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抗體檢測(cè)方法眾多,謹(jǐn)慎選擇避免出錯(cuò)

中醫(yī)世家 2023-08-05 00:27:01

、抗體的主要功能

、中和毒素和阻止病原體入侵識(shí)別并特異性結(jié)合抗原是抗體的主要功能,執(zhí)行該功能的結(jié)構(gòu)是抗體的V區(qū)
,其中CDR部位在識(shí)別和結(jié)合特異性抗原中起決定性作用
?div id="jfovm50" class="index-wrap">?贵w有單體、二聚體和五聚體
,因此結(jié)合抗原表位的數(shù)日也不相同?div id="jfovm50" class="index-wrap">?贵w結(jié)合抗原表位的個(gè)數(shù)稱為抗原結(jié)合價(jià)
。Ig單體可結(jié)合2個(gè)抗原表位,為雙價(jià)。SIgA是二聚體
,可結(jié)合4個(gè)抗原表位,為4價(jià)
。IgM是五聚體
,理論上可以結(jié)合10個(gè)抗原,應(yīng)該是10價(jià)
,但由于立體構(gòu)象的空間位阻,使lgM一般只能結(jié)合5個(gè)抗原表位
,故為5價(jià)
。[3]

抗體的V區(qū)與抗原結(jié)合后,借助于c區(qū)的作用

,在體外可發(fā)生各種抗原抗體結(jié)合反應(yīng),有利于抗原或抗體的檢測(cè)和功能的判斷
;在體內(nèi)可中和毒素
、阻斷病原體入侵、清除病原微生物
;B細(xì)胞膜表面的IgM和IgD構(gòu)成B細(xì)胞的抗原識(shí)別受體,能輔助B細(xì)胞特異性識(shí)別抗原分子
。[3]

、激活補(bǔ)體產(chǎn)生攻膜復(fù)合物使細(xì)胞溶解破壞人IgG1~3和IgM與相應(yīng)抗原結(jié)合后,可因構(gòu)象改變而使其CH2和CH3結(jié)構(gòu)域內(nèi)的補(bǔ)體結(jié)合點(diǎn)暴露
,從而通過(guò)經(jīng)典途徑激活補(bǔ)體系統(tǒng),產(chǎn)生多種效應(yīng)功能
,其中IgM
、IgG1和IgG3激活補(bǔ)體系統(tǒng)的能力較強(qiáng),IgG2較弱
。IgA、IgE和IgG4本身難以激活補(bǔ)體
,但在形成聚合物后可通過(guò)旁路途徑激活補(bǔ)體系統(tǒng)
。通常情況下,lgD不能激活補(bǔ)體
。[3]

、調(diào)理吞噬和ADCCIgG可通過(guò)其Fc段與表面具有相應(yīng)受體的細(xì)胞結(jié)合,產(chǎn)生不同的生物學(xué)作用

1.調(diào)理作用(opsonization) 指IgG抗體(特別是IgG1和IgG3)的Fc段與中性粒細(xì)胞

、巨噬細(xì)胞表面相應(yīng)的Fc受體結(jié)合,從而增強(qiáng)吞噬細(xì)胞的吞噬作用
。例如,細(xì)菌特異性的IgG抗體可通過(guò)其Fab段與相應(yīng)的細(xì)菌抗原結(jié)合后
,以其Fc段與巨噬細(xì)胞或中性粒細(xì)胞表面相應(yīng)的Fc受體結(jié)合
,通過(guò)IgG的Fab段和Fc段的“橋聯(lián)”作用,促進(jìn)吞噬細(xì)胞對(duì)細(xì)菌的吞噬
。[3]

2.抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用(antibody-dependent cell—mediated cytotoxicity,ADCC) 指具E有殺傷活性的細(xì)胞(如NK細(xì)胞)通過(guò)其表面的Fc受體識(shí)別包被于靶細(xì)胞表面抗原(如病毒感染細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞)上的抗體的Fc段

,直接殺傷靶細(xì)胞
。 NK細(xì)胞是介導(dǎo)ADCC的主要細(xì)胞?div id="m50uktp" class="box-center"> ?贵w與靶細(xì)胞上的抗原結(jié)合是特異性的,而表達(dá)Fc受體細(xì)胞的殺傷作用是非特異性的[3]

