一、到底什么是熒光檢測(cè)熒光檢測(cè)是一種自然發(fā)光反應(yīng)
,通過熒光素酶與ATP進(jìn)行反應(yīng),可檢測(cè)人體細(xì)胞、細(xì)菌、霉菌、食物殘?jiān)?div id="4qifd00" class="flower right">熒光檢查法是一種婦科生殖系統(tǒng)疾病檢查診斷方法
,比傳統(tǒng)的肉眼觀察法更客觀,靈敏度更高,實(shí)用性更強(qiáng)。提高婦科檢查結(jié)果的準(zhǔn)確性,有利于及時(shí)診斷病癥,起到早治療早康復(fù)的效果,更能進(jìn)行宮頸癌和一些瘤變病癥的的早期篩查,保護(hù)婦女健康。在皮膚病中適用于細(xì)菌、病毒、衣原體、支原體等病原體感染的快速診斷,以及紅斑狼瘡、皰疹樣皮炎二、熒光檢查法的具體詳細(xì)情況(1)直接免疫熒光法
用以檢查病人的皮膚組織中有無免疫球蛋白或補(bǔ)體沉積
,用特異熒光抗體直接滴加于待檢的標(biāo)本上,由熒光標(biāo)記的抗體與抗原發(fā)生特異結(jié)合。使之呈現(xiàn)熒光,根據(jù)熒光分布和形態(tài)確定抗原部位和性質(zhì)。此法用已知的抗體檢查未知的抗原,但一種標(biāo)記抗體只能查一種抗原,可直接采用病人的病變組織。如:紅斑狼瘡、皰疹樣皮炎、類天皰瘡等作冰凍切片,熒光染色。此法簡(jiǎn)單、特異。采集標(biāo)本后,直接涂于載玻片上,自然干燥后,丙酮固定10分鐘,待丙酮完全揮發(fā)后(2)間接免疫熒光法
用以檢測(cè)病人血清中是否存在某種特異抗體或自身抗體
,反應(yīng)中的兩對(duì)抗原抗體相對(duì)應(yīng)的特異結(jié)合,而第二抗體(熒光抗體)則針對(duì)第一抗體的結(jié)合體,由于第一抗原分子可與若干個(gè)抗體分子結(jié)合,因而第二結(jié)合反應(yīng)后,靈敏度大大提高。本法常用于各種自身抗體的檢測(cè)。如:系統(tǒng)性紅斑狼瘡、硬皮病等。標(biāo)本采后,保存于轉(zhuǎn)送培養(yǎng)基中,臨用前混勻后取懸液涂片,固定后加入50 l用PH 7.2 PBS 1:16稀釋的特異性抗體,35℃孵育30分鐘,取出后用PH 9.0的0.01 M的磷酸鹽緩沖液浸泡10分鐘三、熒光檢測(cè)的缺點(diǎn)熒光檢測(cè)是一種自然發(fā)光反應(yīng)
熒光檢測(cè)的主要缺點(diǎn)在于只有少數(shù)化合物產(chǎn)生熒光
。大多數(shù)的分子不發(fā)熒光,但含有可衍生的官能團(tuán)用于合成能發(fā)熒光的衍生物,例如,鄰苯二甲醛是一種常用熒光基團(tuán)用于柱后衍生氨基酸。雖然熒光檢測(cè)很靈敏,但對(duì)于常見的樣品分析來說不需要如此高的靈敏度。因?yàn)镋LSD的響應(yīng)不依賴于熒光基團(tuán),所以不需要衍生,因此大大降低了樣品預(yù)處理和分析時(shí)間。此外,熒光免疫檢測(cè)技術(shù)具有專一性強(qiáng)
、靈敏度高、實(shí)用性好等優(yōu)點(diǎn),因此它被用于測(cè)量含量很低的生物活性化合物,例如蛋白質(zhì)(酶、接受體、抗體)、激素(甾族化合物四、熒光檢測(cè)的使用流式
優(yōu)點(diǎn)是速度快
熒光顯微鏡
剛好與流式互補(bǔ)
共聚焦
熒光顯微鏡的升級(jí)產(chǎn)品
,具有很好的光學(xué)層切效果,能得到很好三維定位信息本文地址:http://www.mcys1996.com/jiankang/111093.html.
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