主要是利用顯微鏡觀察藥材的內(nèi)部組織構(gòu)造、細(xì)胞形狀及其后含物的特征,用以鑒定藥材的真?zhèn)魏图兌?,甚至品質(zhì)。同時,應(yīng)用顯微化學(xué)的方法還可以確定某些成分在組織中的分布,對指導(dǎo)藥材的鑒定、采收、功工和貯藏都有參考價值。對于僅通過性狀不易識別的藥材、性狀相近的多來源藥材或切碎和粉末狀態(tài)的藥材,以及用粉末制成的中藥成方制劑,顯微鑒定尤其重要。
(1)藥材的顯微鑒定
根據(jù)觀察的對象和目的,制作不同的切片,如橫、縱切片,表面片,解離組織片,粉制片,花粉粒與孢子制片等,并配合各種組織、細(xì)胞或后含物的透化劑、染色劑、顯色劑,可以達(dá)到對藥材的有效鑒定。如大黃的大型簇晶,甘草的晶鞘纖維,黃連的黃色石細(xì)胞,人參的樹脂道,何首烏、牛膝的異常構(gòu)造,華山參的木內(nèi)韌皮部,貝母的淀粉粒,麻黃的氣孔,松花粉的花粉粒,金銀花的毛茸等都有獨(dú)特之處;來源于四科的大青葉可通過葉表面觀的氣孔式、毛茸、結(jié)晶等相互區(qū)別。
由于掃描電子顯微鏡的應(yīng)用,使顯微鑒定的水平進(jìn)一步提高,而且,藥材不需制作切片和染色,即可直接進(jìn)行表面或斷面的觀察,獲得細(xì)微的三維結(jié)構(gòu)特征。如黨參、何首烏、雞血藤的導(dǎo)管,石斛的葉鞘,白頭翁的葉柄基(白毛),紅花、金銀花、洋金花的花粉粒等的超微結(jié)構(gòu),都提供了新的顯微鑒別依據(jù)。
(2)中藥成方制劑的顯微鑒定
中成藥多有粉末直接入藥者,常由數(shù)種、十幾種及至數(shù)十種粉末藥材組成,素有“丸、散、錠、丹,神仙難辨”之說。然而,通過掌握各組成藥材的組織粉末特征,完全可以對中成藥進(jìn)行顯微鑒定。如徐國鈞等在50年代首先進(jìn)行了“南京靈應(yīng)痧藥”的顯微鑒定,成功地檢出了麝香、蟾酥、天麻、麻黃、蒼術(shù)、甘草、丁香、大黃、雄黃、朱砂等組成藥物。其他如六味地黃丸、十全大補(bǔ)九、海馬補(bǔ)腎丸、石斛夜光丸的鑒定,特別是《中華人民共和國藥典》(1995年版)收載的最大復(fù)方“再造丸”,共由58味植、動、礦物藥組成,能夠逐一檢出對應(yīng)于每一組成藥材的細(xì)胞組織特征。顯微鑒定對于中成藥的鑒定,至今仍不失為行之有效的方法。
顯微鑒別系指用顯微鏡對藥材的切片、粉末、解離組織或表面制片及成方制劑中藥味的組織、細(xì)胞或內(nèi)含物等特征進(jìn)行鑒別的一種方法。
鑒別時選擇有代表性的樣品,根據(jù)各該藥材鑒別項的規(guī)定制片。成方制劑根據(jù)不同劑型適當(dāng)處理后制片。
一、橫切片或縱切片:選取藥材適當(dāng)部位,軟化后用徒手或滑走切片法,切成10~20μm的薄片,選用甘油醋酸試液、水合氯醛試液或其它試液處理后觀察。必要時可包埋后切片。[醫(yī) 學(xué)教育網(wǎng) 搜集 整理]
二、粉末制片:取粉末少量,置載玻片上,攤平,選用甘油醋酸試液、水合氯醛試液或其它適當(dāng)試液處理后觀察。
三、表面制片:將樣品濕潤軟化后,切取一部分或撕取其表皮,加適宜的試液觀察。