、介導(dǎo) I 型超敏反應(yīng)IgE為親細(xì)胞抗體,可通過(guò)其Fc段與肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞表面的IgE高親和力Fc受體結(jié)合
,使其致敏。當(dāng)相同的變應(yīng)原再次進(jìn)入機(jī)體時(shí)
,可以直接與致敏靶細(xì)胞表面的特異性IgE結(jié)合
,促使這些細(xì)胞合成和釋放生物活性物質(zhì),引起I型超敏反應(yīng)
。[3]

五、穿過(guò)胎盤屏障和黏膜在人類

,lgG是唯一能夠通過(guò)胎盤的抗體
。胎盤母體一側(cè)的滋養(yǎng)層細(xì)胞可表達(dá)一種特異性的IgG輸送蛋白,稱為FcRn
。IgG可選擇性地與FcRn結(jié)合
,從而轉(zhuǎn)移到滋養(yǎng)層細(xì)胞內(nèi)
,并主動(dòng)進(jìn)入胎兒的血循環(huán)中。IgG穿過(guò)胎盤的作用在于這是一種重要的自然被動(dòng)免疫機(jī)制,對(duì)于新生兒抗感染具有重要意義
。另外,sigA可通過(guò)呼吸道和消化道的黏膜
,在黏膜局部免疫中發(fā)揮重要的免疫防御作用

二、抗體的多樣性

人血清中的抗體多種多樣

,B淋巴細(xì)胞可產(chǎn)生的抗體種類在108以上,可與眾多不同抗原發(fā)生特異性結(jié)合
?div id="jpandex" class="focus-wrap mb20 cf">?贵w多樣性的原因主要有兩方面:

1.外源性因素環(huán)境中抗原種類甚多,每種大分子抗原又有多種抗原表位

,每種抗原表位均可選擇激活體內(nèi)一個(gè)B細(xì)胞克隆
,產(chǎn)生一種特異性抗體

2.內(nèi)源性因素抗體多樣性的另一個(gè)原因是由基因的結(jié)構(gòu)及功能特征所決定的

。編碼人Ig重鏈及κ、λ型輕鏈的基因分別位于第14
、2
、22號(hào)染色體上
。其中編碼Ig重鏈的基因包括編碼可變區(qū)的V
、D、J及編碼恒定區(qū)的C基因
;編碼Ig輕鏈的基因包括編碼可變區(qū)的V
、J及編碼恒定區(qū)的C基因
。每種基因片段是以多拷貝的形式存在
,其中編碼重鏈V區(qū)的VH、DH和JH的基因片段數(shù)分別為50
、23和6個(gè);編碼K輕鏈V區(qū)的Vx和JK基因片段數(shù)分別為60和5個(gè)
,編碼入輕鏈V區(qū)的VX和J入基因片段數(shù)分別為30和7個(gè)
。這些基因在胚系階段以分隔的形式存在。在B細(xì)胞的分化發(fā)育過(guò)程中
,這些基因片段發(fā)生重排和組合
,從而產(chǎn)生數(shù)量巨大、能識(shí)別特異性抗原的BCR
。每種具有特異性BCR的B細(xì)胞克隆可識(shí)別相應(yīng)的抗原
,產(chǎn)生一種特異性抗體。Ig基因重組是B細(xì)胞合成無(wú)數(shù)特異性抗體的主要原因

三、抗體檢測(cè)的特殊情況

對(duì)許多疾病的預(yù)后及機(jī)體免疫狀況的觀察

,也并非特異性抗體檢測(cè)可以完全替代的
。另一類情況,對(duì)某些疾病的診斷
,檢測(cè)抗原的意義并不大
,而依靠的是對(duì)這些抗原所引起機(jī)體產(chǎn)生抗體的檢測(cè)
,而這些抗體是致病因素之一
,也是臨床診斷的重要依據(jù)。自身免疫病中自身抗體的檢出就是最好的例子之一
。結(jié)締組織病與自身抗體的關(guān)系
,可能是研究最多的一類疾病
。事實(shí)上
,其他如呼吸、消化
、泌尿
、心血管
、血液
、內(nèi)分泌、神經(jīng)等系統(tǒng)的一些疾病都與自身免疫有關(guān)
,都可檢測(cè)到相應(yīng)的自身抗體
,如胰島素依賴型糖尿病與胰島細(xì)胞抗體
、橋本氏甲狀腺炎與甲狀腺微粒體抗體
、重癥肌無(wú)力癥與乙酰膽堿受體抗體等等的關(guān)系已得到公認(rèn);還有
,不孕癥和衰老與自身抗體關(guān)系的研究也正在不斷深入
;自身受體抗體的研究
,亦具有廣泛的應(yīng)用前景
。由此可見(jiàn)
,自身抗體的檢測(cè)對(duì)于許多疾病的診斷或闡明致病機(jī)理都有重要價(jià)值。隨著研究的深入
,還會(huì)有更多疾病與自身免疫的關(guān)系將隨著新的自身抗體的發(fā)現(xiàn)而得以明確
。本期刊登的張學(xué)軍等和吳慶軍等的論著文章就反映了這方面工作的一些進(jìn)展
。可以設(shè)想
,自身抗體的檢測(cè)將成為大家關(guān)注的課題及臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)中一個(gè)重要的組成部分
。除自身免疫病外
,在諸如免疫缺陷病
、免疫增生性疾病、及某些型別的超敏反應(yīng)疾病的診斷中
,需檢測(cè)的也是各類免疫球蛋白
,而不是抗原。

