Nature：神秘lncRNA讓免疫無(wú)過(guò)無(wú)不及

Nature：神秘lncRNA讓免疫無(wú)過(guò)無(wú)不及

2016年08月27日訊 根據(jù)賓夕法尼亞大學(xué)Perelman醫(yī)學(xué)院病理學(xué)和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)助理教授Jorge Henao-Mejia博士領(lǐng)導(dǎo)的一項(xiàng)研究，稱作長(zhǎng)鏈非編碼（lncRNAs）的特殊RNA分子是維持免疫健康的關(guān)鍵控制因子。這一研究發(fā)現(xiàn)為以一組白細(xì)胞異常壽命為特征的一些炎癥性疾病提供了一個(gè)潛在藥物靶點(diǎn)。研究論文發(fā)布在《自然》（Nature）雜志上。

2013年，當(dāng)Henao-Mejia還在當(dāng)前研究共同作者、耶魯大學(xué)Richard Flavell的實(shí)驗(yàn)室做博士后研究員時(shí)，發(fā)現(xiàn)了稱作Morrbid的一種lncRNA的編碼基因。在2014年于Perelman醫(yī)學(xué)院建立自己的實(shí)驗(yàn)室后，Henao-Mejia和他的學(xué)生們領(lǐng)導(dǎo)這一研究小組最終鑒別出了表達(dá)Morrbid的免疫細(xì)胞，并闡明了Morrbid的作用以及它調(diào)控免疫細(xì)胞壽命的機(jī)制。

長(zhǎng)鏈非編碼RNAs是由一些基因轉(zhuǎn)錄生成，在細(xì)胞中通常含量豐富，但它們不編碼蛋白質(zhì)。人類基因組包含大約2萬(wàn)個(gè)蛋白質(zhì)編碼基因，占據(jù)基因組不到2%，而70%的人類基因組積極地生成了大約1萬(wàn)種lncRNAs，其中大多數(shù)lncRNAs的功能未知。

研究小組發(fā)現(xiàn)Morrbid控制了循環(huán)骨髓細(xì)胞的壽命，這些細(xì)胞對(duì)于維持抗感染與炎癥之間的適當(dāng)平衡至關(guān)重要。Morrbid編碼基因在包括小鼠和人類在內(nèi)的不同物種間非常保守，為某些免疫細(xì)胞--中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞所特有。

這些細(xì)胞類型構(gòu)成了70%的循環(huán)白細(xì)胞，但它們能非常強(qiáng)有力地做出反應(yīng)，有時(shí)甚至強(qiáng)烈到可以對(duì)周圍健康的組織造成損傷。那么身體是如何控制這一最初過(guò)分狂熱的看門(mén)狗反應(yīng)的呢？身體如何知道何時(shí)告知細(xì)胞退卻？其機(jī)制為何？

Henao-Mejia說(shuō)：“這些細(xì)胞極其短壽--不到一天，它們的壽命受到嚴(yán)格地調(diào)控以滿足生物體的需求。如果我們了解了它們的壽命受到嚴(yán)格調(diào)控的分子機(jī)制，當(dāng)這種控制出錯(cuò)或升級(jí)，當(dāng)有需要時(shí)，或許我們可以糾正它?！?/p>

Morrbid通過(guò)控制鄰近基因Bim的表達(dá)調(diào)控了細(xì)胞的壽命。Bim可響應(yīng)細(xì)胞外周圍環(huán)境中豐富的促生存細(xì)胞因子和代謝物控制程序性細(xì)胞死亡。Morrbid實(shí)際上壓倒了阻止免疫細(xì)胞過(guò)早死亡的一個(gè)信號(hào)機(jī)制。

通過(guò)刪除小鼠的Morrbid，研究小組促使大幅度減少了正常表達(dá)Morrbid的免疫細(xì)胞頻率。因此，小鼠對(duì)抗感染的能力降低，但獲得了對(duì)炎癥的抵抗力。

