熒光檢查能查出來什么,熒光檢查注意點

提起熒光檢查可能很多人并不是很清楚這是一種什么樣的檢查，其實熒光檢查在婦科檢查方面應(yīng)用還是很多的。但是很多人不清楚的問題就是熒光檢查到底能夠檢查什么出來，那么本文就針對這個問題來給大家做個具體的介紹和說明。

首先大家需要明確的一個問題就是，熒光檢查就是婦科生殖系統(tǒng)疾病中所使用的一種檢查方法，比起肉眼觀察的方法，熒光檢查法不僅更加客觀、靈敏度更高，而且可以提高檢查的準(zhǔn)確性，所以日常使用是很多的。所謂的熒光檢查就是讓熒光物質(zhì)進入到生殖系統(tǒng)的靜脈中去。進行造影。其實熒光造影在婦科檢查上的應(yīng)用主要是用來檢查宮頸癌和一些瘤變病癥的早期篩查。不僅如此，熒光檢查還可以用來進行細(xì)菌、病毒、支原體等的診斷。

如果患者擔(dān)心自己患上了紅斑狼瘡、斑疹樣皮炎的話，也是可以采用熒光造影的方法來檢查一下的。熒光檢查的日常使用很廣泛，但是在使用此種檢查方法的時候，也是有一些問題需要大家注意的。首先大家需要了解的就是在做檢查之前，要先做好病人的心理護理，向病人說明這個檢查的過程，解除病人的思想顧慮，得到病人的配合。每次試驗的時候應(yīng)該設(shè)陽性和隱性來對照，而且標(biāo)本是需要及時檢測的，在保存方面要避光保存。

通過上文的介紹，相信大家對熒光檢查到底可以用來檢查什么的問題已經(jīng)有了一個大概的了解。其實熒光檢查在日常中的使用還是比較多的，但是在使用方面大家也是有一些問題需要注意的，首先醫(yī)生要給患者做好心里建設(shè)，而且一定要注意保證熒光抗體的質(zhì)量。

熒光顯微鏡的使用需要注意哪些問題？何謂直接熒光與間接熒光

（1）嚴(yán)格按照熒光顯微鏡廠家說明書要求進行操作，不要隨意改變程序。
（2） 觀察對象必須是可自發(fā)熒光或已被熒光染料染色的標(biāo)本。
（3）應(yīng)在暗室中進行檢查。進入暗室后，接上電源，點燃超高壓汞燈5～15min，待光源發(fā)出強光穩(wěn)定后，眼睛完全適應(yīng)暗室，再開始觀察標(biāo)本。
（4）載玻片、蓋玻片及鏡油應(yīng)不含自發(fā)熒光雜質(zhì)，載玻片的厚度應(yīng)在0.8～1.2mm之間，太厚可吸收較多的光，并且不能使激發(fā)光在標(biāo)本平面上聚焦。載玻片必須光潔，厚度均勻，無油漬或劃痕。蓋玻片厚度應(yīng)在0.17mm左右。
（5）防止紫外線對眼睛的損害，在調(diào)整光源時應(yīng)戴上防護眼鏡。
（6）選用效果最好的濾光片組。
（7）檢查時間每次以1～2h為宜，超過90min，超高壓汞燈發(fā)光強度逐漸下降，熒光減弱；標(biāo)本受紫外線照射3～5min后，熒光也明顯減弱；所以，最多不得超過2～3h。 （8）熒光標(biāo)本一般不能長久保存，若持續(xù)長時間照射（尤其是紫外線）易很快褪色。因此，如有條件則應(yīng)先照相存檔，再仔細(xì)觀察標(biāo)本。
（9）熒光顯微鏡光源壽命有限，啟動高壓汞燈后，不得在15min內(nèi)將其關(guān)閉，一經(jīng)關(guān)閉，必須待汞燈冷卻后方可再開啟。嚴(yán)禁頻繁開閉，否則，會大大降低汞燈的壽命。標(biāo)本應(yīng)集中檢查，以節(jié)省時間，保護光源。天熱時，應(yīng)加電扇散熱降溫，新?lián)Q燈泡應(yīng)從開始就記錄使用時間。燈熄滅后欲再用時，須待燈泡充分冷卻后才能點燃。一天中應(yīng)避免數(shù)次點燃光源。
（10）標(biāo)本染色后立即觀察，因時間久了熒光會逐漸減弱。若將標(biāo)本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存，可延緩熒光減弱時間，防止封裱劑蒸發(fā)。
（11）若暫不觀察標(biāo)本時，可拉過阻光光簾阻擋光線。這樣，既可避免對標(biāo)本不必要的長時間照射，又減少了開閉汞燈的頻率和次數(shù)。
（12）熒光亮度的判斷標(biāo)準(zhǔn)：一般分為四級，即“一”—無或可見微弱熒光?！?”—僅能見明確可見的熒光?！?+”—可見有明亮的熒光?！?++”—可見耀眼的熒光。
（13）較長時間觀察熒光標(biāo)本時，一定要戴能阻擋紫外光的護目鏡，加強對眼睛的保護。在未加入阻斷濾光片前不要用眼直接觀察，否則會損傷眼睛。

