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2001-2003年期間，國內有一些企業(yè)和科研機構研發(fā)了一批纖維素酶應用于中藥制藥的技術與產品，并獲得了國內專利，但為數(shù)不多。纖維素酶主要應用于中藥有效成分地提取與制作，在這些專利中，除了僅采用纖維素酶外，還采用了纖維素酶與另一種或幾種酶組成的復合酶類酶解中藥，如應用纖維素酶、果膠酶、葡萄糖異構酶、淀粉酶、脂肪酶組成復合酶，對中藥進行酶解，以提高有效成分提取率的復合酶反應液。
該專利是由福建省的林陸山發(fā)明的，該發(fā)明是一種復合酶反應液，其特點是由復合酶、原生質液、酶促進劑、含微量元素的無機鹽、蒸餾水以及輔料所組成。該發(fā)明的復合酶反應液無毒，生物降解性能好，可廣泛用于中草藥、保健品、食品、飲料，通過對其原料的酶解發(fā)酵，提高酶解反應速度，提高有效成分的提取率，用于中藥工業(yè)無廢水、廢氣、廢渣，對環(huán)境保護有著重要意義。
該復合酶反應液的特征在于組成成分及其含量（以組分重量之和為100計）：復合酶2%－5％、原生質液4．5%－60％、酶促進劑5%－10％、蒸餾水10%－70％、含微量元素的無機鹽0．5%－16％、輔料3%－24％，所述的復合酶為纖維素酶、果膠酶、葡萄糖異構酶、淀粉酶、脂肪酶以2∶2∶3∶3∶3重量比的混合酶，所述的原生質液包括玉米漿、玉米粉、胡蘿卜汁、蛋清、蘋果汁、大豆粉、梨汁、蘿卜汁、青菜汁、苦瓜汁、豆油、牛乳、麥芽汁、白菜汁、蓮子汁、豆芽汁在內的一種、兩種或兩種以上的混合物，所述的酶促進劑包括酵母膏、吐溫80、紅曲粉在內的一種、兩種或兩種以上的混合物，所述的無機鹽包括KHzPO↓［4］、（NH↓［4］）↓［z］HPO↓［4］、KNO↓［3］、MgSO↓［4］、Na↓［2］SO↓［4］、ZnSO↓［4］、
醛亞胺
醛與伯胺在一定條件下發(fā)生親核加成反應后消除一分子水生成的產物
科普中國 | 本詞條由“科普中國”科學百科詞條編寫與應用工作項目審核
審閱專家 蒲富永
醛亞胺是指醛與伯胺在一定條件下發(fā)生親核加成反應后消除一分子水生成的產物，一般可以用通式RCH=NR1（R、R1可以是芳基也可以是烷基）表示。醛亞胺是亞胺的一種形式，亞胺也叫做席夫堿。
中文名
醛亞胺
外文名
aldimine
定義
醛與伯胺脫水生成的產物
分類
芳醛亞胺、脂肪族亞胺
相關學科
有機化學
簡介參與反應醛亞胺參與的轉氨作用TA說
簡介
醛與一級（伯）胺加成脫水縮合而成的產物叫做醛亞胺，其通式是RCH=NR1，R可以代表芳基，也可以代表烴基，相對應的是芳香亞胺和脂肪族亞胺。一般情況下芳香族醛亞胺的穩(wěn)定性比脂肪族的醛亞胺（通常不能分離得到）穩(wěn)定性強。芳香族醛亞胺因為存在共軛體系可以穩(wěn)定存在并能分離得到產物。醛亞胺是亞胺（席夫堿）的一種。亞胺有毒，對皮膚有刺激性。醛亞胺可視為醛中氧原子被NR1基團（R1可以是氫或有機基團）所取代得到的產物。若NR1中的R1=H，化合物為一級醛亞胺；若R1=烴基，則化合物為二級醛亞胺。醛亞胺是一種可參與多種反應的化合物，其應用在有機化學中隨處可見。若R1=OH，則稱為醛肟；若R3=NH2，則稱為腙。如圖1所示的一級醛亞胺和二級醛亞胺。
圖1 一級和二級醛亞胺的結構式
參與反應
聚合反應：醛、酮與胺反應很難得到穩(wěn)定的產物，一般實際意義不大。但是甲醛和胺反應生成不穩(wěn)定的醛亞胺中間體能進行聚合反應生成一個特殊的籠狀化合物，稱為烏洛托品或六亞甲基四胺，是制備樹脂和炸藥的原料，本身也具有消毒作用。如圖2所示的反應方程式：
圖2 烏洛托品形成的反應方程式
甲醛先和氨發(fā)生親核加成反應生成不穩(wěn)定的加成產物，脫水，聚合最終形成烏洛托品。
曼尼希反應（Mannich反應）：也稱作胺甲基化反應，是含有活潑氫的化合物（通常為羰基化合物）與甲醛和二級胺或氨縮合，生成β-氨基（羰基）化合物的有機化學反應。一般醛亞胺與α-亞甲基羰基化合物的反應也被看做曼尼希反應。反應的產物β-氨基（羰基）化合物稱為“曼尼希堿”（Mannich堿），簡稱曼氏堿。如圖3所示形成醛亞胺的機理：
圖3 曼尼希反應形成醛亞胺的機理
羰基質子化，胺對羰基發(fā)生親核加成，去質子，氮上的電子轉移，水離去，可以得到一個亞胺離子中間體。以二甲胺作原料，這個中間體為N,N-二甲基-亞甲基氯化銨，在70年代由Kinact等人首先發(fā)現(xiàn)。它具有很強的反應性，可以使很多在通常條件下難以進行的反應得以順利進行。
醛亞胺參與的轉氨作用
磷酸吡哆醛（英語：Pyridoxal phosphate；PLP）是維生素B6的活性形式。這種維生素主要包括三種天然有機化合物：吡哆醛、吡哆胺與吡哆醇。[1]
磷酸吡哆醛在所有轉氨基作用反應以及一些氨基酸的脫羧與脫氨反應中充當輔酶的角色。磷酸吡哆醛的醛基與氨基轉移酶中特定賴氨酸基團的ε-氨基之間形成希夫堿鍵（內部醛亞胺）。氨基酸底物中的α-氨基置換活性位點賴氨酸殘基的ε-氨基。生成的外部醛亞胺變得去質子化而形成一個醌型中間體，后者轉而在不同的位置上接受一個質子以形成一個酮亞胺。酮亞胺水解，使復合酶的氨基得到再生。如圖4所示具體的機理示意圖：
圖4 轉氨作用機制
目錄1拼音2英文參考3聚合酶鏈式反應的定義4聚合酶鏈反應的歷史回顧 4.1核酸體外擴增最早的設想4.2聚合酶鏈反應的發(fā)明 5聚合酶鏈反應相關技術的發(fā)展6其它擴增技術 6.1連接酶鏈反應 （A）6.2依賴核酸序列的擴增 （A）6.3轉錄依賴的擴增系統(tǒng) （A）6.4Qβ復制酶反應 （A） 7PCR技術的應用舉例：8PCR的基本原理和概念 8.1基本原理8.2參與PCR反應體系的因素及其作用 9聚合酶鏈式反應檢查 9.1聚合酶鏈式反應正常值9.2聚合酶鏈式反應臨床意義 10參考資料這是一個重定向條目，共享了聚合酶鏈式反應的內容。 1拼音 jù hé méi liàn fǎn yìng