在嗜酸性粒細(xì)胞增多癥（hypereosinophilic syndrome）患者中，人類版本的基因MORRBID表達(dá)受損，一些免疫細(xì)胞的壽命不受限制，會(huì)導(dǎo)致炎癥和器官受損。Henao-Mejia說(shuō)：“知道了這一點(diǎn)，Morrbid或許是這一少見(jiàn)病一個(gè)極好的藥物靶點(diǎn)，甚至可能對(duì)哮喘、炎性腸病、肥胖或癌癥一類的慢性疾病具有潛在的作用，所有這些疾病都對(duì)應(yīng)它們的癥狀具有一個(gè)錯(cuò)誤的炎癥元件。在不久的將來(lái)，我們希望集中精力開(kāi)發(fā)出一些策略來(lái)調(diào)節(jié)人類細(xì)胞中的MORRBID功能，作為對(duì)抗炎癥疾病的一種有效治療工具?！?/p>

炎癥小體是在細(xì)胞感染或壓力情況下激活的分子平臺(tái)，其能夠觸動(dòng)激活半胱氨酸蛋白酶caspase-1，導(dǎo)致促炎癥細(xì)胞因子IL-1β和IL-18成熟與分泌。來(lái)自中山大學(xué)、休斯頓衛(wèi)理公會(huì)醫(yī)院研究所等機(jī)構(gòu)的研究人員證實(shí)，TRIM11通過(guò)p62依賴性的選擇性自噬降解AIM2抑制了AIM2炎癥小體。

麻省大學(xué)醫(yī)學(xué)院的一個(gè)科學(xué)家小組發(fā)現(xiàn)了，負(fù)責(zé)調(diào)控天然免疫的一種長(zhǎng)鏈非編碼RNA：lincRNA-EPS。這項(xiàng)研究發(fā)布在2016年6月的Cell雜志上。在巨噬細(xì)胞中大量表達(dá)的lincRNA-EPS，將觸發(fā)炎癥的一些基因維持在關(guān)閉狀態(tài)直至遭遇到病原體。這一研究發(fā)現(xiàn)指出了lincRNAs在免疫系統(tǒng)中從前未知的一種作用，有可能促成對(duì)失控性免疫反應(yīng)引起的一些炎癥疾病，如紅斑狼瘡或炎癥性腸病的新認(rèn)識(shí)（Cell文章揭示重要的lincRNA ）。

急性炎癥是對(duì)組織損傷或感染做出的一種生理反應(yīng)，其具有自限性，通常對(duì)宿主有益；然而，不受控制的炎癥高度有害，是許多廣泛發(fā)生的疾病如動(dòng)脈粥樣硬化、肥胖癥和癌癥的基礎(chǔ)。來(lái)自第三軍醫(yī)大學(xué)的研究人員證實(shí)，吞噬細(xì)胞呼吸爆發(fā)激活了巨噬細(xì)胞促紅細(xì)胞生成素（erythropoietin）信號(hào)，促進(jìn)了急性炎癥消退。

Nature子刊綜述幫你總結(jié)知識(shí)點(diǎn)：癌癥中的RNA，每個(gè)都是研究熱點(diǎn)

基因表達(dá)紊亂是癌癥的一個(gè)主要標(biāo)志。事實(shí)上，轉(zhuǎn)錄因子活動(dòng)的改變已被證明是一些癌癥最常見(jiàn)亞型的驅(qū)動(dòng)因素。RNA對(duì)基因表達(dá)至關(guān)重要，無(wú)論是以蛋白編碼RNA（mRNAs）的形式，還是以參與和調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄的非編碼RNA形式（lncRNAs或snRNA）、剪接（snRNAs）和翻譯（核糖體RNAs、tRNAs和microRNAs）。 最近的證據(jù)表明，RNA的加工在癌癥中被系統(tǒng)改變，證明RNA對(duì)腫瘤發(fā)生、生長(zhǎng)和進(jìn)展的重要影響。

