注射液的急性毒性，證實(shí)動(dòng)物對(duì)其敏感性存在晝夜節(jié)律。烏頭堿的毒性午時(shí)（13點(diǎn)）最高（66．7%）；戌時(shí)最低（13．3%），兩組差異顯著。參附注射液靜脈注射，子時(shí)LD50值為9．8629/kg，午時(shí)為8．308/kg。又如雷公藤的醋酸乙酯提取物是一治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的藥物，于24小時(shí)內(nèi)按不同時(shí)辰，每4小時(shí)給小鼠分組給藥，觀察給藥后一周內(nèi)的死亡率，發(fā)現(xiàn)其毒性具有明顯的時(shí)辰節(jié)律，以中午12點(diǎn)給藥者死亡率最高，20點(diǎn)至次晨8點(diǎn)給藥者死亡率最低。

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