2英文參考 polymerase chain reaction [WS/T 203—2001 輸血醫(yī)學常用術語]
PCR [WS/T 203—2001 輸血醫(yī)學常用術語]
3聚合酶鏈式反應的定義 聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction，PCR）是指由引物選擇性體外擴增DNA或RNA片段的檢測方法[1]。該方法在輸血領域可用于各種血型分型、骨髓移植配型、輸血傳播疾病病原體檢測等[1]。
聚合酶鏈式反應是體外酶促合成特異DNA片段的一種分子生物學實驗方法，主要由高溫變性、低溫退火和適溫延伸三個步驟反復的熱循環(huán)構成：即模板DNA先經高溫變性為單鏈，在DNA聚合酶和適宜的溫度下，兩條引物分別與兩條模板DNA鏈上的一段互補序列發(fā)生退火，接著在DNA聚合酶的催化下以四種脫氧核苷酸三磷酸（dNTPs）為底物，使退火引物得以延伸。如此反復，使位于兩段已知序列之間的DNA片段呈幾何倍數(shù)擴增。[2]
4聚合酶鏈反應的歷史回顧
5聚合酶鏈反應相關技術的發(fā)展 PCR及其相關技術的發(fā)展速度是驚人的。國際上分別于1988年和1990年在美國和 英國召開了第一屆和第二屆PCR技術專題研討會。第一屆會議主要討論了PCR的應用 與技術本身的優(yōu)化問題；第二屆會議的主要議題是人類基因組計劃與PCR的最新進 展。這充分體現(xiàn)了生物學家對PCR的重視。
（表）聚合酶鏈反應的相關技術
名 稱 主要用途 簡并引物擴增法擴增未知基因片段
巢居PCR提高PCR敏感性、特異性，分析突變
復合PCR同時檢測多個突變或病原
反向PCR擴增已知序列兩側的未知序列，致產物突變
單一特異引物PCR擴增未知基因組DNA
單側引物PCR通過已知序列擴增未知cDNA
錨定PCR分析具備不同末端的序列
增效PCR減少引物二聚體，提高PCR特異性
固著PCR有利于產物的分離
膜結合PCR去除污染的雜質或PCR產物殘留
表達盒PCR產生合成或突變蛋白質的DNA片段
連接介導PCRDNA甲基化分析、突變和克隆等
RACEPCR擴增cDNA末端
定量PCR定量mRNA或染色體基因
原位PCR研究表達基因的細胞比例等
臆斷PCR鑒定細菌或遺傳作用
通用引物PCR擴增相關基因或檢測相關病原
信使擴增表型分型（mapping）同時分析少量細胞的mRNA
6其它擴增技術 與PCR及其相關技術發(fā)展的同時，新的擴增技術也不斷誕生。這些技術各有利 弊，與PCR互為補充，有的可結合應用，共同構成了核酸體外擴增技術的大家族。我 們相信，隨著分子生物學技術的發(fā)展，這一家族一定會再涌現(xiàn)出新成員。
其它體外核酸擴增技術（表） 技術 應用 轉錄依賴的擴增系統(tǒng)（TAS） 檢測HIV 連接酶鏈反應（LCR） 檢測點突變 自主序列復制（3SR）系統(tǒng) 研究RNA，臨床應用、法醫(yī)學等 鏈替代擴增（SDA） 檢測、鑒定基因 Qβ復制酶系統(tǒng) 增加探針檢測敏感性 循環(huán)探針反應 增加探針檢測敏感性
LCR的基本原理為利用DNA連接酶。特異地將雙鏈DNA片段連接,經變性退火連 接三步驟反復循環(huán),從而使靶基因序列大量擴增。
LCR的擴增效率與PCR相當，用耐熱連接酶做LCR只用兩個溫度循環(huán)，94℃min變性 和65℃復性并連接，循環(huán)30次左右。其產物的檢測也較方便靈敏。目前該方法主要用 點突變的研究與檢測、微生物病原體的檢測及定向誘變等，還可用于單堿基遺傳病多 態(tài)性及單堿基遺傳病的產物診斷，微生物的種型鑒定，癌基因的點突變研究等。
NASBA主要用于RNA的擴增、檢測及測序。
其基本方法為：將引物,標本加入擴增反應液，65℃1min使RNA分子二級結構打 開,降溫至37℃加入逆轉錄酶,T7RNA聚合酶和RNase H,并在37℃反應1～1.5小時,其 產物經瓊脂糖電泳，溴乙錠染色即可在紫外儀下看到條帶。
NASBA的特點為操作簡便，不需特殊儀器，不需溫度循環(huán)。整個反應過程由三種 酶控制，循環(huán)次數(shù)少，忠實性高,其擴增效率高于PCR，特異性好。
TAS的主要特點是擴增效率高，因為其RNA拷貝數(shù)呈10的指數(shù)方式增加，只需6個 循環(huán)靶序列的拷貝數(shù)就能達到2×106。它的另一個特點是特異性高，由于TAS只能進行 6次溫度循環(huán)，錯摻率低，加之用葡聚糖珠夾心雜交，因而特異性也高。
雖然本法有較高的特異性和敏感性，但其循環(huán)過程復雜，需重復加入逆轉錄酶和 T7RNA多聚酶，有待進一步研究。
Qβ復制酶是一種RNA指導的RNA聚合酶，它有3個特點：①不需寡核苷酸引物的引 導就可啟動RNA的合成。②能特異地識別RNA基因中由于分子內堿基配對而形成的特有 的RNA折疊結構。③在Q β復制酶的天然模板MDV1 RNA的非折疊結構區(qū)插入一短的 核酸序列不影響該酶的復制?！∫蚨?，如在此區(qū)插入核酸探針，則其序列照樣可能被 Qβ復制酶擴增。
1988年Lizardi等，將靶基因序列 *** MDV1質粒里，用T7 RNA聚合酶催化轉錄 出MDV1 RNA探針，這種RNA探針可與靶序列雜交，然后洗去非雜交的探針,加入Qβ 復制酶來擴增探針，被擴增的探針又可作為模板進行擴增，并呈指數(shù)遞增。其產物 按上述兩種方法進行檢測?，F(xiàn)在該技術又發(fā)展了夾心雜交法，分子開關和靶依賴的復 制等技術。