2020年10月，來(lái)自澳大利亞的研究人員在《 Nature Reviews Cancer 》發(fā)表題為“RNA in cancer”的綜述， 討論了編碼和非編碼RNA的加工或活性改變?nèi)绾未龠M(jìn)腫瘤的發(fā)生、生長(zhǎng)和進(jìn)展，強(qiáng)調(diào)了RNA在癌癥中的既定角色（miRNA和lncRNA）和新興角色（選擇性mRNA加工和circRNA）以及它們對(duì)癌癥的作用機(jī)制。

一旦RNA聚合酶II合成了 mRNA ，它必須首先剪接并進(jìn)一步加工成成熟的轉(zhuǎn)錄物，然后從細(xì)胞核輸出到細(xì)胞質(zhì)，轉(zhuǎn)化為蛋白質(zhì)。這些相互連接的處理步驟是由許多大分子復(fù)合物完成的，例如剪接體和轉(zhuǎn)錄-輸出復(fù)合物TREX和TREX2。

在生理?xiàng)l件下，基因表達(dá)也可以通過(guò)一些 非編碼RNA ，包括miRNAs、lncRNAs和circRNAs來(lái)調(diào)節(jié)。通常，miRNAs通過(guò)加速靶基因的去乙?；徒到鈦?lái)負(fù)調(diào)控基因的表達(dá)，而lncRNAs則通過(guò)作為調(diào)節(jié)蛋白復(fù)合物的支架、定位到基因組DNA或改變基因組結(jié)構(gòu)來(lái)調(diào)節(jié)順式或反式的基因表達(dá)。

許多miRNAs被發(fā)現(xiàn)與癌癥相關(guān)，要么作為腫瘤抑制因子，要么作為癌基因。

miRNA的作用： 人類細(xì)胞中大多數(shù)蛋白質(zhì)的表達(dá)水平受到一個(gè)或多個(gè)miRNA的某種程度的調(diào)控。單個(gè)miRNA可以具有許多mRNA靶標(biāo)，而單個(gè)mRNA可以被多個(gè)miRNA靶向。盡管miRNA可以共同作用，以抑制在3'非翻譯區(qū)（UTR）中具有多個(gè)miRNA結(jié)合位點(diǎn)的靶標(biāo)的表達(dá)，僅一種類型的miRNA與靶標(biāo)mRNA的結(jié)合導(dǎo)致相對(duì)溫和減少靶基因表達(dá)。通過(guò)RNA測(cè)序已經(jīng)檢測(cè)到1000多種不同的miRNA。一些miRNAs，如腫瘤抑制因子let-7，在幾乎每種細(xì)胞類型中都有大量表達(dá)，而另一些miRNAs具有高度的細(xì)胞類型特異性表達(dá)，或者在某些細(xì)胞類型中以非常低的水平存在或不存在。因此在檢測(cè)低表達(dá)的miRNAs的可能影響時(shí)，需要謹(jǐn)慎。

致癌和抑癌的miRNA：

1. 靶向致癌途徑負(fù)調(diào)控因子的miRNAs在失調(diào)時(shí)可能通過(guò)多個(gè)靶點(diǎn)抑制RAS-MEK-ERK信號(hào)和miR-155/miR-221，它們分別針對(duì)SHIP1（也稱為INPP5D）和PTEN，這兩個(gè)都是AKT信號(hào)的負(fù)調(diào)節(jié)器。

2. 在癌癥中最常見(jiàn)減少的miRNA是let-7 miRNA突變體，它通過(guò)靶向強(qiáng)效癌基因，包括MYC、KRAS和HMGA2作為主要的腫瘤抑制因子。因此，let-7 miRNAs被認(rèn)為是一個(gè)重要的治療靶標(biāo)。