(14) 激發(fā)光長時間的照射，會發(fā)生熒光的衰減和淬滅現(xiàn)象，因此盡可能縮短觀察時間，暫時不觀察時，應(yīng)用擋板遮蓋激發(fā)光。
(15) 作油鏡觀察時，應(yīng)用“無熒光油”。
(16) 熒光幾乎都較弱，應(yīng)在較暗的室內(nèi)進行。

熒光顯微鏡的注意事項

（1）嚴(yán)格按照熒光顯微鏡出廠說明書要求進行操作，不要隨意改變程序。
（2）應(yīng)在暗室中進行檢查。進入暗室后，接上電源，點燃超高壓汞燈5～15min，待光源發(fā)出強光穩(wěn)定后，眼睛完全適應(yīng)暗室，再開始觀察標(biāo)本。
（3）防止紫外線對眼睛的損害，在調(diào)整光源時應(yīng)戴上防護眼鏡。
（4）檢查時間每次以1～2h為宜，超過90min，超高壓汞燈發(fā)光強度逐漸下降，熒光減弱；標(biāo)本受紫外線照射3～5min后，熒光也明顯減弱；所以，最多不得超過2～3h。
（5）熒光顯微鏡光源壽命有限，標(biāo)本應(yīng)集中檢查，以節(jié)省時間，保護光源。天熱時，應(yīng)加電扇散熱降溫，新?lián)Q燈泡應(yīng)從開始就記錄使用時間。燈熄滅后欲再用時，須待燈泡充分冷卻后才能點燃。一天中應(yīng)避免數(shù)次點燃光源。
（6）標(biāo)本染色后立即觀察，因時間久了熒光會逐漸減弱。若將標(biāo)本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存，可延緩熒光減弱時間，防止封裱劑蒸發(fā)。長時間的激發(fā)光照射標(biāo)本，會使得熒光衰減和消失現(xiàn)象，故應(yīng)盡可能縮短照射時間。暫時不觀察時可用擋光板遮蓋激發(fā)光。
（7）標(biāo)本觀察時候應(yīng)采用無熒光油，應(yīng)避免眼睛直視紫外光源。
（8）電源應(yīng)安裝穩(wěn)壓器，電壓不穩(wěn)會降低熒光燈的壽命。
熒光顯微鏡與光學(xué)顯微鏡的區(qū)別
熒光顯微鏡和普通顯微鏡有以下的區(qū)別：
1.照明方式通常為落射式，即光源通過物鏡投射于樣品上；
2.光源為紫外光，波長較短，分辨力高于普通顯微鏡；
3.有兩個特殊的濾光片，光源前的用以濾除可見光，目鏡和物鏡之間的用于濾除紫外線，用以保護人目。
熒光顯微鏡也是光學(xué)顯微鏡的一種，主要的區(qū)別是二者的激發(fā)波長不同。由此決定了熒光顯微鏡與普通光學(xué)顯微鏡結(jié)構(gòu)和使用方法上的不同。
熒光顯微鏡是免疫熒光細(xì)胞化學(xué)的基本工具。它是由光源、濾板系統(tǒng)和光學(xué)系統(tǒng)等主要部件組成。是利用一定波長的光激發(fā)標(biāo)本發(fā)射熒光，通過物鏡和目鏡系統(tǒng)放大以觀察標(biāo)本的熒光圖像。

免疫熒光的方法有什么注意環(huán)節(jié)

1、冰凍切片制備：建議用新鮮組織，否則組織細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)破壞，易使抗原彌散。選用干凈鋒利的刀片、組織一定要冷凍適度等，防止裂片和脫片嚴(yán)重。

2、組織切片固定：切好片風(fēng)干后立即用冰丙酮等固定液進行固定?5-10?min，尤其要較長時間保存的白片，一定要及時固定和適當(dāng)保存。

3、血清封閉：為防止內(nèi)源性非特異性蛋白抗原的結(jié)合，需要在一抗孵育前先用血清（與二抗來源一致）封閉，減弱背景著色。血清封閉的時間是可以調(diào)整的，一般?10-30?min。