7PCR技術的應用舉例： 研究：基因克隆；DNA測序；分析突變；基因重組與融合；鑒定與調控蛋白質結 合DNA序列；轉座子插入位點的繪圖；檢測基因的修飾；合成基因的構建；構建克隆 或表達載體；檢測某基因的內切酶多態(tài)性
診斷：細菌（螺旋體、支原體、衣原體、分支桿菌、立克次氏體、白喉桿菌、致 病大腸桿菌、痢疾桿菌、嗜水氣單胞菌和艱難梭菌等）；病毒（HTLV、HIV、HBV、 HPVS、EV、CMV、EBV、HSV，麻疹病毒、輪狀病毒、細小病毒B19）；寄生蟲（瘧疾 等）；人遺傳病（LeshNyhan綜合癥、地貧、血友病、BMD、DMD、囊性纖維化等）
免疫學：HLA分裂；T細胞受體或抗體多樣化的定性；自身免疫病基因作圖；淋巴因子定量
人類基因組工程：用散布重復序列產生DNA標志；遺傳圖譜的構建（檢測DNA、 多態(tài)性或 *** 繪圖）；物理圖譜的構建；測序，表達圖譜
法醫(yī)：犯罪現(xiàn)場標本分析；HLADQ
腫瘤：胰癌、結腸癌、肺癌、甲狀腺癌、黑色素瘤、血液惡性腫瘤
組織和群體生物學：遺傳聚類研究；動物保護研究；生態(tài)學；環(huán)境科學；實驗遺 傳學。
古生物學：考古與博物館標本分析
動物學：動物傳染病的診斷等
植物學：檢測植物病原等
8PCR的基本原理和概念
PCR是在試管中進行DNA復制反應，基本原理與體內相似，不同之處是耐熱的Taq酶取代DNA聚合酶，用合成的DNA引物替代RNA引物，用加熱（變性）、冷卻（退火、保溫（延伸）等改變溫度的辦法使DNA得以復制，反復進行變性、退火、延伸循環(huán)，就可使DNA無限擴增。PCR的具體過程如下：
將PCR反應體系升溫至95℃左右，雙鏈的DNA模板就解開成兩條單鏈，此過程為變性。然后將溫度降至引物的Km值以下，3'端與5'端的引物各自與兩條單鏈DNA模板的互補區(qū)域結合，此過程稱為退火。當將反應體系的溫度升至70℃左右時，耐熱的Taq DNA聚合酶催化四種脫氧核糖核苷酸按照模板DNA的核苷酸序列的互補方式依次加至引物的3'端，形成新生的DNA鏈。每一次循環(huán)使反應體系中的DNA分子數(shù)增加約一倍。理論上循環(huán)幾次，就增加為2^n倍。當經30次循環(huán)后，DNA產量達2^30拷貝，約為10^9個拷貝。PCR擴增過程見圖81。由于實際上擴增效率達不到2倍，因而應為（1+R）^n，R為擴增效率。
（一）模板核酸
用于PCR的模板核酸可以是DNA，也可以是RNA。當用RNA作模板時，首先要進行反轉錄生成cDNA，然后再進行正常的PCR循環(huán)。核酸模板來源廣泛，可以從培養(yǎng)細胞、細菌、病毒、組織、病理標本、考古標本等中提取。
PCR反應時加入的DNA模板量一般為100100000拷貝，現(xiàn)在的技術水平已能從單個細胞制備出相應的cDNA文庫。DNA模板含量合適，可以減少PCR多次循環(huán)帶來的堿基錯配。
通常模板DNA用線性DNA分子，若為環(huán)狀質粒，最好先用酶將其切開成線狀分子，因為環(huán)狀DNA復性太快。
（二）引物
引物決定PCR擴增產物的特異性與長度。因此，引物設計決定PCR反應的成敗。
PCR反應中有兩種引物，即5'端引物與3'端引物。5'端引物是指與模板5'端序列相同的寡核苷酸，3'端引物是指與模板3'端序列互補的寡核苷酸。對引物的基本要求有：①引物的長度過短會影響PCR的特異性，要求有1630bp，因為4^164.29x10^9，已大于哺乳動物基因組3x10^9bp，保證了特異性結合；引物過長使延伸溫度超過Taq DNA聚合酶的最適溫度（74度），亦會影響產物的特異性。②G+C的含量一般為40％60％。③四種堿基應隨機分布，不要有連續(xù)3個以上的相同嘌吟或嘧啶存在。尤其是引物3'端，不應有連續(xù)3個G或c，否則會使引物與核酸的G或c富集區(qū)錯誤互補，而影響PCR的特異性。④引物自身不應存在互補序列而引起自身折疊，起碼引物自身連續(xù)互補堿基不能大于3bp。⑤兩引物之間不應互補，尤其是它們的3'端不應互補。一對引物之間不應多于4個連續(xù)堿基有互補性，以免產生引物二聚體。④引物與非特異靶區(qū)之間的同源性不要超過70％或有連續(xù)8個互補堿基同源，否則導致非特異性擴增。①引物3'端是引發(fā)延伸的點。因此不應錯配。由于ATCG引起錯配有一定規(guī)律，以引物3'端A影響最大，因此，盡量避免在引物3'端第一位堿基是A。引物3'端也不要是編碼密碼子的第三個堿基，以免因為密碼子第3位簡并性而影響擴增特異性。⑧引物5'端可以修飾，包括加酶切位點，用生物素、熒光物質、地高辛等標記，引入突變位點，引入啟動子序列，引入蛋白質結合DNA序列等，引物的設計最好以電腦軟件進行指導。
反應體系中，引物濃度一般要求在O.10.5μmol之間。濃度太高，容易生成引物二聚體，或非特異性產物。
引物Tm值與退火溫度有關，計算公式為：Tm4（G+C）+2（A+T）。引物Tm值最好在5580℃范圍，以接近72℃為最好。
（三）耐熱的TaqDNA聚合酶
1976年Chien分離出熱穩(wěn)定聚合酶，1986年Erlich分離并純化了適于PCR的Tq熱穩(wěn)定性聚合酶，為PCR成為實用技術奠定了基礎，現(xiàn)已用基因重組生產。日前可用于PCR的聚合酶有多種：有從水生棲熱菌中提取的Taq酶、從嗜熱棲熱苗中獲得的Taq酶、從Litoralis棲熱球菌中分離的VENT酶、及從酸熱浴硫化裂片苗中分離的Sac酶，而以Taq酶用得最廣泛。Taq DNA聚合酶分子量為94kD，75℃時酶比活性為150bs/酶分子，反應溫度過高或過低均影響其延伸率，Taq蕾有很高的耐熱穩(wěn)定性。實驗表明，在92.5℃、95℃、97.5℃時，其半衰期分別為40min、30min和5min。