3. 大量miRNAs也被報(bào)道通過(guò)限制或逆轉(zhuǎn)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）來(lái)限制轉(zhuǎn)移和/或化療耐藥，其中最有效的是miR-200家族。

miRNA失調(diào)的機(jī)制： miRNA基因由RNA聚合酶II轉(zhuǎn)錄，因此受到與蛋白質(zhì)編碼基因相同類型的表觀遺傳調(diào)控。事實(shí)上，許多miRNA基因都來(lái)自于蛋白質(zhì)編碼基因的內(nèi)含子。在癌癥中有許多關(guān)于miRNAs表觀遺傳失調(diào)的報(bào)道。 癌癥中miRNA表達(dá)水平廣泛下調(diào)的一種模式是源于缺氧誘導(dǎo)的癌細(xì)胞中Drosha和Dicer表達(dá)水平的降低 ，以及AGO2的磷酸化 ，進(jìn)而降低了Dicer與AGO2并抑制miRNA從前體到成熟miRNA的加工。 然而，并不是所有的miRNAs都會(huì)受到缺氧的下調(diào)， 例如，miR-210的轉(zhuǎn)錄誘導(dǎo)可以覆蓋缺氧誘導(dǎo)的加工減少，并且可以抑制免疫缺陷小鼠腫瘤生長(zhǎng)的啟動(dòng)，但也可以促進(jìn)細(xì)胞在腫瘤缺氧的應(yīng)激環(huán)境中的適應(yīng)和生存。 miRNAs下調(diào)的另一個(gè)機(jī)制可能是由于基因突變或前miRNAs轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白exportin 5（XPO5）磷酸化水平的變化而減少核的輸出。

lncRNAs已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)具有致癌或腫瘤抑制功能。

lncRNAs的作用： lncRNAs是指長(zhǎng)度超過(guò)200個(gè)核苷酸不編碼蛋白質(zhì)的RNA。與mRNAs一樣，它們由RNA聚合酶II轉(zhuǎn)錄，但與mRNAs不同， 許多l(xiāng)ncRNAs優(yōu)先定位于細(xì)胞核。它們具有不同的功能，包括核作用，如調(diào)節(jié)順式或反式中的基因表達(dá)，調(diào)節(jié)剪接以及亞單位透明結(jié)構(gòu)域的成核。2010年，lncRNA HOTAIR通過(guò)參與染色質(zhì)重塑促進(jìn)乳腺癌轉(zhuǎn)移，隨后發(fā)現(xiàn)許多l(xiāng)ncRNA具有影響癌癥發(fā)展或進(jìn)展的功能。一些lncRNAs可能具有多種看似不相關(guān)的功能。 例如，lincRNA-p21最初被鑒定為p53誘導(dǎo)的腫瘤抑制因子lncRNA80，并被證明介導(dǎo)異質(zhì)性核糖核蛋白K（HNRNPK）與其鄰近基因CDKN1A（編碼p21）的結(jié)合并增加其轉(zhuǎn)錄。

致癌和抑癌的lncRNA：

1. 最近的一項(xiàng)研究揭示了lncRNA-REG1CP在結(jié)直腸癌中的表達(dá)經(jīng)常上調(diào)。REG1CP通過(guò)將解旋酶FANJ與相鄰基因REG3A86的啟動(dòng)子連接，促進(jìn)結(jié)直腸癌異種移植瘤的生長(zhǎng)。

2. PCAT19是一種致癌的lncRNA，它激活反式基因，促進(jìn)前列腺癌的生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移。

3. 細(xì)胞質(zhì)lncRNAs也可能是癌基因。在MYCN擴(kuò)增的神經(jīng)母細(xì)胞瘤中過(guò)度表達(dá)的lncRNA linc0255，通過(guò)與核糖體蛋白R(shí)PL35的相互作用特別激活E2F1的翻譯。

4. lncRNAs也可以作為腫瘤抑制劑。核lncRNA DIRC3影響局部染色質(zhì)結(jié)構(gòu)，激活編碼腫瘤抑制因子IGFBP5的鄰近基因的轉(zhuǎn)錄。

5. lncRNAs也可以通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞質(zhì)中的信號(hào)來(lái)抑制腫瘤。細(xì)胞質(zhì)lncRNA-DRAIC在去勢(shì)抵抗的晚期前列腺癌中下調(diào)，并通過(guò)干擾NF-κB激酶（IKK）活性抑制劑抑制核因子-κB（NF-κB）激活來(lái)抑制其進(jìn)展。