4、一抗孵育條件：在免疫組化反應(yīng)中最重要，包括孵育時間和抗體濃度。一抗孵育溫度有幾種：4℃?、室溫、37℃?，其中?4℃?效果最佳；孵育時間：這與溫度、抗體濃度有關(guān)，一般?37℃?1-2?h，而?4℃?過宿和從冰箱拿出后?37℃?復(fù)溫?45?min。具體條件還要摸索。

5、二抗孵育條件：二抗一般室溫或?37℃?立即觀察，若將標(biāo)本放在聚乙烯塑料袋中?4℃?30?min-1h，具體時間需要摸索，而濃度一般有工作液，若是濃縮液還要摸索濃度，切記要避光反應(yīng)。但在免疫熒光中我們一般先把二抗?jié)舛群头跤龝r間先定下，然后去摸索一抗?jié)舛群头跤龝r間。最后，熒光素標(biāo)記的二抗隨著保存時間的延長，可能后有大量的游離熒光素殘留，需要注意配制時小包裝和并進行適當(dāng)?shù)碾x心。

6、復(fù)染：目的是形成細(xì)胞輪廓，從而更好地對目標(biāo)蛋白進行定位。一般常用?DAPI?復(fù)染。

7、封片：為了長期保存，我們一般用緩沖甘油等封片，此外還有專門的抗熒光萃滅封片液。避免產(chǎn)生氣泡，方法是直接在載玻片組織上滴一滴封片液，然后一手拿住蓋片某一拐角，而另一手拿對面的那個拐角，接近封片液近端的拐角先降低，直至接觸到液體時為止；當(dāng)發(fā)現(xiàn)液體接觸面在不斷彌散時，則可以緩慢降低另一拐角，這樣一般不會產(chǎn)生氣泡。

8、切片清洗：為了防止一抗、二抗等試劑殘留而引起非特異性染色，所以適當(dāng)?shù)丶訌娗逑矗ㄑ娱L時間和增多次數(shù)）尤為重要，我一般在一抗孵育前的清洗是?3?min*3?次，而一抗孵育后的清洗均為?5?次*5?min。注意：單獨沖洗，防止交叉反應(yīng)造成污染。溫柔沖洗，防止切片的脫落。我喜歡用浸洗方式；沖洗的時間要足夠，才能徹底洗去結(jié)合的物質(zhì)。PBS?的?pH?和離子強度的使用和要求。這方面我有慘痛教訓(xùn)，當(dāng)時我買的抗體稀釋液偏酸，結(jié)果背景一片黃（未見特異性染色），建議?pH?在?7.4-7.6?濃度是?0.01?M。（中性及弱堿性條件（pH7-8）有利于免疫復(fù)合物的形成，而酸性條件則有利于分解；低離子強度有利于免疫復(fù)合物的形成，而高離子強度則有利于分解）

9、拍照：有條件的話最好立即拍照，若不能及時拍照，也要封好片和用指甲油封固，保持避光和濕度。使用熒光顯微鏡注意嚴(yán)格按照熒光顯微鏡出廠說明書要求進行操作，不要隨意改變程序；應(yīng)在暗室中進行檢查；防止紫外線對眼睛的損害，在調(diào)整光源時應(yīng)戴上防護眼鏡；檢查時間每次以1~2?h?為宜，超過?90?min，超高壓汞燈發(fā)光強度逐漸下降，熒光減弱；標(biāo)本受紫外線照射?3~5?min?后，熒光也明顯減弱或褪色；激發(fā)光長時間的照射，會發(fā)生熒光的衰減和淬滅現(xiàn)象；所以最多不得超過?2~3?h；熒光顯微鏡光源壽命有限，標(biāo)本應(yīng)集中檢查，以節(jié)省時間，保護光源。天熱時，應(yīng)加電扇散熱降溫，新?lián)Q燈泡應(yīng)從開始就記錄使用時間。燈熄滅后欲再啟用時，須待燈光充分冷卻后才能點燃。一天中應(yīng)避免數(shù)次點燃光源。關(guān)閉汞燈至少在開啟?15-30?分鐘后；標(biāo)本染色后立即觀察，因時間久了熒光會逐漸減弱。若將標(biāo)本放在聚乙烯塑料袋中?4℃?保存，可延緩熒光減弱時間，防止封裱劑蒸發(fā)；使用的玻片等載體，都必須厚度均勻，無明顯的自發(fā)熒光，如果使用油鏡，還必須保證鏡油為無熒光鏡油；電源最好裝穩(wěn)壓器，否則電壓不穩(wěn)不僅會降低汞燈的壽命，也會影響鏡檢的效果。

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