純化的Taq酶在體外無3'5'外切酶活性，因而無校正閱讀功能，在擴增過程可引起錯配。錯配堿基的數(shù)量受溫度、Mg2+濃度和循環(huán)次數(shù)的影響。通常，30次循環(huán)Taq酶的錯配率約為0.25％，高于Klenow酶的錯配率。Taq酶在每一次循環(huán)中產生的移碼突變率為1/30000，堿基替換率為1/8000。應用低濃度的dNTP（各20μmol／L）、1.5mmol/L的Mg2+濃度、高于55℃的復性溫度，可提高Taq酶的忠實性，此時的平均錯配率僅為5x10^6次/（核苷酸*循環(huán)）。
Taq酶具有類似于末端轉移酶的TdT的活性，可在新生成的雙鏈產物的3'端加上—個堿基，尤其是dATP最容易加上。因此，欲將PCR產物克隆到載體上，可以用兩種處理辦法：一是構建dT載體；二是用Klenow酶將3'端的A去掉，即在PCR反應后，先在99℃加熱10min滅活Taq酶，調整Mg2+濃度至510mmol/L，加入12U Klenow片段，室溫下作用1520min，3'端的A即被切去，
Taq酶還具有反轉錄活性。在23mmol/L Mg2+濃度下68℃時出現(xiàn)類似反轉錄酶的活性。若有Mg2+存在，則反轉錄活性更佳，利用這一活性，可直接用于RNAPCR，尤其是短片段的擴增。
以往用Taq酶進行PCR擴增，一般只能擴增小于400bp的DNA片段，經過對酶的結構與功能的改造，以及PCR方法學的改進，現(xiàn)已能擴增20kb以上的DNA分于。
Taq酶在PCR反應中加入的量也很重要，太少當然不好，太多一方面浪費，同時也導致非特異性擴增，通常每lOOμl反應液中含12.5U Taq酶為好。最好在0.55U范圍內確定最佳酶濃度。另一個問題是，雖然Taq酶是熱穩(wěn)定性較好的工具酶，也應注意在20℃貯存。
（四）緩沖液
緩沖液提供PCR反應合適的酸堿度與某些離子，常用1050mmol/L。TrisHCI（pH8.38.8）緩沖液。緩沖液中含有50mmol/L KCl有利于引物的退火。有人并加入小牛血清白蛋白（100μg/L）或明膠（0.0％）或Twen20（0.05％0.1％）或二硫基蘇糖醇（DDT，5mmol/L）等，認為這些物質可以保護Taq酶。
（五）Mg2+Taq酶的活性需要Mg2+。Mg2+濃度過低，Taq酶活力顯暑降低；Mg2+濃度過高，又使酶催化非特異性擴增。Mg2+濃度還影響引物的退火、模板與PCR產物的解鏈溫度、引物二聚體的生成等。Taq酶的活性只與游離的Mg2+濃度有關，而PCR反應體系中，dNTP、引物、DNA模板等中的所有磷酸基團均可與Mg2+結合而降低Mg2+的游離濃度。因此，Mg2+的總量應比dNTP的濃度高0.20.25mmol/L。如果反應體系中含有EDTA等螯合劑，也可結合掉一部分Mg2+。
為了獲得Mg2+的最佳濃度，可用下面的優(yōu)化法。首先在PCR緩沖液小不加入Mg2+，從配置的10mmol/L的Mg2+儲存液中取一定量加入到各反應管中，開始以0.5mmol/L的濃度梯度遞增（0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,……5.0mmol/L），由PCR反應后的電泳結果可確定Mg2+大概濃度范圍，再在該濃度的上下以0.2mmol/L遞增與遞減幾個濃度來精確確定Mg2+最適濃度。
（六）dNTP
dNTP為PCR反應的合成原料。每種dNTP濃度應相等，通常的濃度范圍為20200gmol/L，在此范圍內，PCR產物的量、反應的特異性與忠實性之間的平衡最佳。例如，當每種dNTP為20μmol/L時，理論上可以產生2.6μg的400bp的DNA。使四種dNTP的濃度保持在其Km值（1015μmol/L）以上，可保持堿基摻入的忠實性；若dNTP的濃度大于50mmol/L，則可抑制Taq酶的活性。
（七）反應溫度和循環(huán)次數(shù)
1．變性溫度與時間
PCR反應中變性這一步很重要，若不能使模板DNA和PCR產物完全變性，PCR反應就不能成功，DNA分子中G+C含量愈多，要求的變性溫度愈高。太高的變性溫度和時間又會影響Taq酶的活性，通常的變性溫度和時間分別為95℃、30s，有時用97℃、15s。雖然DNA鏈在變性溫度時兩鏈分離只需幾秒鐘，但反應管內部達到所需溫度還需要一定的時間，團此要適當延長時間。為了保證模板DNA能徹底變性．最好為710min，然后在以后的循環(huán)中，將變性步驟設為95℃/min。
擴增100300bp短片段時，還呵以用快速的兩步PCR法，即變性（9497℃）、退火及延長（5575℃）。
為防止在變性溫度時反應液的蒸發(fā)，可在反應管內加入12滴液體石蠟。
2．復性溫度和時間
復性溫度決定PCR的特異性，合適的復性溫度應低于引物Tm值的5℃。退火溫度過低，引起非特異性擴增；增高退火溫度，可提高擴增的特異性，因此要嚴格規(guī)定退火溫度。退火反應時間一般為1min。
在PCR開始的頭一次循環(huán)時，反應從遠低于Tm值的溫度開溫，由于Taq酶在低溫時仍具有活性，這時就可能因引物與模板非特異性配對面出現(xiàn)非特異性產物或出現(xiàn)引物二聚體 然后在以后整個PCR反應中，非特異性產物反復擴增，而使PCR嚴重失敗。為了盡量消除這種非特異性擴增，可以使用熱起動的方式，熱起動方法有幾種：一種方法是在PCR系統(tǒng)中加入抗Taq酶抗體?？贵w與Taq酶結合，使Taq酶活性受抑制。因此在開始時，雖然溫度低，引物可與與模板錯配，但因Taq酶沒有活性，不會引起非特異性擴增；當進行熱變性時，抗體在高溫時失活，Taq酶被釋放，就可發(fā)揮作用，在以后的延伸步驟進行特