6. 一些lncRNAs仍然有可能編碼小蛋白。事實(shí)上，lncRNA LINC00908可以產(chǎn)生一種60個(gè)氨基酸的多肽，與正常組織樣本相比，該多肽在三陰性乳腺癌組織中下調(diào)，并且與整體生存率差有關(guān)。

lncRNAs的多重對(duì)立效應(yīng)： 關(guān)于lncRNA基因在癌癥中的影響，最能說(shuō)明問(wèn)題的一個(gè)例子是考慮lncRNA基因在強(qiáng)效癌基因表達(dá)中的作用，也可能反映了MYC在驅(qū)動(dòng)對(duì)增殖和生長(zhǎng)信號(hào)的轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中所起的關(guān)鍵作用，MYC基因的轉(zhuǎn)錄受多個(gè)鄰近lncRNA基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控。這也凸顯了lncRNA基因座可以產(chǎn)生具有不同甚至相反功能的RNA。通過(guò)對(duì)小鼠體內(nèi)大量MALAT1 lncRNA進(jìn)行基因缺失研究的對(duì)比解釋，進(jìn)一步強(qiáng)調(diào)了lncRNA對(duì)基因表達(dá)影響的復(fù)雜性。

circRNA的新角色： circRNAs基本上在所有細(xì)胞和組織中都有表達(dá)，并且在癌癥中可能被錯(cuò)誤調(diào)節(jié)。circRNA主要是反向剪接事件的產(chǎn)物，它將外顯子拼接到前一個(gè)外顯子而不是下游外顯子上，從而形成共價(jià)閉合的circRNA分子。有報(bào)道稱， 一些circRNA位于細(xì)胞核內(nèi)并調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄，但大多數(shù)circRNAs位于細(xì)胞質(zhì)中。 單個(gè)細(xì)胞可以表達(dá)數(shù)千個(gè)circRNAs，通過(guò)對(duì)患者腫瘤和癌細(xì)胞系RNA的深度測(cè)序，總共檢測(cè)到超過(guò)200000個(gè)不同的circRNAs。 一些circRNAs被發(fā)現(xiàn)在癌癥中與相應(yīng)的正常組織相比過(guò)度表達(dá)，增加了它們作為疾病生物標(biāo)志物的可能性。 circRNAs有可能作為癌基因或腫瘤抑制因子發(fā)揮作用， 可能是通過(guò)充當(dāng)miRNAs的海綿，而一項(xiàng)敲除篩選表明，前列腺癌細(xì)胞中一些高度豐富的circRNAs對(duì)細(xì)胞的最大增殖至關(guān)重要，雖然還需要更多的工作來(lái)確定致癌或腫瘤抑制circRNAs。 circRNA可能還充當(dāng)多蛋白復(fù)合物的核因子或組分。

失調(diào)的circRNAs： 什么導(dǎo)致癌癥中的細(xì)胞周期失調(diào)？基因拷貝數(shù)或circRNA前體轉(zhuǎn)錄的改變無(wú)疑改變了它們?cè)谀承┌┌Y中的水平。然而，由于大多數(shù)circRNAs是來(lái)自蛋白質(zhì)編碼基因的選擇性剪接產(chǎn)物，因此需要仔細(xì)區(qū)分這些變化的影響與同源蛋白水平變化的影響。circRNA水平變化的另一種方式是通過(guò)參與circRNA生物合成的剪接因子水平的改變。

mRNA前體的剪接以去除內(nèi)含子并以不同的方式連接外顯子是基因表達(dá)的基礎(chǔ)。事實(shí)上，選擇性剪接可以通過(guò)產(chǎn)生選擇性蛋白質(zhì)亞型來(lái)促進(jìn)轉(zhuǎn)錄組和蛋白質(zhì)組的多樣性。這個(gè)過(guò)程是由主要的剪接體完成的，它執(zhí)行大多數(shù)的RNA剪接反應(yīng)，并且與300多種不同的蛋白質(zhì)相關(guān)。

