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美新技術(shù)同時(shí)精確測(cè)量多個(gè)細(xì)胞體重

佚名 2024-06-04 08:14:11

2016年09月05日訊 最近

,美國(guó)麻省理工學(xué)院(MIT)發(fā)明的一種新技術(shù)
,可以同時(shí)精確地測(cè)量許多單細(xì)胞的生長(zhǎng)。這一進(jìn)展有望帶來快速的藥物測(cè)試,對(duì)“更大細(xì)胞群體中單個(gè)細(xì)胞之間的生長(zhǎng)差異”提供了新的見解
,并有助于跟蹤不斷變化的環(huán)境條件下的細(xì)胞動(dòng)態(tài)生長(zhǎng)。這一技術(shù)發(fā)表在《Nature Biotechnology》雜志

這種技術(shù)利用大量的懸浮微孔道諧振器(SMR)--一種微流體裝置

,可測(cè)量流經(jīng)微孔道的大多數(shù)細(xì)胞。一種新的設(shè)計(jì)使該設(shè)備的通量增加了近兩個(gè)數(shù)量級(jí)
,同時(shí)保持精確度
。這項(xiàng)研究的資深作者、麻省理工學(xué)院的Scott Manalis教授和其他研究人員
,致力于發(fā)展SMRs已經(jīng)有近十年的時(shí)間
。2012年,他們?cè)谥把邪l(fā)的一個(gè)微流體設(shè)備(暫停通道諧振器SMR
,用來檢測(cè)細(xì)胞的重量)的基礎(chǔ)上
,進(jìn)行了大規(guī)模改動(dòng),將其用于細(xì)胞周期檢測(cè)
,可以分析單個(gè)細(xì)胞在經(jīng)過100小時(shí)生長(zhǎng)后多代的情況(Nat Methods:向阿基米德學(xué)習(xí)細(xì)胞周期檢測(cè)方法)
。在今年1月份,他們通過將復(fù)雜的RNA測(cè)序技術(shù)與分離單個(gè)細(xì)胞及其后代的新裝置相結(jié)合
,可追蹤來自一個(gè)“祖先”的幾代細(xì)胞的詳細(xì)譜系

在這項(xiàng)新的研究中,研究人員使用該設(shè)備來觀察抗生素和抗菌肽對(duì)細(xì)菌的影響

,并指出細(xì)胞群體中單個(gè)細(xì)胞的生長(zhǎng)變化
,這具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。例如
,生長(zhǎng)較慢的細(xì)菌有時(shí)會(huì)對(duì)抗生素產(chǎn)生耐藥性
,并可能導(dǎo)致復(fù)發(fā)性的感染。

麻省理工學(xué)院生物工程和機(jī)械工程系教授Manalis表示:“該設(shè)備對(duì)于細(xì)胞如何生長(zhǎng)并對(duì)藥物產(chǎn)生反應(yīng)

,提供了新的見解
。”該論文的第一作者是Nathan Cermak--最近從麻省理工學(xué)院計(jì)算和系統(tǒng)生物學(xué)項(xiàng)目畢業(yè)的博士生
,和Selim Olcum--Koch研究所的科學(xué)家
。其他13名共同作者來自于Koch研究所、MIT微系統(tǒng)技術(shù)實(shí)驗(yàn)室
、Dana-Farber癌癥研究所
、Innovative Micro Technology和CEA LETI。

Manalis和他的同事們?cè)?007年首次開發(fā)了SMR

,后來推出了多種創(chuàng)新用于不同的目的
,包括隨時(shí)間的推移跟蹤單個(gè)細(xì)胞的生長(zhǎng)
、測(cè)量細(xì)胞密度、稱量細(xì)胞分泌的囊泡
,就在最近
,測(cè)量不斷變化的營(yíng)養(yǎng)條件下細(xì)胞的短期生長(zhǎng)反應(yīng)。

所有這些技術(shù)都依賴于一個(gè)關(guān)鍵的方案:一條充滿液體的微通道

,被蝕刻在一個(gè)微小的硅懸臂梁傳感器上
,它在一個(gè)真空腔中震動(dòng)。當(dāng)一個(gè)細(xì)胞進(jìn)入懸臂梁時(shí)
,它會(huì)稍微改變傳感器的振動(dòng)頻率
,這個(gè)信號(hào)可以用來確定細(xì)胞的重量。為了測(cè)量一個(gè)細(xì)胞的生長(zhǎng)速率
,Manalis和同事們讓單個(gè)細(xì)胞反復(fù)來回地通過通道
,經(jīng)過了約20分鐘的一段時(shí)間。在這段時(shí)間里
,一個(gè)細(xì)胞可以積累的質(zhì)量可以通過SMR加以衡量
。雖然SMR稱量細(xì)胞的重量,可能比其他方法精確10到100倍
,但是它被限制在每次一個(gè)細(xì)胞
,從而意味著它可能需要幾個(gè)小時(shí),甚至幾天的時(shí)間
,才能測(cè)量足夠多的細(xì)胞