異的DNA聚合反應。另一種熱起動法是用石蠟將Taq酶與PCR反應系統(tǒng)分隔，因此一開始在室溫條件下也沒有非特異性擴增。當升溫到熱變性溫度下，石蠟熔化，Taq酶與PCR反面系統(tǒng)混合，從而在以后的步驟中發(fā)揮作用。使用熱起動可以提高PCR擴增的特異性。
3．延伸溫度與時間
延伸溫度一般為72℃左右，此時Taq酶活性為每秒鐘摻入核苷酸35100個，2kb的片段用1min已足夠，若DNA片段較長，擴增時間可適當延長。延伸時間過長又可引起非特異性擴增。
4．循環(huán)次數(shù)
循環(huán)次數(shù)主要取決于最初靶分子的濃度，例如在初始靶分子為3x10^5、1.5x10^4、1x10^3和50拷貝數(shù)時，循環(huán)數(shù)可分別為2530、3035、3540從4045。過多的循環(huán)次數(shù)會增加非特異性產物量及堿基錯配數(shù)。PCR反應后期，擴增產物的增加并不成為指數(shù)方式，稱為平臺效應。平臺效應可能與下列因素有關：dNTP與引物濃度降低，酶對模板的比例相對降低，多次循環(huán)后酶活力降低，產物濃度增高后變性不完全而影響引物延伸。
（八）PCR儀
有多種進口與國產PCR儀。儀器的升降溫方式可有氣體加溫、水加溫及電熱塊加溫等。溫度、循環(huán)次數(shù)及時間等參數(shù)現(xiàn)多用電腦控制?？筛鶕?jù)需要選擇儀器。
由于PCR方法高度靈敏，少量的靶分子即可擴增至無限數(shù)。因此要防止PCR擴增產物污染環(huán)境而引起以后的PCR假陽性。為此，應將PCR儀及PCR產物檢測等過程與標本制備及PCR反應管的制備盡量在空間分開，最好在不同的房間進行。通?？蓪嶒灴臻g分為標本處理區(qū)、反應混合制備和PCR擴增區(qū)、產物分析區(qū)等。
9聚合酶鏈式反應檢查 聚合酶鏈式反應是一種在體外快速擴增特定基因或DNA序列的方法，故又稱為基因的體外擴增法。PCR技術類似于DNA的天然復制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。
異常結果： 各種疾病所致的異常，例如梅毒。①一期梅毒。即硬下疳 ，潛伏期2～4周，外生殖器部位發(fā)生暗紅色硬腫塊 、淺潰瘍 ，有軟骨樣硬度，周圍淋巴結腫大。②二期梅毒。在一期梅毒 1～2 個月之后，全身皮膚、粘膜發(fā)生對稱泛發(fā)皮疹、斑疹、丘疹、膿皰疹等。粘膜可發(fā)生粘膜斑、扁平濕疣，傳染性強。③三期梅毒。發(fā)生在感染后2～3年乃至10年，皮膚為樹膠樣腫，還可涉及骨、關節(jié)、心、血管，表現(xiàn)為主動脈炎、主動脈瓣閉鎖不全和主動脈瘤等，侵及神經為脊髓癆 ，全身麻痹 （ 麻痹性癡呆 ）等等。
生物學是一門研究生命現(xiàn)象和生命活動規(guī)律的學科。以下是我為您整理的關于高二下冊生物酶的研究與應用單元檢測題及解析的相關資料，希望對您的學習有所幫助。
高二下冊生物酶的研究與應用單元檢測題及解析
一、選擇題(本題共20小題，每小題2.5分，滿分50分)
1.下列不能表示酶活性高低的是()
A.一定條件下所催化的某一化學反應的反應速度
B.單位時間內，單位體積中反應物減少量
C.單位時間內，單位體積中酶的變化量
D.單位時間內，單位體積中產物的增加量
解析：選C。酶活性的高低用在一定條件下，酶所催化某一化學反應的反應速度來表示，酶反應速度用單位時間內、單位體積中反應物減少量或產物增加量來表示。單位時間內，單位體積中酶的變化量可以影響反應速度，卻不能表示酶活性的高低。
2.某同學為了驗證果膠酶的作用，設計了如下實驗
(1)取兩個100 mL的潔凈燒杯，編號為1號、2號。
(2)向兩個燒杯中分別加入20 mL的蘋果泥，向1號燒杯內加入2 mL的蒸餾水，向2號燒杯內加入2 mL的果膠酶。
(3)把這兩個燒杯放在水浴中保溫，并用玻璃棒攪拌。下面分析中正確的是()
A.1號燒杯為實驗組，2號燒杯果汁變澄清
B.2號燒杯為實驗組，1號燒杯果汁變澄清
C.1號燒杯為對照組，2號燒杯果汁變澄清
D.2號燒杯為對照組，1號燒杯果汁變澄清
解析：選C。由于該實驗是研究果膠酶的作用，所以加入果膠酶的燒杯為實驗組，加入蒸餾水的燒杯為對照組;果膠酶能夠把果膠分解成可溶性的半乳糖醛酸，使渾濁的溶液變澄清。
3.果膠酶的作用底物是果膠，下列有關敘述正確的是()
A.果膠是植物細胞壁以及胞間層的主要組成成分之一
B.果膠酶可催化果膠分解成可溶性的半乳糖，使得渾濁的果汁變澄清
C.果膠是由半乳糖聚合而成的一種高分子化合物
D.果膠酶就是果膠分解酶的簡稱
解析：選A。本題考查果膠和果膠酶的組成及其作用，同時考查學生對果膠酶作用原理的理解。本知識點常和細胞壁的成分、纖維素酶等知識相聯(lián)系。本題中果膠是由半乳糖醛酸聚合而成的生物大分子，被果膠酶水解后的產物是半乳糖醛酸，果膠酶是一類酶的總稱，包括多聚半乳糖醛酸酶、果膠分解酶和果膠酯酶。值得注意的是，不要把半乳糖醛酸和半乳糖混為一談。
4.如下圖曲線表示的是溫度和果膠酶活性之間的關系，此曲線不能說明的是()
A.在B點之前，果膠酶的活性和溫度成正相關;之后，成反相關
B.當溫度達到B點時，果膠酶的活性最高，酶的催化作用最強
C.A點時，果膠酶的活性很低，但隨著溫度升高，果膠酶的活性可以上升
D.C點時，果膠酶的活性很低，當溫度降低時，酶的活性可以恢復上升
解析：選D。從圖中可以看出隨著溫度的不斷升高，果膠酶的活性在上升，當溫度達到B點時，酶的活性達到最高;隨后，隨著溫度的繼續(xù)上升，酶的活性迅速下降。A點和C點相比，雖然酶的活性都很低，但是A點是低溫條件，對酶的分子結構無影響，所以，隨著溫度的上升，其活性也會不斷上升，C點是高溫條件，當溫度過高時，會破壞酶的分子結構，使酶的活性發(fā)生不可逆的變化。