一旦mRNAs被剪接和多聚腺苷酸化，它們必須從細(xì)胞核中的轉(zhuǎn)錄和加工部位輸出到細(xì)胞質(zhì)中進(jìn)行翻譯。有效的mRNA輸出是通過(guò)將基因表達(dá)途徑中的上游過(guò)程（即轉(zhuǎn)錄、剪接和多聚腺苷酸化）與mRNA輸出耦合來(lái)實(shí)現(xiàn)的。mRNA不斷地通過(guò)核孔復(fù)合體的內(nèi)部通道運(yùn)輸，使蛋白質(zhì)和分子能夠穿過(guò)核膜。 轉(zhuǎn)錄、RNA剪接和多聚腺苷酸化與mRNA輸出之間存在廣泛的耦合，對(duì)腫瘤的發(fā)生具有重要意義。

mRNA剪接的新角色： mRNA剪接在歷史上被認(rèn)為是一個(gè)內(nèi)控過(guò)程，對(duì)多外顯子基因的表達(dá)至關(guān)重要，但最近的研究結(jié)果顯示了RNA剪接機(jī)制的調(diào)控潛力。改變的mRNA剪接機(jī)制如何促進(jìn)腫瘤的發(fā)生？SRSF2、SF3B1和U2AF1的突變都不同程度地影響3′剪接位點(diǎn)識(shí)別。這種改變的剪接可能會(huì)影響編碼促進(jìn)轉(zhuǎn)化的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄物的穩(wěn)定性。

選擇性裂解和聚腺苷酸化： 在腫瘤中也廣泛觀察到下游mRNA處理步驟的改變，如前體mRNAs的裂解和多聚腺苷酸化。例如，3′UTR區(qū)在腫瘤細(xì)胞系和腫瘤標(biāo)本中均發(fā)生縮短。

選擇性mRNA輸出的新興作用： 基因表達(dá)途徑的末端步驟之一，mRNA的核輸出，在癌癥中也發(fā)生了改變。雖然mRNA輸出被認(rèn)為是基因表達(dá)中的一個(gè)普遍的、默認(rèn)的途徑，但是特定的生物途徑可以通過(guò)選擇性的mRNA輸出來(lái)調(diào)節(jié)，使某些mRNAs優(yōu)先于其他的。選擇性mRNA輸出可以調(diào)節(jié)對(duì)癌癥發(fā)展至關(guān)重要的生物學(xué)過(guò)程，如細(xì)胞增殖和基因組完整性。這種mRNA輸出機(jī)制的調(diào)節(jié)潛力可被癌細(xì)胞利用以維持增殖。

在過(guò)去的幾年里，大量的研究已經(jīng)非常詳細(xì)地揭示了RNA在癌癥中發(fā)生系統(tǒng)性改變的程度。癌癥中編碼和非編碼RNA的廣泛改變影響了腫瘤發(fā)生的多個(gè)方面。

這些不同的RNA亞型和處理它們的蛋白質(zhì)參與癌癥發(fā)生的機(jī)制特性，為治療干預(yù)提供機(jī)會(huì)。例如，一些以核心剪接體機(jī)制為靶點(diǎn)的化合物，如與SF3B復(fù)合物結(jié)合的E7107，在體內(nèi)影響RNA剪接，但在I期臨床試驗(yàn)中靜脈注射時(shí)表現(xiàn)出顯著的毒性。最近的研究表明，在具有剪接體突變的晚期血液惡性腫瘤中，使用SF3B復(fù)合物H3B-8800的可口服調(diào)節(jié)劑，在耐受劑量良好的小鼠模型中顯示了優(yōu)先抗腫瘤活性。其他研究試圖通過(guò)使用介導(dǎo)其蛋白酶體降解的化合物作為干擾剪接的替代藥理學(xué)手段來(lái)調(diào)節(jié)選擇性和調(diào)節(jié)性剪接因子，如RBM39，在小鼠急性髓系白血病模型中獲得成功。RNA在癌癥中的廣泛改變將為治療提供大量的新機(jī)會(huì)。進(jìn)一步闡明RNA加工改變促進(jìn)腫瘤發(fā)生、生長(zhǎng)和進(jìn)展的基本機(jī)制，對(duì)于確保癌癥療法專門(mén)針對(duì)RNA加工過(guò)程且對(duì)正常細(xì)胞的影響最小至關(guān)重要。