四、解離組織片:如樣品中薄壁組織占大部分,木化組織少或分散存在,可用氫氧化鉀法;如果品堅硬,木化組織較多或集成較大群束,可用硝鉻酸法或氯酸鉀法。在解離前,應(yīng)先將樣品切成寬或厚約2mm的小條或片。
1.氫氧化鉀法
置樣品于試管中,加5%氫氧化鉀溶液適量,加熱至用玻璃棒擠壓能離散為止,傾去堿液,加水洗滌后,取出少量置載玻片上,用解剖針?biāo)洪_,以稀甘油裝置觀察。
2.硝鉻酸法
置樣品于試管中,加硝鉻酸試液適量,放置,至用玻璃棒擠壓能離散為止,傾去酸液,加水洗滌后,照1.法操作裝置。
3.氯酸鉀法
置樣品于試管中,加硝酸溶液(1→2)及氯酸鉀少量,緩緩加熱,待產(chǎn)生的氣泡漸少時,再及時加入氯酸鉀少量,以維持氣泡穩(wěn)定地發(fā)生,至用玻璃棒擠壓能離散為止,傾去酸液,加水洗滌后,照1.法操作裝置。
五、花粉粒與孢子制片:取花粉、花藥(或小的花朵)或孢子囊群(干燥樣品浸于冰醋酸中軟化),用玻璃棒搗碎,過濾于離心管中,離心,取沉淀加新鮮配制的醋酐與硫酸(9∶1)的混合液1~3ml,置水浴上加熱2~3分鐘,離心,取沉淀,用水洗滌2次,加50%甘油與1%苯酚3~4滴,用品紅甘油膠封藏觀察。也可用水合氯醛試液裝置觀察。[醫(yī)學(xué)教育網(wǎng) 搜集 整理]
六、細(xì)胞及細(xì)胞內(nèi)含物等的測量:在顯微鏡下測量細(xì)胞及細(xì)胞內(nèi)含物等的大小,可用目鏡測微尺測量。先將目鏡測微尺裝入目鏡內(nèi),用鏡臺測微尺標(biāo)化。標(biāo)化時,轉(zhuǎn)動目鏡,移動鏡臺測微尺,使兩種量尺的刻度平行,左邊的“0” 刻度重合,再找第二條重合刻度。根據(jù)兩條重合刻度間兩種量尺的小格數(shù),計算出目鏡測微尺每小格在該物鏡條件下所相當(dāng)?shù)拇笮。é蘭)。測量時,以目鏡測微尺測量目的物的小格數(shù),乘以每一小格的大?。é蘭)。通常是在高倍物鏡下進(jìn)行,但欲測量較長的如纖維、非腺毛等的長度時,則以在低倍物鏡下測量較為方便。記錄值與最小值(μm),可允許有少量略高或略低于藥典規(guī)定的數(shù)值。
七、細(xì)胞壁性質(zhì)的檢定:
1.木質(zhì)化細(xì)胞壁
加間苯三酚試液1~2滴,稍放置,加鹽酸1滴,因木化程度不同,顯紅色或紫紅色。
2.木栓化或角質(zhì)化細(xì)胞壁
加蘇丹Ⅲ試液,稍放置或微熱,顯橘紅色至紅色。
3.纖維素細(xì)胞壁
加氯化鋅碘試液;或先加碘試液濕潤后,稍放置,再加硫酸溶液(33→50);顯藍(lán)色或紫色。
4.硅質(zhì)化細(xì)胞壁
加硫酸無變化。
八、細(xì)胞內(nèi)含物性質(zhì)的檢定:
1.淀粉粒
(1)加碘試液,顯藍(lán)色或紫色。
(2)用甘油醋酸試液裝置,置偏光顯微鏡下觀察,未糊化的淀粉粒顯偏光現(xiàn)象;已糊化的無偏光現(xiàn)象。
中藥材的鑒別方法有很多,通??煞譃閷χ参镒匀恍螒B(tài)的鑒別,對炮制藥材外表性狀的鑒別,用顯微鏡觀察微觀結(jié)構(gòu)的鑒別,以及化學(xué)分析、生物測定等鑒別方法。其中最主要、也是最常用的,還是中藥材的經(jīng)驗鑒別法,也就是對藥材的外觀性狀的鑒別。
以下幾種常用而簡單的鑒別方法:?