5.有人測定了A、B、C、D四種植物體內多種酶的活性與溫度的關系，結果如圖表示。
根據(jù)圖中的信息，你認為在25 ℃條件下競爭能力最強的生物和對溫度適應范圍最廣的生物分別是()
A.B和D B.B和C
C.B和A D.A和C
解析：選B。酶活性具有一定的溫度范圍和適宜溫度，溫度過高，酶會失活;低溫抑制酶的活性;最適溫度下，酶活性最強，生物在此溫度下生活得最好，競爭力最強;酶活性的范圍越大，生物的生存溫度范圍就越廣。
6.加酶洗衣粉能夠除去衣物上的奶漬和血漬，主要是因為它含有()
A.脂肪酶 B.蛋白酶
C.淀粉酶 D.氧化酶
解析：選B。奶漬和血漬的主要成分是蛋白質，所以應考慮到洗衣粉中添加的是蛋白酶。
7.加酶洗衣粉中含有蛋白酶，不含有肽酶的原因是()
A.肽酶制備成本太高
B.肽酶會影響蛋白酶的活性
C.衣物上的大分子蛋白質變?yōu)槎嚯暮螅苋菀酌撀?/p>
D.蛋白酶把蛋白質全部水解為可溶性的氨基酸
解析：選C。加酶洗衣粉中含有蛋白酶，可以將血漬、奶漬等含有的大分子蛋白質水解為小分子多肽或氨基酸，這樣衣服上的污物較容易脫落，而肽酶的作用是把多肽水解為氨基酸，所以，加酶洗衣粉中沒有必要加入肽酶。
8.加酶洗衣粉不能用沸水溶解，這說明了酶的作用()A.適于低溫下催化 B.具有高效性
C.具有專一性 D.需適宜的溫度
解析：選D。酶催化需要一定的條件，即適宜的溫度和酸堿度。加酶洗衣粉在沸水(高溫)中，酶變性失活，失去催化作用。
9. 如圖為四位同學選擇不同溫度范圍進行的“探究溫度對加酶洗衣粉洗滌效果的影響”的實驗結果，其中選擇溫度范圍最合理的是()
A.①
B.②
C.③
D.④
解析：選B。由圖可知，①選擇的溫度范圍過高，③、④選擇的溫度范圍過低，都不能得到最適溫度的范圍。
10.市場上有一種加酶洗衣粉，即在洗衣粉中加入少量的堿性蛋白酶，它的催化活性很強，衣物上的汗?jié)n、血漬以及人體排放的蛋白質等遇到它，皆能被水解而除去。下列衣物中不能用該加酶洗衣粉洗滌的是()
①棉織品?、诿椘贰、垭婢]織品?、苄Q絲織品?、轀炀]織品?、弈猃埧椘?/p>
A.①②③ B.③④⑤
C.④⑤⑥ D.②④
解析：選D。本題考查了酶的有關知識，題中的毛織品、蠶絲織品中都含有蛋白質，在蛋白酶的作用下，可以被分解。因此，不能用加酶洗衣粉來洗滌。
11.下列驗證某種加酶洗衣粉需要的最適溫度的實驗，正確的是()
A.取一系列不同溫度、其他條件相同的水，加入相同的污物及等量加酶洗衣物，看哪一個溫度中酶的效果最好
B.在不同溫度的水中，加入不等量洗衣粉，看哪種效果好
C.將加酶洗衣粉加入30 ℃水中，發(fā)現(xiàn)不如加到45 ℃水中洗滌效果好，說明45 ℃為最適溫度D.將加酶洗衣粉與普通洗衣粉分別加入37 ℃的水中，洗滌同樣的污物，發(fā)現(xiàn)加酶洗衣粉效果好，說明加酶洗衣粉的最適溫度為37 ℃
解析：選A。該實驗的自變量為溫度，在對照實驗中，除了要觀察的變量之外，其他變量都應保持相同，則A正確，B錯誤。C選項可以說明加酶洗衣粉在45 ℃時比30 ℃時洗滌效果好，但不能說明45 ℃為最適溫度，C錯誤。37 ℃的水中，加酶洗衣粉比普通洗衣粉洗滌效果好，不能得出加酶洗衣粉的最適溫度，則D錯誤。
12.隨著生物技術的發(fā)展，酶在社會生產、生活中的應用越來越廣泛。下列說法錯誤的是()
A.利用酶生產某些化工產品，能顯著降低能耗、減少污染，節(jié)約成本
B.“加酶洗衣粉”的洗滌效果與水溫、酸堿度有關，與污物或衣物的性質無關
C.用于治療消化不良癥的腸溶多酶片含有多種消化酶，但嚼服后會失去療效
D.要較長時間保持酶活性，各種酶制劑都應保存在低溫的條件下
解析：選B。酶制劑的活性受溫度、酸堿度等條件的影響，在適宜條件下洗滌效果比較好，同時污物或衣物的性質也會影響到酶活性的發(fā)揮。
13.在生產高果糖漿的過程中，所需要的酶是()
①α-淀粉酶?、诠z酶 ③糖化酶?、芾w維素酶?、萜咸烟钱悩嬅浮、摞溠刻敲?/p>
A.①②③ B.④⑤⑥
C.①③⑤ D.②④⑥
解析：選C。高果糖漿的生產流程是：在α-淀粉酶作用下，淀粉形成糊精;經過糖化酶的催化作用，糊精形成葡萄糖;在葡萄糖異構酶作用下，葡萄糖就形成了果糖。
14.下列有關利用固定化酶技術生產高果糖漿的說法不正確的是()
A.葡萄糖與固定化葡萄糖異構酶接觸，轉化成的是果糖
B.從固定化酶反應柱下端流出的只有果糖
C.高果糖漿不會像蔗糖那樣誘發(fā)肥胖、糖尿病、齲齒和心血管疾病，對人類的健康更有益
D.酶溶解于葡萄糖溶液后，可從糖漿中回收
解析：選B。本題考查固定化酶的應用實例，反應柱下端的篩板不允許固定化酶顆粒通過，但是不影響反應物和產物的通過，因此下端流出的既有果糖，又有沒反應完的葡萄糖。
15.下列圖形依次表示包埋法、吸附法、交聯(lián)法、包埋法的一組是()
A.①②③④ B.④③②①
C.③①②④ D.④②③①
解析：選C?？疾槊腹潭ǖ姆椒皩γ糠N方法的原理的理解。
16.在制備固定化酵母細胞的實驗中，CaCl2溶液的作用是()
A.用于調節(jié)溶液pH B.用于進行離子交換
C.用于膠體聚沉 D.用于為酵母菌提供Ca2+
解析：選C。海藻酸鈉膠體在CaCl2這種電解質溶液的作用下，發(fā)生聚沉，形成凝膠珠，其作用機理是由于鹽離子的電荷與膠體微粒電荷相互吸引，形成更大的膠體顆粒，類似于人體紅細胞與抗凝集素之間的凝集反應。
17.酵母細胞的活化是指()
A.讓酵母細胞恢復運動狀態(tài)
B.讓酵母細胞在缺水狀態(tài)下休眠
C.讓酵母細胞內酶活性加倍
D.讓處于休眠狀態(tài)的酵母細胞重新恢復正常的生活狀態(tài)
解析：選D。在缺水狀態(tài)下，酵母細胞處于休眠狀態(tài)，在固定化之前，應先讓處于休眠狀態(tài)的酵母細胞重新恢復正常的生活狀態(tài)，即活化。