首發(fā)公號(hào)：國(guó)家基因庫(kù)大數(shù)據(jù)平臺(tái)

參考文獻(xiàn)

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什么是外泌體？

什么是外泌體 人到中年，最難以啟齒的矛盾便是臉上越來(lái)越多的皺紋和內(nèi)心與日俱增的
“抗老需求”之間的矛盾。為了今天的容顏不被明天改變，什么玻尿酸、水光針甚至是干細(xì)胞美容，我都勇于“嘗鮮”。而作為美容界的后起之秀——“外泌體”，我更是不愿錯(cuò)過(guò)。畢竟它雖然是近兩年興起的美容模式，但其發(fā)展歷史也已經(jīng)有40多年了，而它的美容功效更是有口皆碑，比干細(xì)胞美容有過(guò)之而無(wú)不及，一時(shí)間，關(guān)于外泌體美容的宣傳鋪天蓋地，可謂是風(fēng)頭無(wú)兩，頗有“江湖大佬”的地位。但也正因?yàn)槿绱?，我們更要科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膶?duì)待外泌體美容，了解它的原理，才能更好的應(yīng)用它。

外泌體，從字面上看，就是細(xì)胞向外分泌的物體?？茖W(xué)釋義是：細(xì)胞所分泌的直徑為30~150nm的雙層磷脂囊泡，主要功效成分包括蛋白質(zhì)類物質(zhì)及micRNA類核酸物質(zhì)。

外泌體的作用機(jī)理 外泌體最大的功能便是人體的“通信兵”，它能在細(xì)胞間傳遞物質(zhì)，從而調(diào)控受體細(xì)胞的功能及生物學(xué)行為。通俗的說(shuō)，外泌體就好像一輛“細(xì)胞貨拉拉”，裝了自家一堆有用的東西（里面有miRNA，mRNA和lncRNA等小分子核酸，還有細(xì)胞因子等蛋白），然后分泌出細(xì)胞外，再接著進(jìn)入另一個(gè)細(xì)胞，進(jìn)行“卸貨搬家”。

希吉亞外泌體分離方法 外泌體天然存在于血液、尿液、唾液、母乳和細(xì)胞培養(yǎng)基等生物體液中，希吉亞外泌體的分離方法有很多種，常用的有超速離心法、免疫磁珠法等。

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超速離心法：超速離心法是大家最熟悉的一種分離方法，文獻(xiàn)中應(yīng)用最多且也是目前比較受到認(rèn)可的方法。超速離心是先通過(guò)低速離心去除細(xì)胞和細(xì)胞凋亡碎片，再通過(guò)超高速去除大囊泡和沉淀外泌體。此方法耗時(shí)耗力，往往需要8-30個(gè)小時(shí)；且需要大量的起始材料和超速離心機(jī)；產(chǎn)量不高。

希吉亞外泌體美容機(jī)制 ?
免疫磁珠法：利用外泌體表面特有的表面標(biāo)記物（如CD63、CD9蛋白），用包被抗標(biāo)記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合，即可將外泌體吸附并分離出來(lái)。該方法具有特異性高、操作簡(jiǎn)便、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點(diǎn)，但外泌體的生物活性易受pH和鹽濃度影響，不利于下游實(shí)驗(yàn)。

促進(jìn)細(xì)胞再生。外泌體可以有效刺激受體細(xì)胞，釋放細(xì)胞活力，促進(jìn)其再生和新生。因而可以幫助淡化祛除斑點(diǎn)，促使肌膚光亮細(xì)膩。

修復(fù)受損細(xì)胞。外泌體外泌體可以加速I(mǎi)型膠原和III型膠原的基因表達(dá)，促進(jìn)成纖維細(xì)胞增殖、膠原合成，從而讓幫助修復(fù)受損的肌膚屏障。而且它可以提高受損部位的修復(fù)能力和愈合能力。