一、看外觀,注意觀察藥材的外表特征,如表皮、顏色、形狀、粗細(xì)、斷面等等。
1、看藥材的表面。不同種類的藥材由于用藥部位的不同,其外形特征會有所差異。如根類藥材多為圓柱形或紡錘形,而根莖類藥材都有較多的莖痕,皮類藥材則多為卷筒狀,等等。另外,一些藥材有著它們自己特定的表面特征,或光華、或粗糙、或長有鱗葉、皮孔、茸毛和突起等。比如海馬的外形就被總結(jié)成為“馬頭蛇尾瓦楞身”,羚羊角長有“通天眼”,防風(fēng)長有“蚯蚓頭”等。這些特征都是鑒別道地藥材真?zhèn)蝺?yōu)劣的重要依據(jù)。
2、看顏色。藥材顏色的不同或變化,不僅與它的品種和本身的質(zhì)量有關(guān),不適當(dāng)?shù)募庸ず蛢Σ胤椒ㄒ矔苯佑绊懰幉牡纳珴?,因此顏色是鑒別藥材的重要因素。我們可以通過對藥材外表顏色的觀察,分辨出藥材的品種、產(chǎn)地和質(zhì)量的好壞。比如,黃連色要黃,丹參色要紅,玄參色偏黑等。
3、看斷面。無論植物也好,動物也好,都是由一層層的組織器官構(gòu)造而成的,當(dāng)藥材被切開,這一層層的構(gòu)造就會清晰地展現(xiàn)出來,就像古樹的年輪一樣。很多藥材的斷面都具有明顯的特征,而這些特征就是藥材內(nèi)部構(gòu)造的直接體現(xiàn)。我們可以清楚的看見各種分層、紋路和不同形狀的小點(diǎn)。比如在防己斷面上能看見明顯的車輪紋理,而黃芪的折斷面紋理呈“菊花心”樣,杜仲在折斷時更有膠狀的細(xì)絲相連,等等。這些獨(dú)有的斷面特征是鑒別藥材的重要依據(jù)。
用手感受藥材的軟硬、輕重,疏松還是致密,光滑還是粘膩,細(xì)致還是粗糙,以此鑒別藥材的好壞。不同藥材的質(zhì)感是不一樣的,即使是同一種藥材,由于加工炮制的方法不同,也會有較大的差異。如荊三棱堅實體重,而泡三棱則體輕;鹽附子質(zhì)軟,而黑附子則質(zhì)地堅硬。
三、口嘗和鼻聞。
藥材的氣味與其所含的成分有關(guān),鼻聞是比較重要的鑒別方法,尤其對于鑒別一些有濃郁氣味的藥材是很有效的,如薄荷的香、魚腥草的腥、阿魏的臭等等??趪L法鑒別藥材的意義不僅在于味道還包括“味感”,味分為辛、甘、酸、苦、咸五味,如山楂的酸、黃連的苦、甘草的甜等。味感則分為麻、澀、淡、滑、涼、膩等。藥材的味感和所含的化學(xué)物質(zhì)也有密切關(guān)系,在中藥材口嘗鑒別的實踐中,可按藥材的品種和質(zhì)量分類進(jìn)行判斷。
四、水試和火試。
有些藥材放在水中,或用火燒灼一下會產(chǎn)生特殊的現(xiàn)象。如熊膽的粉末放在水中,會先在水面上旋轉(zhuǎn),然后成黃線下沉而不會擴(kuò)散。麝香被燒灼時,會產(chǎn)生濃郁的香氣,燃盡后留下白色的灰末。這些特殊的現(xiàn)象都與藥材內(nèi)所含的化學(xué)成分有密切的關(guān)系,是常用的鑒別方法。?
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