18.下列不屬于固定化酶作用的特點的是()
A.有利于酶與產物分解
B.可以被反復利用
C.能自由出入依附的載體
D.一種固定化酶一般情況下不能催化一系列酶促反應
解析：選C。本題考查固定化酶作用的特點。固定化酶由于酶被固定在不溶性的載體上，很容易與產品分離，同時酶也能反復使用，這是固定化酶的主要優(yōu)點。通常固定化酶的種類單一，所以不能催化一系列酶促反應(需要一系列的酶)。
19.在廢水處理中固定化細胞技術具有重要作用，用于處理含氮、氨豐富的廢水的微生物通常是()
①酵母菌?、谇嗝顾亍、巯趸毦、芊聪趸毦?/p>
A.①② B.③④ C.①③ D.②④
解析：選B。微生物去除氨、氮的原理是進行兩個階段的反應：好氧硝化、厭氧(缺氧)反硝化。固定化細胞技術主要優(yōu)勢是通過高濃度的固定細胞提高硝化和反硝化速度，使反硝化細菌保持較高的活性。
20.啤酒等放久后易產生蛋白質沉淀而使酒混濁，加入少量蛋白酶可以分解蛋白質，防止混濁，加入其他種類的酶則無濟于事，這個實驗可以鑒定()
A.酶的催化作用受環(huán)境的影響
B.酶的化學本質是蛋白質
C.酶的催化作用具有高效性的特點
D.酶的催化作用具有專一性的特點
解析：選D。對蛋白質起水解作用的酶是蛋白酶，這是由酶的專一性決定的。
二、非選擇題(本題共4小題，滿分50分)
21.(12分)酶解法制備原生質體的原理是利用酶溶液對細胞壁成分的降解作用。蝸牛酶液從蝸牛(以植物為食)消化腺中提取;果膠酶、纖維素酶從微生物中提取。為了研究不同酶液的酶解效果，其實驗小組取無菌煙草幼葉，切成相同大小的小片，等量放入6支試管中，試劑用量和實驗結果列于下表。請回答有關問題。
試管編號項目 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ Ⅵ 蒸餾水(mL) 2 0 1 1 1 1 緩沖液(mL) 0 2 1 0.5 0.5 0.5 果膠酶液(mL) 0 0 0 0.5 0 0 蝸牛酶液(mL) 0 0 0 0 0.5 0 纖維素酶液(mL) 0 0 0 0 0 0.5 實驗結果(綠色深淺程度) - - - +++ ++++ ++ (注：“+”越多表示綠色越深，“-”表示顏色無顯著變化)
(1)實驗過程中，需要輕搖試管，其目的是________________________________，使原生質體從葉小片中游離出來，以便觀察懸浮液綠色的深淺。
(2)從綠色的深淺可推測：蝸牛酶液酶解效果最好，原因是蝸牛酶液含有________________等多種酶。該實驗中__________是空白對照組，其設置意義是____________。
(3)用網篩過濾原生質體到離心管內，離心后收集沉淀物，并用______________洗滌。
(4)原生質體是否符合要求還需進行檢驗，其檢驗的方法是________________________。
解析：(1)輕搖試管的目的是為了使細胞壁與酶充分接觸，提高酶解效果。(2)蝸牛酶中含豐富的纖維素酶和果膠酶，所以酶解效果好。(3)必須用等滲溶液洗滌，否則會使原生質體破裂或變形。(4)把原生質體放入低滲溶液中，如果破裂說明原生質體制備成功。
答案：(1)為了使細胞壁與酶充分接觸，提高酶解效果 (2)果膠酶和纖維素酶 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 排除無關變量的干擾 (3)等滲溶液 (4)低滲漲破法
22.(12分)王小明同學設計了如圖所示的實驗，請根據(jù)實驗過程圖解，回答問題。
(1)該實驗的目的是探究________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(2)該實驗的自變量是______________，因變量是____________，無關變量是____________。
(3)分析實驗：該洗衣粉中的生理活性物質是________。實驗甲中紗布上蛋白膜消失的原因是________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
實驗乙中紗布上蛋白膜未消失的原因是________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
解析：本題考查了實驗分析與蛋白酶的作用原理。設計實驗應該遵循單一變量原則、對照原則和等量原則，該實驗中洗衣粉溶液的不同處理作為自變量，蛋白膜的消失情況與洗衣粉有關。甲組洗衣粉中含有蛋白酶，可以將紗布上的蛋白質水解，所以蛋白膜消失;乙組洗衣粉經過高溫處理，酶變性失活，因而蛋白膜沒有消失。
答案：(1)溫度對加酶洗衣粉洗滌效果的影響
(2)洗衣粉溶液的不同處理 蛋白膜的消失情況 洗衣粉溶液的用量、蛋白酶的面積、試管大小及潔凈程度高
(3)酶 洗衣粉中的酶催化蛋白質水解 煮沸使酶變性失活，不能水解蛋白質
23. (12分)從土壤的嗜堿性短小芽孢桿菌中首先分離選育到一株產生低溫型堿性蛋白酶的高產菌株。該菌株具有嗜堿性強、不易染菌、生產性狀穩(wěn)定等特點。該菌產堿性蛋白酶能力強，每毫升發(fā)酵活力達9000單位(28 ℃測定)、5000單位(20 ℃測定)和18000單位(40 ℃測定)，在全國5種堿性蛋白酶的性能比較中，該蛋白酶在28 ℃下所占有酶活力比例高于同類產品，表明具有低溫型酶的特性。該產品用于加酶洗衣粉，可提高去污力1～2倍，特別在常溫下對血漬、奶漬等蛋白質污垢有專一性的去污效果。
根據(jù)以上材料回答下列問題：
(1)從土壤中分離嗜堿性短小芽孢桿菌應用________(功能)培養(yǎng)基，從物理形態(tài)上應選用________培養(yǎng)基。
(2)為什么該菌株產的堿性蛋白酶的活力在不同溫度下發(fā)酵活力不同?