抑制炎癥產(chǎn)生。外泌體可以誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞向M2型極化，從而降低了巨噬細(xì)胞誘發(fā)炎癥反應(yīng)的能力，從而抑制炎癥。我們肌膚的很多問(wèn)題都與肌底炎癥有關(guān)，而外泌體可以通過(guò)抑制炎癥來(lái)讓肌膚從內(nèi)而外的健康起來(lái)。

干細(xì)胞療法圍繞使用完整細(xì)胞來(lái)替代丟失的組織。相反，外泌體是與細(xì)胞分離的囊泡。外泌體促進(jìn)恢復(fù)青春活力的方式是利用外泌體中攜帶的有效成分來(lái)幫助其他細(xì)胞。

干細(xì)胞和外泌體的另一個(gè)主要區(qū)別是前者僅從身體的特定部位獲得，例如：骨髓、血液、脂肪組織。而外泌體，可以從幾乎所有類型的細(xì)胞中獲得。胎盤(pán)中也含有大量的外泌體。

通過(guò)上述科普，大家對(duì)外泌體美容一定有了更全面的認(rèn)識(shí)

如何高效率轉(zhuǎn)染免疫T細(xì)胞？

高效率轉(zhuǎn)染免疫T細(xì)胞是大家關(guān)心的問(wèn)題；

一、2020-2-19浙江大學(xué)附屬第二醫(yī)院乳腺外科,浙江大學(xué)附屬第二醫(yī)院浙江省療法腫瘤微環(huán)境與免疫重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室；聯(lián)合發(fā)表標(biāo)題為Breast cancer-derived exosomes transmit lncRNA SNHG16 to induce CD73+γδ1 Treg cells（乳腺癌衍生的外泌體傳遞lncRNA SNHG16誘導(dǎo)CD73 +γδ1 Treg細(xì)胞）的文章到nature.com/sigtrans雜志，文章已被接受；

二、本研究使用中使用Invigentech（英克）公司INVI DNA RNA 轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染質(zhì)粒DNA、siRNA到Vδ1 T?免疫T細(xì)胞里面；

三、本文中轉(zhuǎn)染質(zhì)粒DNA、siRNA，轉(zhuǎn)染細(xì)胞數(shù)量信息如下：

A.?將全長(zhǎng)2435 bp的序列克隆到pCR3.1載體中構(gòu)建SNHG16過(guò)表達(dá)載體;

B.?siRNA序列：SNHG16-homo-349，5′GCCUCUGCUGCUAAUUGUUTT-3'; SNHG16-homo-867，?5′-CCAAGGAGGGACUGUUUAATT-3′和SNHG16-homo-2004，5′-CCCAGUGUUGACUCACCAATT-3；

C.?轉(zhuǎn)染細(xì)胞用量：6孔板里面1 × 106 cells/well；

四、發(fā)表文章部分內(nèi)容如下：

Breast cancer-derived exosomes transmit lncRNA SNHG16?to induce CD73+γδ1 Treg cells

Plasmid construction and siRNA silencing?A full-length 2435 bp sequence was cloned into the pCR3.1 vector to

construct the SNHG16 overexpression vector. The sequences of?SNHG16-specifific siRNAs were as follows: SNHG16-homo-349, 5′GCCUCUGCUGCUAAUUGUUTT-3′; SNHG16-homo-867, 5′-CCAAGGAGGGACUGUUUAATT-3′ and SNHG16-homo-2004, 5′-CCCAGUGUUGACUCACCAATT-3′. The miR-16–5p mimics, inhibitor and negative

controls were purchased from GenePharma (SupplementaryTable S3).

To manipulate the expression of miR-16–5p in?Vδ1 T cells,?Vδ1T cells were sorted from peripheral blood and seeded into six-wellplates at 1 × 106 cells/well with 1 ml of medium supplementedwith 10% FBS, 10 μg/ml CD3, 10 μg/ml CD28 and 40 U/mL IL-2.Then,?transfection reagent (INVI DNA RNA Transfection Reagent,Invigentech, USA) and miR-16–5p mimics/NC/inhibitor/inhibitor?NC (20 μm) were incubated with the cells for 48 h, after which the?cells were collected for further experiments.

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