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探索神秘的微生物群落

佚名 2024-06-04 08:54:39

2016年09月03日訊 微生物雖然看不見

,但卻是無處不在的
。人體的腸道和皮膚
、地球的海洋和土壤,甚至植物的葉片和種子
,都有它們的身影
。在大多數(shù)情況下,這些微生物群落是由許多不同的物種組成的
。研究人員試圖鑒定這些微生物群落的組成,但相當(dāng)有難度
。Sarah Webb在這一期的《BioTechniques》上介紹了目前的進展

如今,新一代測序(NGS)

、質(zhì)譜(MS)和顯微鏡等技術(shù)正幫助多個領(lǐng)域的科學(xué)家慢慢了解各種微生物群落的基本組成和行為
。大部分的工作集中在結(jié)構(gòu)與功能的基本關(guān)系
,比如控制生物膜行為的那些

生物膜(Biofilm)是通過附著而固定在特定載體上的微生物群落。在這些群落中

,細菌扮演著不同的角色
,因為它們經(jīng)歷了不同的化學(xué)和物理環(huán)境
。賓漢姆頓大學(xué)的Karin Sauer正應(yīng)用各種分子遺傳學(xué)技術(shù)來研究生物膜的形成
,并利用蛋白質(zhì)組學(xué)和轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)來尋找一些基因
,比如耐受抗生素的基因。

化學(xué)成分

哥倫比亞大學(xué)的微生物學(xué)家Lars Dietrich表示:“我們知道生物膜釋放了許多代謝產(chǎn)物

,一些是信號分子
,一些是營養(yǎng)成分
。不過,它們在生物膜中究竟如何分布
?這很難觀察
。”為了了解生物膜中的化學(xué)信號
,人們需要精確定位和分析化學(xué)物質(zhì)的空間分布。

一些研究人員使用質(zhì)譜來確定生物膜內(nèi)的化學(xué)圖像

。加州大學(xué)圣地亞哥分校的Pieter Dorrestein就是在微生物系統(tǒng)中使用成像質(zhì)譜(IMS)的先驅(qū)之一
。在IMS中,研究人員對生物膜表面進行光柵成像
,收集化學(xué)數(shù)據(jù)
,并組裝成二維圖像。Dorrestein利用這種技術(shù)來研究微生物之間的相互作用

盡管IMS技術(shù)很強大,也相對通用

,但它也有一些缺點
。這種方法需要樣品制備,也是一種破壞性的技術(shù)
,因此
,即使IMS能夠給出生物膜的詳細快照
,但它不能用于長期的追蹤
。基于這個理由
,研究人員還在開發(fā)其他的工具

氧化還原電位

哥倫比亞大學(xué)的生物學(xué)家和工程師已經(jīng)開發(fā)出另一種工具:電化學(xué)芯片。微生物學(xué)家Lars Dietrich在研究銅綠假單胞菌

,他對化學(xué)和細胞形態(tài)學(xué)之間的關(guān)聯(lián)特別感興趣
。之前的研究表明,吩嗪這種氧化還原小分子可作為分子通氣管
,促進氧氣在生物膜中的運動
。盡管IMS能夠提供一些信息
,但Dietrich希望確定吩嗪是處于氧化狀態(tài)還是還原狀態(tài)。

為了解決這個問題

,Dietrich與工程師Ken Shepard聯(lián)手
。他們開發(fā)出一種芯片,可測定表面的氧化還原電位
。這種64 mm2的芯片上由1800個電極
,每3分鐘可測量一次。在最近一篇發(fā)表于PNAS的文章中
,他們利用此芯片來追蹤氧化還原吩嗪的運輸

單分子顯微鏡

熒光顯微鏡也被廣泛用于生物膜結(jié)構(gòu)的研究,通常是利用熒光報告基團的染色來跟蹤感興趣基因的表達

。最近
,普林斯頓大學(xué)的Bonnie Bassler小組向前邁進了一步。他們以單細胞分辨率來研究霍亂弧菌的生物膜

盡管使用旋轉(zhuǎn)盤共聚焦顯微鏡來減少光漂白

,但研究小組需要對光束路徑進行調(diào)整,以改善z軸的深度分辨率
,讓他們達到35 μm的深度
,這與之前的顯微鏡方法相比增加了10倍。最終
,他們能夠完整描述霍亂弧菌生物膜形成的四個階段

測序及多組學(xué)分析

觀察生物膜的形成是一件事,但研究人員也希望了解這些細菌群落中的基因和蛋白質(zhì)

。毫無疑問
,NGS也是研究微生物群落的一種有力工具。Pacific Northwest國家實驗室的Janet Jansson認為
,實驗技術(shù)已經(jīng)大大改善,特別是測序
?div id="m50uktp" class="box-center"> !叭缃駵y序不是瓶頸,數(shù)據(jù)解釋才是
,”她說

Jansson的研究小組開發(fā)出一種方法,用土壤的片段化DNA序列來組裝微生物基因組

。為了改善組裝,他們使用了Illumina的Moleculo這種長讀取技術(shù)
,這讓他們能夠獲得數(shù)千個超過10 kb的contig序列
。這些序列可作為支架
,來組裝更小但更高分辨率的片段。在最近的一篇文章中
,研究小組獲得了數(shù)百個基因組
,它們代表了無法培養(yǎng)的微生物

當(dāng)然

,DNA只能說出一部分的故事。隨著研究人員試圖了解功能
,他們將宏基因組學(xué)與傳統(tǒng)的功能分析結(jié)合起來
,以了解感興趣的活性
。此外,宏轉(zhuǎn)錄組學(xué)則是宏基因組學(xué)的自然擴展
,可提供微生物基因表達的信息
。在同一項研究中,Jansson及其同事利用宏轉(zhuǎn)錄組學(xué)來查看哪些微生物是活躍的

宏蛋白質(zhì)組學(xué)和代謝組學(xué)則是評估生物膜功能的另外兩種技術(shù)

。不過,缺乏參考數(shù)據(jù)讓實驗有點復(fù)雜
;基因、蛋白和代謝物的數(shù)據(jù)庫這么少
,使得人們很難做出有意義的評估
。眼下,宏蛋白質(zhì)組學(xué)只能評估土壤樣品中的幾千個蛋白
。不過情況正在慢慢改善
,人們對微生物群落的了解也在慢慢加深

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