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(3)試分析該產品在常溫下對血漬、奶漬等蛋白質污垢有專一性的去污效果的原因。
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(4)若要比較添加該蛋白酶的洗衣粉與普通洗衣粉的洗滌效果，應注意控制實驗變量，請列舉均衡無關變量的措施(至少三條)。
①________________________________________________________________________;
②________________________________________________________________________;
③________________________________________________________________________。
(5)在日常生活中使用洗衣粉時，有人先用沸水溶解洗衣粉再浸泡衣物，該種方法能否用于題目中所說的加酶洗衣粉?為什么?
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
解析：(1)培養(yǎng)基中加入某種化學物質，以抑制不需要的微生物的生長，促進所需要的微生物的生長，稱為選擇培養(yǎng)基，其用途是培養(yǎng)、分離出特定微生物;固體培養(yǎng)基用于微生物的分離、鑒定、活菌計數(shù)等。(2)酶的活性受溫度影響，最適溫度下酶的活性最高，當溫度低于最適溫度時，隨著溫度的升高其活性逐漸增強。(3)酶的專一性特點，一種酶只能催化一種或一類化學反應，血漬、奶漬的主要成分為蛋白質，蛋白酶能分解蛋白質，但不能分解其他成分。(4)實驗設計方案中要考慮控制變量，以減少實驗誤差，增強實驗可信度?？刂谱兞靠蓮拿缸饔玫牡孜?、作用的時間及作用的條件等方面采取措施。(5)酶的本質是蛋白質，遇沸水會變性失活從而失去催化蛋白質類污垢分解的功能。
答案：(1)選擇 固體 (2)酶作為生物催化劑，其活力受溫度影響，在最適溫度下酶的活性最強 (3)酶具有專一性的特點，即一種酶只能催化一種或一類化學反應，所以蛋白酶只能將血漬、奶漬等蛋白質污垢分解，對其他類型污垢不起作用 (4)①使用兩種洗衣粉的量相同 ②被洗滌的布料及污漬狀態(tài)相同?、巯礈鞎r所用水量及溫度(一般為常溫)相同 ④浸泡和洗滌的時間相同(答出三條即可) (5)不能。因為堿性蛋白酶的成分為蛋白質，遇高溫會變性失活而失去催化功能
24.(14分)酵母菌是一種單細胞真菌，釀酒和做面包都需要酵母菌，根據(jù)所學知識回答下列問題
(1)在探究培養(yǎng)液中酵母菌種群的數(shù)量變化的實驗中，某學生的部分實驗操作過程是這樣的：①從靜置試管中吸取酵母菌培養(yǎng)液進行計數(shù)，記錄數(shù)據(jù);②把酵母菌培養(yǎng)液放置在冰箱中;③第七天再取樣計數(shù)，記錄數(shù)據(jù)，統(tǒng)計分析繪成曲線。請糾正該同學在實驗操作過程中的錯誤：
①________________________________________________________________________;
②________________________________________________________________________;
③________________________________________________________________________。
(2)下面流程圖表示制備固定化酵母細胞的過程：酵母細胞活化→配制CaCl2溶液→配制海藻酸鈉溶液→海藻酸鈉溶液與酵母細胞混合→固定化酵母細胞。
①圖中酵母菌活化就是________________________________________________________________________。
②影響此實驗成敗的關鍵步驟是________________________________________________________________________，
此步的操作應采用________________________。
③觀察形成的凝膠珠顏色和形狀：如果顏色過淺，說明________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
④本實驗所用的固定化技術是________，而制備固定化酶則不宜用此方法，原因是________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
解析：(1)為了使培養(yǎng)液中的酵母菌混合均勻，在從試管中吸出培養(yǎng)液進行計數(shù)之前，應該將試管輕輕振蕩幾次;酵母菌正常生長、繁殖需要適宜的溫度;本實驗的目的是探究培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化，所以應該每天取樣計數(shù)，記錄數(shù)據(jù)，統(tǒng)計分析繪成曲線。(2)在缺水的狀態(tài)下，微生物會處于休眠狀態(tài)?；罨褪亲屘幱谛菝郀顟B(tài)的微生物重新恢復正常的生活狀態(tài);加熱使海藻酸鈉溶化是操作中最重要的一步，涉及到實驗的成敗;如果海藻酸鈉的濃度偏低則凝膠珠的顏色偏淺;固定化細胞技術包括包埋法、化學結合法和物理吸附法，由于細胞個大，因此多采用包埋法，酶分子小，容易從包埋材料中漏出，不宜采用包埋法。
答案：(1)①將試管輕輕振蕩幾次，再吸取酵母菌培養(yǎng)液進行計數(shù)
②應將酵母菌培養(yǎng)液放置在適宜溫度下培養(yǎng)
③應連續(xù)七天，每天觀察、取樣計數(shù)并記錄數(shù)據(jù)
(2)①讓酵母菌恢復正常生活狀態(tài)
②配制海藻酸鈉溶液 小火或間斷加熱
③海藻酸鈉的濃度偏低
復合酶是可以實現(xiàn)多酶的催化功效的產品，由抗氧化酶，溶菌酶等多種酶組成，主要功能包括：抑菌、清除自由基、抗衰老、消除炎癥反應、保護修復皮膚和粘膜屏障等。饅頭粉主要是用來改良面制品的品質的。所以，我們通常在制作饅頭、包子、花卷等面制品的時候都可以使用。 并且，饅頭粉的使用可以適當?shù)脑龃竺嬷破返捏w積，以此來提高面制品表面光潔度，改善內部組織結構，提高細膩感等。 饅頭粉改良劑作用與效果：改善面團的流變特性，提高面團的操作性能和機械加工性能。顯著增大成品體積，約10-30%。使成品表皮光滑、潔白、細膩、亮澤。使成品內部組織結構均勻、細密。使成品柔軟、彈性好，口感綿軟筋道。延緩成品老化，延長貨架期。
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