這一新技術(shù)的關(guān)鍵在于,設(shè)計(jì)和控制一批(10到12個(gè))懸臂傳感器

,它們就像稱重站
,當(dāng)每個(gè)細(xì)胞流經(jīng)這個(gè)郵票大小的設(shè)備時(shí),它會(huì)記錄每個(gè)細(xì)胞的質(zhì)量
。在每個(gè)傳感器之間是彎曲的“延遲通道”
,每一個(gè)長(zhǎng)度約五厘米,細(xì)胞流經(jīng)它的時(shí)間約為兩分鐘
,從而使它們?cè)诘竭_(dá)下一個(gè)傳感器之前有時(shí)間生長(zhǎng)
。當(dāng)一個(gè)細(xì)胞退出一個(gè)傳感器時(shí),另一個(gè)細(xì)胞可以進(jìn)入
,從而增加了設(shè)備的吞吐量
。這些結(jié)果顯示了每個(gè)傳感器上的每一個(gè)細(xì)胞的質(zhì)量,將它們生長(zhǎng)或縮小的程度用圖形繪制出來

在這項(xiàng)研究中

,研究人員每小時(shí)能夠測(cè)量大約60個(gè)哺乳動(dòng)物細(xì)胞和150種細(xì)菌,而單一的SMR在同一時(shí)間內(nèi)只能測(cè)量幾個(gè)細(xì)胞
。Cermak說:“能夠快速測(cè)量生長(zhǎng)速率的完整分布
,告訴我們典型的細(xì)胞是如何表現(xiàn)的,也讓我們發(fā)現(xiàn)異常值--這在以前是很難
,因?yàn)橥掏铝亢途榷际怯邢薜?div id="4qifd00" class="flower right">
。?/p>

同時(shí)測(cè)量許多單細(xì)胞的一種類似方法

,被稱為定量相顯微鏡(QPM)
,其通過測(cè)量細(xì)胞的光學(xué)厚度來計(jì)算細(xì)胞的干重。不同于SMR為基礎(chǔ)的方法
,QPM可以用于生長(zhǎng)粘附在表面的細(xì)胞
。然而,SMR法更加精確
。Olcum說:“我們能夠在約20分鐘的時(shí)間里
,可靠地解決一個(gè)癌癥細(xì)胞質(zhì)量的不到百分之0.1。這個(gè)精度已被證明對(duì)于許多臨床應(yīng)用是必不可少的
,也是我們一直追求的
。”

在使用該裝置的一個(gè)實(shí)驗(yàn)中

,研究人員觀察到了一種抗生素(稱為卡那霉素)對(duì)大腸桿菌的作用
。卡那霉素可抑制細(xì)菌中蛋白質(zhì)的合成
,最終停止它們的生長(zhǎng)并殺死細(xì)胞

傳統(tǒng)的抗生素測(cè)試需要培養(yǎng)細(xì)菌,這可能需要一天或更多的時(shí)間

。使用這種新的設(shè)備
,在一個(gè)小時(shí)內(nèi),研究人員就能記錄下細(xì)胞積累質(zhì)量的變化率
。記錄時(shí)間減少
,是測(cè)試藥物對(duì)抗臨床細(xì)菌感染的關(guān)鍵,Manalis說:“在某些情況下
,有一個(gè)快速檢測(cè)法用于選擇抗生素
,可使患者生存率帶來重大的變化?div id="m50uktp" class="box-center"> !?/p>

同樣

,研究人員使用該裝置來觀察抗菌肽(稱為CM15)對(duì)細(xì)菌的影響。這種候選抗菌劑越來越重要
,因?yàn)榧?xì)菌菌株對(duì)普通抗生素產(chǎn)生了耐藥性
。CM15可在細(xì)菌的細(xì)胞壁產(chǎn)生微小的孔,這就使得細(xì)胞的內(nèi)容物逐漸泄漏出來
,從而最終殺死細(xì)胞
。然而
,因?yàn)橹挥屑?xì)胞的質(zhì)量發(fā)生變化,而它的大小卻不發(fā)生變化
,所以
,傳統(tǒng)的顯微鏡技術(shù)可能會(huì)漏掉一些影響。事實(shí)上
,研究人員觀察到
,大腸桿菌細(xì)胞在暴露CM15后就迅速失去質(zhì)量。Manalis說
,這些結(jié)果通過對(duì)該機(jī)制提出一些見解
,可以為肽和其他新型藥物提供驗(yàn)證。

研究人員目前正在與Dana Farber癌癥研究所的成員合作

,通過麻省理工學(xué)院/ DFCI Bridge項(xiàng)目
,來確定是否可以用該設(shè)備,在抗癌藥物存在時(shí)
,通過測(cè)量腫瘤細(xì)胞的腫瘤
,來預(yù)測(cè)患者對(duì)治療的反應(yīng)。

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