、抗體檢測(cè)的注意事項(xiàng)

為了保證試驗(yàn)的特異性和敏感性,無(wú)論是顆粒性抗原

、組織提取物
、多肽抗原、重組抗原都必須純化
,否則容易產(chǎn)生非特異性反應(yīng)。在應(yīng)用標(biāo)記免疫分析中
,可引起本底數(shù)值的增高
,極大地影響試驗(yàn)的準(zhǔn)確性。在檢測(cè)自身抗體時(shí)
,許多抗原是用組織提取物
,更應(yīng)注意抗原的純化問(wèn)題
。由于不同組織
、器官間可存在相同抗原成分,使得同一自身免疫病
,可檢出幾種不同自身抗體
,同一自身抗體又可出現(xiàn)在不同自身免疫病中
,這就影響了檢驗(yàn)的特異性
。因此提示我們
,關(guān)于這方面特異性抗原的提取、純化和合成
,還有許多工作要做
,是一項(xiàng)任重道遠(yuǎn)的任務(wù)
。還必須指出
,無(wú)論檢測(cè)哪一種抗體,所用抗原的片段或成分的不同
,都可影響其特異性及敏感性
。因此采用一種新抗原時(shí)
,需要進(jìn)行嚴(yán)格對(duì)照
,方可確定其應(yīng)用價(jià)值。

必須明確

,不同的檢測(cè)方法
,靈敏度
、準(zhǔn)確性
、重復(fù)性并不完全相同,加上試劑盒質(zhì)量不一
,都影響到試驗(yàn)結(jié)果
。在應(yīng)用或建立一個(gè)方法時(shí),檢測(cè)系統(tǒng)中所有成分的濃度必須經(jīng)過(guò)嚴(yán)格滴定
,選擇最恰當(dāng)?shù)臐舛确秶@缑嘎?lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)
,抗原及酶結(jié)合物濃度低
,最后吸光度值太小,易出現(xiàn)假陰性
,如濃度太高,吸光度值偏大
,甚至移到標(biāo)準(zhǔn)曲線的平臺(tái)
,即處于不敏感的范圍便會(huì)明顯影響結(jié)果的可靠性。

抗體有保護(hù)性抗體

,非保護(hù)性抗體之分
,有些抗體的水平達(dá)到高峰后旋即下降乃至消失,有些抗體可長(zhǎng)期存在直至終身
。如乙肝核心抗體(抗-HBc)
,陽(yáng)性率可高達(dá)70%左右,臨床醫(yī)生常因此產(chǎn)生困惑
。其實(shí)這是抗-HBc的總抗體
,可能長(zhǎng)期存在
。如其滴度低
,即為既往感染過(guò)乙肝,有流行病學(xué)意義
,高滴度才有臨床診斷意義。再如自身抗體測(cè)定中
,少數(shù)正常人也存在有少量自身抗體,它不僅對(duì)機(jī)體無(wú)害
,而且能幫助機(jī)體清除衰老及變質(zhì)的細(xì)胞對(duì)機(jī)體有利
。另外,在臨床診斷中
,須針對(duì)不同發(fā)病機(jī)理檢測(cè)相應(yīng)抗體
,如I型超敏反應(yīng)應(yīng)檢測(cè)IgE
,而在Ⅱ型超敏反應(yīng)主要測(cè)IgG
、IgM型抗體,又如鼻咽癌患者查的是EB病毒殼膜抗原-IgA(IgA/VCA抗體)
。另外抗體測(cè)定和其他檢驗(yàn)一樣
,存在著假陽(yáng)性、假陰性的問(wèn)題
,可能由于方法學(xué)的不完善引起,或者由于機(jī)體反應(yīng)性的不同所致
,在解釋結(jié)果時(shí)務(wù)必注意

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